Desmin蛋白与局灶节段性肾小球硬化的相关性研究

目的探讨局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠Desmin蛋白与足细胞损伤在FSGS发生发展中的作用。方法测定阿霉素诱导的FSGS大鼠24h尿蛋白定量(24h UP)、血生化指标,计算内生肌酐清除率(Ccr);观察组织学变化并计算肾小球硬化指数(SI)、肾小球细胞外基质面积与肾小球面积之比(ECM/GA);免疫组织化学方法检测肾小球Desmin蛋白的表达,用图像分析软件测定肾小球Desmin蛋白表达的平均光密度值,并将FSGS大鼠肾小球Desmin蛋白的表达与以上指标进行相关性分析。结果FSGS组大鼠的24h UP、胆固醇、SI及ECM/GA明显高于正常对照组(P<0.001),白蛋白、Ccr较正常对照组明显降低(P<0.001);FSGS组大鼠Desmin蛋白的表达上调。Desmin蛋白的表达变化与24h UP、SI及ECM/GA呈正相关(r=0.899～0.930,P均<0.05),与Ccr呈负相关(r=-0.927,P<0.01),与白蛋白、胆固醇无相关性(r=0.371、0.710,P均>0.05)。结论大量蛋白尿及内生肌酐清除率下降可以作为肾小球足细胞损伤的重要特征,足细胞数量是决定FSGS的主要因素之一。

保肾通络方含药血清对高糖培养足细胞Nephrin、 Desmin蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞肾病蛋白(Nephrin)、结蛋白(Desmin)表达及细胞凋亡的影响。方法:细胞实验分为正常对照组、模型组和保肾通络方低、中、高剂量组。正常对照组足细胞予DMEM低糖培养基培养,模型组和保肾通络方不同剂量组予含有30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基培养。保肾通络方不同剂量组足细胞在高糖培养基中分别加入保肾通络方含药血清低、中、高剂量进行干预,正常对照组及模型组加入等剂量空白血清。CCK-8法检测足细胞的细胞活性,免疫荧光及RT-PCR检测足细胞Nephrin、Desmin蛋白及mRNA表达水平,免疫荧光检测足细胞凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果:与正常对照组比较,模型组足细胞的细胞活性明显降低,Nephrin蛋白表达明显下调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显上调,足细胞凋亡细胞数目明显增加(均P<0.05)。与模型组比较,保肾通络方低、中、高剂量组足细胞的细胞活性明显升高,Nephrin蛋白表达明显上调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显下调,足细胞凋亡数目明显减少(均P<0.05)。结论:保肾通络方可能通过上调足细胞Nephrin蛋白表达,下调Desmin蛋白表达,抑制足细胞凋亡,进而减轻足细胞损伤。

大黄虫丸对阿霉素肾病大鼠足细胞骨架蛋白desmin影响的实验研究

目的:探讨大黄虫丸对阿霉素肾病大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:SD大鼠一次性尾静脉注射阿霉素5 mg/kg,随机分为模型组和大黄虫丸组,另以8只正常大鼠作为对照组,进行对比观察。于实验第7日、14日,各处死4只模型组大鼠,留取肾脏标本待测。实验第28日,大鼠测尿蛋白后,全部处死,观察大鼠肾组织病理形态学变化及超微结构的改变,应用免疫荧光方法定位及半定量分析研究足细胞损伤标志蛋白-desmin的表达变化。结果:与正常对照组比较,阿霉素肾病大鼠肾小球内desmin蛋白表达上调,足细胞部分足突融合,尿白蛋白排泄率增高。结论:大黄虫丸可明显减轻阿霉素肾病大鼠肾小球内desmin蛋白的表达,减轻足细胞足突融合,降低尿白蛋白排泄率。大黄虫丸对阿霉素肾病大鼠的足细胞损害有一定的保护作用。

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达的研究

目的探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型、慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色，并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡，有Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失，慢型克山病多表现为染色增强，或呈团状聚集于心肌细胞中间，或呈块状附于细胞膜下。凋亡细胞多见于有Ｄｅｓｍｉｎ异常改变的心肌细胞、浸润的炎细胞、血管内皮细胞及一些间质细胞。结论细胞凋亡与结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常参与克山病的发生与发展。

