基于能力验证活动对玉米真菌毒素快检技术的评价

玉米原粮贸易过程中,真菌毒素快检是主要的卫生指标检测技术之一,但由于真菌毒素在原粮中的污染通常分布极不均匀,造成了检测数据差异大,准确性难于评估等问题。本研究通过广泛筛查玉米原粮天然真菌毒素污染物,研制满足均匀性、稳定性要求的玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)质量控制样品。通过组织行业内企业参加原粮检测化验室能力验证活动,评价粮食中真菌毒素快检技术的应用情况。本研究报名参加毒素快检能力验证共153家企业,其中仓储粮库占36%、饲料养殖企业占64%。实验室遍布17个省、市、自治区,均采用食品快速检验技术检测并报送数据。DON及ZEN能力验证稳健CV分别为26%及29%,一定程度上反应了原粮毒素快检的实际使用情况,为提升快检技术及实验室原粮检测能力提供行业数据支持。

超导体包被免疫荧光试纸法同时测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮适用性研究

为了能同时快速测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)两种毒素,采用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术,检测了多个玉米样品,结合加标回收率、稳定性、检出限、精密度等指标,并与液相色谱法的检测结果进行比较分析,评估方法的适用性。结果表明,超导体包被的免疫荧光试纸法检测DON含量在100~2500μg/kg,检测ZEN含量在5~200μg/kg的范围内线性良好。DON在500~2000μg/kg添加水平范围内,回收率为103.72%~108.17%,ZEN在50~150μg/kg添加水平范围内,回收率为97.81%~111.27%。该方法于液相色谱法检测结果对比,DON相对偏差在3.72%~8.17%,ZEN相对偏差在2.19%~11.27%,均低于液相色谱法允许偏差23%和15%,超导体包被的免疫荧光试纸法是一种有效、实用、快速、定量的分析方法,能满足同时检测玉米中DON和ZEN的要求。

基于超导体包被的免疫荧光快检试纸法同时测定玉米中3种毒素的适用性研究

应用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术,建立了一种AFB1-ZEN-DON三合一联检卡法,可同时快速测定玉米中的黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)三种常见真菌毒素。对质控样准确度、加标回收率、检测限、定量限进行测定,检测多个玉米样品并与液相色谱法的检测结果进行对比,评估方法的适用性。结果表明,AFB1-ZEN-DON三合一联检卡检测AFB1含量在0.5~30μg/kg,ZEN含量在5~200μg/kg,DON含量在100~2 500μg/kg的范围内线性良好。AFB1在5~20μg/kg加标量范围时,回收率为97.62%~99.37%,ZEN在50~150μg/kg加标量范围时,回收率为98.03%~104.07%, DON在500~2000μg/kg加标量范围时,回收率为102.49%~108.53%。与液相色谱法相比,使用该方法检测AFB1相对偏差在–2.84%~11.91%,ZEN相对偏差在–3.43%~18.12%,DON相对偏差在1.83%~12.91%,均在液相色谱法允许偏差20%、15%和23%之内。该方法检测AFB1检测限为0.41μg/kg,定量限为1.12μg/kg;ZEN检测限为3.22μg/kg,定量限为9.15μg/kg;DON检测限为35.42μg/kg,定量限为100.84μg/kg。通过研究证明,AFB1-ZEN-DON三合一联检卡是一种有效、准确、快速的方法,能满足同时检测玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的要求。

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原(DON-BSA)为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=-0.562x+0.921,R^(2)=0.990,IC_(50)为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=-0.543x+1.485,R^(2)=0.991,IC_(50)为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。

