1-脱氧氮杂-D-葡萄糖(Deoxynojirimycin,DNJ)的合成

将L 山梨糖的 2 ,3位用异亚丙基保护、在 6位上进行选择性苯磺酰化、叠氮化、催化氢化、水解得 6 氨基 6 脱氧 L 呋喃山梨糖盐酸盐 ,再经催化氢化得 1 脱氧氮杂 D 葡萄糖 (deoxynojirimycin ,DNJ)盐酸盐 ,总收率 2 6 %。采用苄氧羰酰化 ,将DNJ及其差向异构体进行了分离 ,得到的N 苄氧羰酰基 1 脱氧氮杂 D 葡萄糖经氢解后生成 1 脱氧氮杂 D 葡萄糖。

桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的开发现状与前景展望

1-脱氧野尻霉素(DNJ)作为桑资源中特有的物质,具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等生物活性,有较高的利用价值。为进一步促进DNJ的开发和利用,本文对现阶段DNJ的提取方法、生物活性以及应用领域进行整理,分析和展望了DNJ现阶段及未来的研究状况。发现随着DNJ提取工艺的进步,DNJ的提取效率在逐步提升,并且得益于DNJ所具备的降血糖活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性与抗氧化和抗炎活性,使其在动物生产、医药、食品领域有着良好的应用前景。相信随着对DNJ研究与开发的深入,能使DNJ得到更充分的应用,从而推动桑资源的多元化利用。

蚕沙中产DNJ细菌菌株的分离与鉴定及桑提取物诱导其增产的研究

从蚕沙中筛选出产1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)的菌株PD04,经形态学和分子生物学鉴定为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)。该菌株为嗜酸性菌,有一定的盐耐受度,最适生长温度为40℃。在PD04菌株发酵初始期添加桑叶生物碱醇提取物、桑籽生物碱醇提取物和桑叶黄酮类醇提取物,对菌液中DNJ的产量均有显著促进作用。当桑叶生物碱醇提取物添加量为010 mg/mL、桑籽生物碱醇提取物添加量为010 mg/mL、桑叶黄酮类醇提取物添加量为020 mg/mL时,菌液中DNJ含量分别达最高值1761μg/mL、2028μg/mL、2674μg/mL,分别是各相应对照组DNJ产量的631、727、945倍。研究结果为利用微生物生产DNJ提供了理论基础。

桂桑优12、沙2×伦109桑叶全年DNJ含量测定及分析

为促进桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的高效、稳定提取及利用,文章采用柱前衍生化高效液相色谱法对桑叶中DNJ含量进行测定,探讨了不同干燥方法、季节变化以及桑树品种对桑叶中DNJ含量的影响。试验结果表明:超低温真空冷冻干燥处理在保持桑叶中DNJ含量方面优于阴干和50℃热风烘干处理,有利于提高DNJ的提取量;以获取桑叶中DNJ为目的在广西地区种植桑树,品种选择沙2×伦109要更优于桂桑优12;若分阶段看,上半年种植要更优于下半年,冬伐过后种植桂桑优12较沙2×伦109所得桑叶DNJ含量更高,夏伐过后选择种植沙2×伦109较桂桑优12所得桑叶DNJ含量更高。

桑树DNJ提取、纯化和检测的研究进展

1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是存在于桑树中的一种多羟基哌啶生物碱,因其通过抑制α-葡萄糖苷酶活性,进而具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤等生理活性和药理活性。DNJ广泛存在于桑树的各种组织中,不同桑树类型和品种中DNJ含量不同,采取的每一种提取、测定方法均具有选择性和特异性,只适用于某种类型或某种桑树品种样品的纯化和检测。同时,DNJ在桑树体内的含量较低,而且桑树体内其他次生代谢物质的干扰增加了DNJ提取和测定的难度。因此,目前文献中报道的DNJ提取、分离纯化和检测方法较多。针对已报道的DNJ的提取、分离纯化和检测方法,综述了近年来DNJ研究方面的最新进展,为更好利用和开发DNJ制品,为DNJ的工业化生产提供参考和借鉴。