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球α-actinin-4和Desmin表达的干预作用及机理研究

目的:观察祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球滤过屏障及α-actinin-4和Desmin的影响,探讨"祛风通络方"治疗MCN、改善蛋白尿的作用机理,同时对"风伏肾络"的病机理念进行理论的探讨和阐述,为"祛风通络方"的临床应用提供分子原子依据。方法:86只雄性清洁级Sprague-Dawley(SD)健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和模型组(B组)、祛风组(祛风通络方、C组)、激祛组(激素+祛风通络方、D组)和激素组(E组)。分别给予相应干预,再次于不同时间测24h蛋白尿及相关生化指标,同时观察大鼠一般情况,肾小球滤过屏障超微结构变化,同时免疫组化染色结果判定[1],测定各组大鼠肾脏组织中α-actinin-4和Desmin的阳性面积百分比,及肾小球中着色的阳性物质光密度值,以判断表达和分布变化。并分析α-actinin-4和Desmin表达变化与尿蛋白的关系,两者之间的关系等。结果:造模成功时与空白对照组比较,模型组大鼠出现:超微结构显示GBM大致正常,足突间距增宽、融合甚至脱落、消失,α-actinin-4和Desmin在足细胞表达上调,高于空白对照组(Pn均<0.01)。α-actinin-4总体量没有显著变化(Pn>0.05),Desmin总体量明显上调(Pn<0.01)。干预结束时与模型组比较:各干预组超微结构病变均有不同程度改善,足突结构较前清晰,各干预组肾小球足细胞α-actinin-4蛋白和Desmin蛋白平均光密度值表达下调,D组减少最明显(Pn<0.01),C组和E组无显著差异(Pn>0.05)。各干预组分布较前规律,差异有统计学意义(Pn<0.05)。结论:1)祛风通络方可以降低阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄,且与激素联用效果更佳,表明其可以改善大鼠低蛋白状态、脂质代谢。2)祛风通络方可以改善α-actinin-4和Desmin的表达分布,可能是该方实现修复足细胞骨架的结构和功能并抑制足细胞进一步损伤的机制之一。

一次法咬合重建对大鼠咬肌组织损伤相关蛋白表达的影响

目的:探讨一次法咬合重建后大鼠咬肌损伤相关结蛋白(desmin)和骨骼肌肌钙蛋白抑制亚基(s Tn I)含量的变化。方法:取8周龄健康雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组(C组)、操作对照组(S组)和一次法咬合重建组(T组)(n=20)。T组采用人工逐次磨除法将各大鼠上颌后牙牙冠磨低约1.2 mm,6周后口外制作咬合板并将其粘固于各大鼠的上颌后牙上;S组麻醉后模拟T组操作过程,无实际操作;C组不作任何处理。咬合重建后3、7、14、28 d处死大鼠(n=5),取其双侧咬肌组织并采用western blot方法检测咬肌细胞内desmin和s Tn I的表达。结果:1 S组与C组相比desmin、s Tn I表达无明显差异(P>0.05);2 T组于咬合重建后3 d时desmin、s Tn I开始降低(P<0.05),7 d时降至最低,14 d后逐渐增加,28 d时恢复正常;28 d时desmin、s Tn I的表达水平与C组、S组相比P>0.05,其他各时间点的desmin、s Tn I表达水平均低于C组和S组(P<0.05)。结论:一次法咬合重建可造成咬肌细胞内desmin和s Tn I发生不同程度的降解,但这种变化是可逆的。

高脂血症家兔肾小球病变及绞股蓝总苷的干预作用

目的观察高脂血症早期家兔肾小球病变及绞股蓝总苷干预作用。方法高脂饮食法复制家兔高脂血症模型,8周后检查肾脏病理改变,免疫组化法检测肾小球中Desmin,α-SMA含量。结果正常组Desmin,α-SMA蛋白无明显表达;模型组两种蛋白表达均增强,肾脏系膜细胞轻微增多;绞股蓝总苷组表达高于正常组,低于模型组。结论高脂血症早期肾小球足细胞和系膜细胞受损,最终导致肾小球硬化。绞股蓝总苷可降低这种损伤,起到保护肾脏的作用。