不同杀菌剂对小麦赤霉病及籽粒DON毒素的控制效果

为探明不同杀菌剂对小麦赤霉病和小麦籽粒DON毒素(包括DON、3-ADON和15-ADON)的控制效果,采用菌丝生长速率法测定了12种药剂对禾谷镰刀菌野生型菌株PH-1的室内活性,同时采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS)测定了这些药剂对DON毒素的抑制效果,并开展了小麦赤霉病及籽粒DON毒素的田间防治试验。结果表明,12种原药对菌丝生长抑制活性强弱依次为氟唑菌酰羟胺>咪鲜胺>戊唑醇>丙硫菌唑>叶菌唑>氰烯菌酯>氟环唑>多菌灵>甲基硫菌灵>吡唑醚菌酯>嘧菌酯>井冈霉素A。氟环唑EC_(50)和EC_(90)离体胁迫均刺激DON毒素产生,其他杀菌剂EC_(50)和EC_(90)胁迫均抑制DON毒素产生。田间试验结果表明,200 g/L氟唑菌酰羟胺SC、30%丙硫菌唑OD和20%叶菌唑WP病指防效和DON防效为87.68%~94.77%;430 g/L戊唑醇SC、25%氰烯菌酯SC、45%咪鲜胺EW、25%氟环唑SC、50%多菌灵WP和70%甲基硫菌灵WP病指防效和DON防效为57.63%%~85.49%;250 g/L吡唑醚菌酯EC和250 g/L嘧菌酯SC病指防效分别为72.18%和51.98%,DON防效分别为43.06%和-7.96%;24%井冈霉素A AS病指防效和DON防效分别为42.37%和62.87%。药剂离体和田间控毒效果不完全一致,赤霉病有效防控是DON防控的前提,病害防效与DON防效不完全一致,本研究为小麦赤霉病及籽粒DON毒素防控提供了科学依据。

大曲中呕吐毒素提取方法的研究

主要探讨了酶联免疫法检测大曲中呕吐毒素的提取条件;分别考察了超声波提取时间、超声波提取功率、甲醇浓度对呕吐毒素提取效果的影响;用正交设计找出了最佳工艺参数:甲醇浓度为50%(v/v),提取时间为20min,提取功率为200W。采用本提取工艺所得呕吐毒素提取率明显高于国标。本研究可为大曲中呕吐毒素的检测提供简便、准确、可靠的分析方法。

小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)积累及其与容重的相关性分析

【目的】探明自然发病条件下不同小麦品种籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)积累量及其对籽粒赤霉病病粒率(FDK)和容重的影响,为小麦抗赤霉病品种选育提供参考。【方法】利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定65份不同来源小麦品种籽粒中DON、3A-DON(3-acetyldeoxynivalenol)、15A-DON(15-acetyldeoxynivalenol)含量,分析不同DON含量下籽粒赤霉病病粒率(FDK)和容重(TW)的差异。【结果】65份小麦品种籽粒的FDK为0.20%~7.80%、DON含量为0.11~4.26 mg/kg、容重为703.00~791.70 g/L。FDK与DON、3A-DON、15A-DON和DON-Total含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数分别为0.514、0.549、0.529和0.521;与容重呈显著负相关(P<0.05),相关系数为-0.254。籽粒中DON、3A-DON、15A-DON与DON-Total含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数分别为0.999、0.911、0.899;与容重呈极显著负相关(P<0.01),相关系数分别为-0.502、-0.504、-0.481。从不同品种来源看,籽粒中DON积累量表现为江苏(1.51 mg/kg)<安徽(2.06 mg/kg)<河南(2.75 mg/kg)<山东(2.98 mg/kg);3A-DON含量表现为江苏(0.047 mg/kg)<安徽(0.075 mg/kg)<山东(0.111 mg/kg)<河南(0.113 mg/kg);15A-DON表现为江苏(0.059 mg/kg)<安徽(0.090 mg/kg)<山东(0.132 mg/kg)<河南(0.141 mg/kg);DON-Total表现为江苏(1.61 mg/kg)<安徽(2.23 mg/kg)<河南(3.00 mg/kg)<山东(3.23 mg/kg)。小麦籽粒中DON≤2 mg/kg的品种数及占比表现为安徽(18个,64.29%)>江苏(13个,61.90%)>山东(2个,22.22%)>河南(1个,14.29%);容重均值表现为江苏(758.57 g/L)>安徽(751.90 g/L)>河南(739.71 g/L)>山东(735.27 g/L)。从不同品种特性看,筛选出8个DON≤2 mg/kg且容重≥770.00 g/L的小麦品种,其中,半冬性品种7个,分别为淮麦40、淮麦44、农麦152、荃麦725、涡麦9号、徐农029、淮麦45;春性品种1个,为国红6号。【结论】65份小麦品种籽粒FDK、DON含量和容重差异较大;随着FDK的增大,籽粒中3A-DON、15A-DON及DON-Total的积累量逐渐增加,平均容重下降。淮麦40、淮麦44、农麦152、荃麦725、涡麦9号、徐农029、淮麦45、国红6号抗赤霉病较好。