高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量

目的:建立桑叶药材中1脱氧野尻霉素(DNJ)的高效液相色谱荧光检测法的含量测定方法。并对不同生长季节和生长环境桑叶药材的DNJ含量进行测定。方法:桑叶经0.05mol·L-1盐酸提取,在pH8.5的硼酸盐缓冲液条件下,用芴甲氧酰氯(FMOC Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相色谱荧光检测器测定。液相条件为HiQSiLC18分析柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈0.1%醋酸(55∶45),流速1.0mL·min-1,柱温25℃,荧光检测器激发波长254nm,发射波长322nm。结果:DNJ与其他组分分离效果较好,线性范围为0.567～34μg·mL-1(r=0.9998),加样回收率为97.2%。结论:桑叶中DNJ含量与环境因素、温度及生长季节有关,该方法可作为桑叶药材的质量控制方法。

DNJ对糖脂代谢机理的影响研究进展

DNJ是一种哌啶类多羟基生物碱,具有多种生理活性,是目前功能食品、医药等行业的研究热点。本文对DNJ的基本性质及其对糖脂代谢机理的影响等研究进展进行综述,并提出未来的发展方向,以期为广大科研工作者的进一步研究提供一定的理论参考。

不同季节桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的测定

建立了柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法。并对不同生长季节桑叶药材的DNJ含量进行测定。桑叶经0.05mol/L盐酸提取,在pH8.5的硼酸盐缓冲液条件下,用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相色谱-检测器测定。流动相为乙腈-0.1%醋酸(55:45,V/V);流速:1.0ml/min;柱温25℃;荧光检测器激发波长254nm,发射波长322nm。线性范围为0.567～34μg/ml(r=0.9999),平均回收率为97.2%。测定结果表明,桑叶中DNJ含量与生长季节、温度有关,七、八月份DNJ含量最高。该方法准确、灵敏度高,重现性好,可用于桑叶中DNJ的定量分析。

桑叶1-脱氧野尻霉素(DNJ)对α-蔗糖酶的抑制动力学研究

从桑叶中提取的1-脱氧野尻霉素(DNJ)作为糖苷酶抑制剂具有降血糖的功能。为了解明桑叶DNJ对α-蔗糖酶的作用机制,应用酶抑制动力学分析桑叶DNJ(纯度>95%)对α-蔗糖酶的抑制特性。通过建立的α-蔗糖酶酶促反应体系表明,在α-蔗糖酶质量浓度≤500μg/mL、反应时间8min以内时,反应体系呈现良好的线性趋势;抑制活性检测表明,桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显的抑制作用,其半抑制浓度(IC50)为5.67mg/mL;依据酶抑制动力学曲线特征推断桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显可逆的非竞争性抑制作用,其抑制常数Ki为6.73mg/mL。

桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)和多糖提取工艺优化

以水为溶剂,桑叶为原料,通过单因素试验筛选对提取有显著影响的因素,并采用正交试验获得了1-脱氧野尻霉素(DNJ)和多糖提取最佳的方案.DNJ的最佳提取方案为固液比1∶30,物料粒径60目,温度70℃,时间3h;多糖的最佳提取方案为固液比1∶40,物料粒径60目,温度80℃,时间2.5h.本方法快速简单,提取率高,适用于工业生产.

59份野生桑桑叶中的DNJ含量及粗提物对α-糖苷酶的抑制活性

对来自云南省不同地区的59份野生桑桑叶中的1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量,以及桑叶粗提物对淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶的体外抑制活性进行了测定,同时采用液-质联用(LC-MS)仪分离纯化桑叶粗提物中的DNJ,并对其抑制蔗糖酶的机制进行了初步研究,期望筛选出适用于治疗糖尿病药物开发的药用桑资源,以及为解析桑叶粗提物和纯化的桑叶DNJ抑制α-糖苷酶活性的机制提供线索。研究结果表明:不同来源的野生桑桑叶中的DNJ含量存在明显差异,其中来自开远地区的岩桑桑叶中DNJ的质量分数高达0.791 1%,是具有药用开发价值的野生桑资源;不同来源的野生桑桑叶粗提物对淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶活力的体外抑制率差异显著,但抑制活性的大小与样品中的DNJ含量不成正比,推测桑叶中除含有DNJ外还含有具有明显的α-糖苷酶抑制活性的多种DNJ类似物;从野生桑桑叶粗提物中分离纯化的DNJ对淀粉酶无明显抑制活性,但对蔗糖酶和麦芽糖酶有显著的抑制活性,对蔗糖酶表现为非竞争性抑制作用。

