Synthesis and biological evaluation of novel N-(alkoxyphenyl)-aminocarbonylbenzoic acid derivatives as PTP1B inhibitors

Based on the fact that petroselinic acid showed good inhibitory activity（IC50 = 6.99μmol/L） against protein tyrosine phophatase 1B（PTP1B） in vitro,a series of novel N-（alkoxyphenyl）-aminocarbonylbenzoic acid derivatives were designed and synthesized.The results indicated that most of the derivatives showed more potent activities against PTP1B.Especially,compound 13 had obvious activity with an IC50 of 106 nmol/L in vitro.

土槿乙酸衍生物PBA-D1诱导Hela细胞凋亡及其机制

目的研究土槿乙酸衍生物PBAD1体外能否诱导宫颈癌细胞株(Hela细胞)发生凋亡及其发生机制。方法采用MTT、SRB、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜检测凋亡细胞、DNAladder、流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用Westernblot方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果土槿乙酸衍生物PBAD1在体外试验中对Hela细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因p53基因表达明显增高,而bcl2表达下调。结论PBAD1体外能诱导Hela细胞发生凋亡,其机制可能与p53基因表达上调及bcl2基因表达下调有关。

芥子酸对Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的改善作用及对BDNF/TrkB/ERK信号通路的影响

目的:研究芥子酸对β-淀粉样蛋白1-4(2 Aβ_(1-42))诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的改善作用,并探讨其对脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶B(TrkB)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:将PC12细胞分为空白组、模型组和芥子酸低、高剂量组(50、100μmol/L)。除空白组外,其余各组均用2μmol/L的Aβ_(1-42)诱导细胞损伤;建模24 h后,药物组加入相应药液,培养24 h。观察各组细胞形态变化,检测细胞存活率和细胞中BDNF mRNA的表达情况及其蛋白水平,以及TrkB、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达情况,并计算p-ERK1/2与ERK1/2的比值(p-ERK/ERK比值)。结果:与空白组比较,模型组细胞突触变短,细胞连接较松,贴壁性差,胞质较暗淡,胞浆中有较多颗粒,细胞存活率以及细胞中BDNF mRNA的相对表达量及其蛋白水平,TrkB、p-ERK1/2蛋白的相对表达量和p-ERK/ERK比值均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,芥子酸高剂量组细胞病理变化明显改善,细胞存活率以及细胞中BDNF mRNA的相对表达量及其蛋白水平,TrkB、p-ERK蛋白的相对表达量和p-ERK/ERK比值均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:芥子酸可改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞损伤,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/ERK信号通路有关。

土槿乙酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性

目的:研究土槿乙酸抗肿瘤作用的构效关系。方法:以土槿乙酸为原料,合成8个土槿乙酸衍生物,其结构经1H-NMR,MS证实。经MTT法筛选了衍生物的抗肿瘤活性。结果:8个化合物均为新化合物,除Ⅱc所有化合物均具有抗肿瘤活性,其中Ⅱf,Ⅱg的抗肿瘤活性显著高于土槿乙酸。结论:某些土槿乙酸酯和酰胺可提高抗肿瘤活性。

土槿乙酸衍生物抗真菌活性研究

【目的】对14种土槿乙酸衍生物进行体外抗真菌试验，测定其最低抑菌浓度（MIC80）值。【方法】采用微量液基稀释法进行药敏试验。【结果】除衍生物PB-9外，其余13种衍生物抗真菌活性均优于或相当于土槿乙酸。衍生物PB-3抗真菌作用最强，对5株真菌的MIC80在8～64μg／ml之间，其对絮状表皮癣菌抑制作用与二性霉素B相同。【结论】某些土槿乙酸衍生物具有更强的抗真菌活性，有进一步开发价值。

土槿乙酸诱导人黑色素瘤细胞凋亡

目的研究土槿乙酸诱导人黑色素瘤(SK-28)细胞凋亡。方法采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法、DNA片段化分析检测细胞凋亡;用ELISA和RT-PCR检测P53、Fas、caspase-3、BAX和BCL-2的蛋白和mRNA的表达。结果土槿乙酸明显诱导SK-28细胞凋亡(P<0.05);作用12 h后,P53的蛋白表达水平显著增加,作用24 h后,Fas/APO-1蛋白表达和BAXmRNA表达增加,BCL-2mRNA表达降低,Caspase-3活性提高。结论土槿乙酸可通过激活P53引发BCL-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径,诱导人黑色素瘤SK-28细胞凋亡。

土槿乙酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的研究土槿乙酸抗肿瘤作用的构效关系。方法以土槿乙酸为原料,合成16个土槿乙酸衍生物,其结构经1H-NMR,MS证实。经MTT法筛选了衍生物的抗肿瘤活性。结果其中14个化合物为新化合物,衍生物IIa,b,c,d,e,f,g的抗肿瘤活性与土槿乙酸类似,而其部分水解产物的抗肿瘤活性均明显低于土槿乙酸。结论4位乙酰氧基,7位甲酯为土槿乙酸抗肿瘤活性所必需基团。

一种谷氨酸脱羧酶65相关肽融合蛋白的制备及其治疗1型糖尿病的药效研究

使用基因工程方法构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase65,GAD65)串联三肽GADⅢ(包括p217—236,p524—538,p290—306)的融合基因CTB-GADⅢ。将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过15%SDS-PAGE分析表明该菌株可以以包涵体形式表达融合蛋白,Mr约为17.6k。含有CTB-GADⅢ重组蛋白的包涵体经过变性、复性、纯化后,可以得到五聚体结构的CTB-GADⅢ。神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)结合实验表明重组CTB-GADⅢ蛋白可以与GM1特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。使用该重组蛋白在NOD小鼠8周龄、10周龄和12周龄时滴鼻免疫小鼠共3次,可以显著降低小鼠的发病率,达到治疗1型糖尿病的作用。