10种植物性饲料原料中3种霉菌毒素的污染分析和危害控制

通过对97份10种植物性饲料原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素3种霉菌毒素的采样检测,分析了解3种霉菌毒素的污染状况,为饲料生产企业和养殖企业掌握植物性饲料原料中3种霉菌毒素的污染情况,减少霉菌毒素污染危害采取的应对措施提供参考。

玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定能力验证结果分析

目的分析实验室对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)的检测能力验证结果。方法设计制备玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇考核样品,对样品的均匀性和稳定性进行检验。采用稳健统计法A对32家实验室提交的32个有效结果进行统计,通过Z比分数评价实验室检测能力,并对统计方式的合理性进行分析比较。结果制备样品的均匀性稳定性符合能力验证样品要求,32家实验室中31家结果满意,总体满意率为96.9%。选择的统计方法合理,统计结果正常。结论绝大多数参加实验室玉米粉中DON检测能力良好,个别实验室需加强内部质量控制。

玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定能力验证

[目的]通过实验室能力验证活动分析了影响玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测结果的主要因素。[方法]依据GB 5009.111—2016第二法:免疫亲和层析净化HPLC法检验并优化前处理条件。[结果]采用5倍稀释浓度提取1 h和3 mL/min的净化速度,能力验证样品中DON含量为571μg/kg,RSD为0.25%。[结论]通过了中国食品药品检定研究院组织实施的NIFDC-PT-228《玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》能力验证,与中国食品药品检定研究院统计Z比分值为0.70,能力验证结果为满意,细化完善了国标测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇的操作,为广大检验检测人员提供参考。

粮食中呕吐毒素的检测能力验证结果分析

通过参加国家市场监督管理总局组织的“粮食中呕吐毒素含量检测”能力验证计划(CNCA-21-03),提高实验室真菌毒素的检测能力。按照《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》(GB 5009.111—2016)第二法对玉米粉样品进行检测,能力验证结果为满意。

呕吐毒素荧光定量快速检测试纸卡及仪器技术性能优化的研究报告

基于时间分辨荧光微球制备的呕吐毒素荧光定量快速检测试纸卡,通过两线及三线试纸卡灵敏度与重复性的对比,筛选出效果更优的三线试纸卡,并对三线试纸卡不同性能要求进行检测验证。结果表明,呕吐毒素三线试纸卡检出限与定量限符合要求,准确度、重复性、稳定性等均达到更优的效果,更能满足快速定量检测要求。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫胶体金试剂板的研制

建立了一种快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫胶体金检测方法。利用柠檬酸三钠还原法制备直径40 nm的胶体金溶液,利用胶体金标记抗DON单克隆抗体制备胶体金免疫复合物,将DON-BSA和羊抗鼠IgG分别固定在NC膜的检测线和质控线上,依次将样品垫、胶体金结合垫、NC膜和吸水垫粘贴到PVC膜上,组装成试剂板。该试剂板灵敏度可达到500μg/kg,15 min内即可完成检测;特异性好,与其他霉菌毒素无交叉反应;稳定性、准确性均较好。该胶体金免疫层析试剂板使用方便、快速,且不需要任何仪器设备辅助,可开发作为一种大批量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇样本的筛选手段。

基于陈粮中脱氧雪腐镰刀菌烯醇盲样考核的检测关键点分析

通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇盲样考核,提高实验室检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其他真菌毒素的能力。采用HPLC法与HPLC-MS/MS法比对测定陈粮中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,重点以HPLC法为例,研究仪器、标准品、人员、质控样、试剂耗材验收等对试验结果的影响,分析陈粮中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测过程中的关键控制点。5组样品经测定,HPLC法测定的样品含量结果为471.0~1850μg·kg^(-1,)HPLC-MS/MS法检测结果高于HPLC法,样品含量在513.7~2013μg·kg^(-1)。采用合理的质控样及耗材验收是影响结果的重要因素,采用多种质控方式相结合可确保结果的准确。本次盲样考核获得满意结果,通过考核可以提高实验室的日常检测水平。实验室根据检测项目编写操作过程注意事项及关键控制点,可有效提高测定结果的可靠性。

2014年我国食品安全风险监测技术机构小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇质量控制考核结果与分析