桑叶1-脱氧野尻霉素(DNJ)对高脂血症小鼠糖脂代谢的影响

为了开发利用桑树来源多羟基哌啶生物碱1-脱氧野尻霉素(DNJ)的生物活性功能,研究桑叶DNJ对高脂饲料诱导高脂血症模型小鼠糖脂代谢的影响及调控作用机制。将自制的桑叶DNJ冻干粉按照50 mg/(kg·d)的剂量灌胃给予高脂血症模型小鼠90 d后,小鼠餐后血糖、总胆固醇(TG)浓度和胰岛素的活力以及胰岛素抵抗指数均极显著降低(P<0.01),肝脏组织中的葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)活力及载脂蛋白(APO-A1、APO-B100)的含量极显著提高(P<0.01);qRT-PCR检测小鼠肝脏组织中糖脂转运代谢关键蛋白APO-A1、APO-B100、脂蛋白脂酶(LPL)、内质网脂酰辅酶A合成酶Acyl-Co A-S、甘油激酶(Gly-K)、3-磷酸甘油脱氢酶(G3PD)等的编码基因转录水平极显著上调(P<0.01);Western blot检测糖异生关键酶丙酮酸羧化酶(PCB)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PEPCK)蛋白的表达水平下调。对小鼠肝脏组织的病理切片观察发现,高脂血症模型小鼠的肝细胞索排列紊乱,遍布脂滴,给予桑叶DNJ治疗后,小鼠肝脏细胞的脂滴数量明显减少。研究结果提示,桑叶DNJ可通过调节葡萄糖、甘油三酯代谢关键酶蛋白的表达,促进血糖、血脂的转运代谢,从而降低小鼠因高脂饲料诱导造成的肝脏组织损伤。

用微生物预处理提取桑叶DNJ及提取物对β-葡萄糖苷酶的抑制作用

1-脱氧野尻霉素(DNJ)是一种降血糖活性物质,在桑叶中的含量丰富。为提高桑叶DNJ的提取效率,分别采用4种纤维素酶产生菌的菌液对桑叶粉进行发酵处理,然后用稀盐酸提取DNJ。其中,用里氏木霉(Trichoderma reesei)发酵液对桑叶粉进行12 h预处理后,DNJ的提取量最高可达1.995 mg/g,比未经发酵液处理组增加了7.14倍,比蒸馏水浸泡对照组增加了18.20倍。因此,微生物辅助提取法在桑叶DNJ的工业化生产中具有潜在的应用价值。红外光谱和木质纤维素成分分析表明微生物预处理破坏了桑叶的细胞壁,使细胞中的DNJ易于释放。以纤维二糖(底物)、纤维素酶、桑叶DNJ组成酶活性测试体系,测试结果表明桑叶DNJ还具有抑制β-葡萄糖苷酶的生物活性。

1-脱氧野尻霉素(DNJ)的研究进展

1-脱氧野尻霉素(DNJ)是桑叶中的一种生物碱,它也存在于其他植物或细菌中。DNJ作为α-葡萄糖苷酶的抑制剂,具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等作用。另外,DNJ还是α-葡萄糖淀粉酶的有效的抑制剂。DNJ作为载体,可用于高纯度麦芽糖的酶合成。本文综述了DNJ的化学结构、来源及用途。

桑叶提取物1-DNJ对甜菜夜蛾幼虫生长和保护酶活性的影响

为研究桑树活性物质1-DNJ对甜菜夜蛾幼虫生长和体内保护酶活性的影响,将被不同浓度1-DNJ浸泡30 s后的甘蓝小叶饲喂4龄的甜菜夜蛾幼虫。结果表明:甜菜夜蛾4龄幼虫对1-DNJ在24、48 h的拒食率分别为77.20%、92.01%,拒食中浓度AFC50分别为0.48、0.21 g/L;生长抑制检测表明,1-DNJ对于甜菜夜蛾生长的抑制率最高达到92.34%,说明1-NDJ对甜菜夜蛾的生长具有明显抑制作用;1-DNJ对甜菜夜蛾体内保护酶活性具有明显的影响,其中SOD和CAT活性,在各时段的检测结果均呈现先被诱导后被抑制,CAT活性较对照下降幅度明显,与对照组差异达到显著水平(P<0.05),而1-DNJ对甜菜夜蛾体内POD活性影响不大。1-DNJ对甜菜夜蛾幼虫拒食和抑制生长的作用时间上滞后于对保护酶系统的破坏作用,表明甜菜夜蛾幼虫体内保护酶系统对桑树活性物质1-DNJ反应敏感。本研究结果说明:桑树活性物质1-DNJ对甜菜夜蛾的生长和保护酶活性具有一定的影响,其结果可为将桑树作为开发植物源杀虫剂的原料提供基础资料和理论依据。