目的考察我国食品安全检测机构脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的实验室检测能力,分析统计方法对实验室间能力验证结果评定的影响,探讨不同实验方法的可比性。方法制备了天然污染小麦粉的高、中、低3个浓度水平的DON质量控制盲样,对全国47个省级疾病预防控制中心和粮食监测中心进行含量测定考核。根据考核结果用稳健统计算法A进行指定值、标准差和z比分数的计算;并用z比分数对参加考核实验室检测结果进行分析和评价。结果共43家检测机构按时提交了检测结果,A、B、C 3水平合格率分别是63.2%、93.8%和83.5%,考核总体合格率为79.1%。结论通过考核进行实验室间比对,了解我国DON检测水平的现状、各机构的检测水平差异和检测方法间存在的差异,探讨了不同统计学方法评价测试结果的适用性和可比性。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制

目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制。方法取原代培养人胚胎膝关节软骨，用DMEM／F12培养基进行培养和传代，在培养基中加入DON，建立以下DON染毒浓度：0．1、0．2、0．4、1．0μg／ml组和空白对照组。在处理72h后进行相关研究指标的检测：分别用ELISA法检测培养上清基质金属蛋白酶13（MMP-13）、前列腺素E2（PGE2）含量，硝酸还原酶法检测上清液的一氧化氮（NO）含量，流式细胞术法检测软骨细胞凋亡情况、软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和Ⅱ型胶原表达的情况，RT—PCR法分析iNOSmRNA和Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果DON组凋亡率为6．78％-19．05％，高于对照组的1．20％，凋亡率随DON浓度增高而增加（F：174．761，P〈0．05）。DON组上清液NO含量为20．8～40．7μmol／L，高于对照组的10．2μmol／I。（F：91．966，P〈0．05）；MMP．13含量为0．25～0．56μmol／L，高于对照组的0μmol／L（F=78．420，P〈0．05）；PGE2含量为3．2—20．6μmol／L，高于对照组的1．6μmol／L（F=276．453，P〈0．05）。DON组软骨细胞iNOS表达强度为14．8％～56．8％，高于对照组7．1％（F=214．614，P〈0．05）。高剂量DON组（0．4μg／ml和1．0μg／ml）1I型胶原表达强度分别为56．7％和52．7％，低于对照组的62．2％（F=5．134，P〈0．05）。DON组软骨细胞内iNOSmRNA表达的吸光度值（4值）为1．07～1．33，高于对照组的0．62（F=8．358，P〈0．05）。高剂量DON组（0．4、1．0μg／ml）软骨细胞内Ⅱ型胶原mRNA表达量分别为0．83和0．82，低于对照组的1．14（F=7．887，P〈0．05）。结论DON导致人软骨细胞合成NO增加，并通过NO调节MMP-13和PGE2等促进Ⅱ型胶原等软骨基质的降解和软骨毒性损伤；DON可促进软骨细胞的凋亡。

智能烘储一体化装备对储藏小麦质量安全与品质影响

为研究智能烘储一体设备对小麦储藏期间表面的优势真菌、呕吐毒素积累和储藏加工品质的影响,以传统马路晾晒后袋装仓储方法为对照,分别在小麦收获时、储藏0、30、60、90、120、150、180 d取样,分离表面携带的优势真菌并分析呕吐毒素积累情况,测定水分、千粒重、蛋白质、湿面筋含量、降落值和黏度值等品质指标。从实验各组的小麦表面共分离出617株优势真菌,经鉴定隶属于曲霉属黄曲霉(Aspergillus flavus)、黑曲霉(Aspergillus niger),青霉属草酸青霉(Penicillium oxalicum),镰孢属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、变红镰刀菌(Fusarium incarnatum)和轮枝镰刀菌(Fusrium verticillioides),交链孢属链格孢菌(Alternaria alternata)。采用烘储一体设备烘干储藏能够维持小麦含水量在11.7%~12.8%的安全储藏范围,有效控制表面真菌的生长,储藏180 d呕吐毒素的积累比传统晾晒储藏降低22%,小麦籽粒饱满度高。除降落值差异不显著外,千粒重、蛋白质和湿面筋含量、黏度特性显著高于马路晾晒后传统储藏的小麦。采用智能烘储一体化设备烘干储藏小麦比采用传统晾晒储藏方式更能有效地控制表面真菌生长、减少呕吐毒素积累,并维持小麦更好的加工储藏品质。