桑叶中生物碱脱氧野尻霉素(DNJ)的最佳提取工艺探讨

采用正交试验,考察PH值、料液比、提取时间三种因素对桑叶中生物碱脱氧野尻霉素(DNJ)提取工艺的影响,通过高效液相衍生处理方法对含量进行检测,得到最佳的提取工艺为:提取液的酸度为0.2%,料液比1 5,提取时间1.5小时。

药桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的薄层鉴别的研究

建立了药桑叶中DNJ的薄层鉴别的方法。分析了不同薄层板、展开剂、显色剂及温度对分离的影响。在试验中,以正丁醇-冰醋酸-水(5∶2∶1)为流动相在硅胶G板上展开,茚三酮为显色剂,药桑叶提取物中在与DNJ标准品相对应位置上出现相同颜色的斑点,Rf为0.36。分离后的斑点圆整、清晰,重现性好,符合薄层层析要求,可用于药桑叶的质量控制。

9个桑树品种的硒、类黄酮、1—DNJ含量的分析

桑树被国家卫生部确认为"药食同源"植物。基于开发桑树药食功能的目的,选取安康9个栽培桑树品种,检测桑叶中硒、类黄酮、1-DNJ含量。结果表明:桑树的桑芽叶硒含量比桑片叶含量低,桑树芽(片)叶硒含量品种之间存在差异,桑树芽(片)叶富硒能力强;桑树芽叶类黄酮含量与片叶类黄酮含量因桑树品种不同有差异,桑叶类黄酮含量比茶叶低;桑树的桑芽叶1-DNJ含量比桑片叶高,桑树芽(片)叶1-DNJ含量品种之间存在差异,桑叶的1-DNJ含量比茶叶高。

HPLC法测定桑叶1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法学研究

为优化桑叶DNJ含量的测定方法,本研究采用单因素试验,分别考察了桑叶的粉碎粒度、提取溶剂、提取液pH、提取液体积、超声提取时间等因素对桑叶1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)提取率的影响,在确定最优提取条件后,进一步考察该提取条件下用HPLC法测定桑叶DNJ的精密度、重复性、回收率、中间精密度等参数,最后利用该提取测定方法测定不同品种桑叶DNJ含量。结果显示,桑叶DNJ的最优提取测定方法为:桑叶粉碎过50目筛,0.2 g样品加200 mL pH=2.0缓冲液,超声提取20 min,10000 rpm离心10 min,保留上清液,精密吸取样品溶液10μL,置1.5 mL离心管中,与10μL 0.2 mol/L(pH=7)硼酸钾缓冲液在1.5 mL试管中混合,加入20μL 5 mmol/L FMOC-CL(溶解于乙腈中),迅速混匀并在室温条件下反应10 min,加10μL 0.1 mol/L甘氨酸液终止反应。该条件下用HPLC法测定同批次桑叶样品的精密度、重复性、回收率、中间精密度均良好,RSD均小于3%。用该方法测定的不同品种桑叶DNJ含量为0.8 g/kg~5.7 g/kg。以上研究结果为桑叶DNJ开发利用提供参考依据。

桑叶和蚕粉中DNJ分离纯化及含量测定研究

用蒸馏水浸提桑叶和蚕粉中的DNJ,通过阳离子交换柱层析对DNJ进行初步纯化用分光光度法测定桑叶和蚕粉中DNJ的含量,并比较了桑叶和蚕粉中的DNJ含量。结果表明,用分光光度法测量DNJ含量是可行的。测试结果显示家蚕对于桑叶中的DNJ具有累积作用。