抑制lncRNA DLX6-AS1通过靶向miR-200a减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6反义RNA1(DLX6-AS1)对高糖诱导的足细胞损伤的影响和机制。方法将足细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(转染si-NC+高糖)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1+高糖)、miR-NC组(转染miR-NC+高糖)、miR-200a组(转染miR-200a mimics+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-NC组(转染si-DLX6-AS1+miR-NC+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-200a组(转染si-DLX6-AS1+miR-200a+高糖)。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DLX6-AS1、肾病蛋白(nephrin)、结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)表达。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证DLX6-AS1与miR-200a的关系。结果与正常糖组比较,高糖诱导后足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达、DLX6-AS1表达升高,nephrin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-DLX6-AS1+miR-NC组比较,si-DLX6-AS1+miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DLX6-AS1靶向并负调控miR-200a表达。结论抑制DLX6-AS1通过靶向miR-200a可减轻高糖诱导的足细胞损伤,是糖尿病肾病的潜在治疗靶点。

大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养和鉴定

目的采用组织块培养技术探索大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养方法。方法以成年SPF级Sprague-Dawley大鼠为研究对象,采用组织块培养法获取大鼠骨骼肌卫星细胞,并与C2C12成肌细胞进行比较,对两种细胞进行形态学研究及采用免疫荧光和免疫组织化学法测定两种细胞α-actin蛋白和Desmin蛋白的表达及分布,从而对骨骼肌卫星细胞进行鉴定。结果通过组织块培养法获取的细胞增殖旺盛,分化良好。免疫细胞荧光和免疫组织化学实验结果显示,α-actin蛋白和Desmin蛋白在两种细胞胞浆中均有分布。结论用组织块培养法获取的骨骼肌卫星细胞具有良好的增殖与分化能力,用此种方法可培养出高纯度的骨骼肌卫星细胞。

原发性肺动脉肉瘤1例

患者女，43岁，2014年2月劳累后出现胸闷、气促，伴有胸痛，症状间断发作，未在意，后上述症状逐渐加重，2015年4月就诊于吉林大学第二医院。既往无双下肢肿胀疼痛史，无抽烟、酗酒及特殊家族遗传病史。查体：口唇无发绀，双肺未闻及干湿音及胸膜摩擦音，心律齐，胸骨左缘2、3肋间可闻及收缩期杂音。实验室检查：在吸气氧浓度为21％的条件下，动脉血气 pH 7．44，氧分压72．6 mm Hg （1 mm Hg＝0．133 Kpa），二氧化碳分压36．6 mm Hg，D-二聚体1．51μg／ml。腹部及双下肢血管超声未见异常。CT肺动脉造影：肺动脉干、左右肺动脉、双肺上叶及左肺下叶肺动脉可见充盈缺损的软组织密度影。初步诊断：肺动脉栓塞，心功能Ⅲ级。给予低分子肝素钙0．41 ml，每日2次皮下注射抗凝剂，9d后症状无明显改善。全身麻醉低温体外循环下行肺动脉取栓术，术中见肺动脉开口处及左右肺动脉内均充满大量栓塞物，部分清除栓塞物及部分剥脱肺动脉内膜。术后病理：肺动脉栓子低分化肉瘤，大部分细胞呈梭形，部分呈上皮样及多形性，有多量坏死，考虑为原发性肺动脉肉瘤（primary pulmo-nary artery sarcoma，PPAS）。免疫组织化学染色结果：细胞角蛋白（－）、Desmin蛋白（－）、重型钙调蛋白（－）、Ki-67阳性率30％、雌激素受体（－）、孕激素受体（－）、黑色素瘤相关抗原（弱阳性）、CD34（－）、CD117（－）、S-110（弱阳性）。术后8个月患者再次出现胸闷及少量胸腔积液，连续3次送检胸腔积液未查到恶性细胞，接受31次适形放疗，总剂量58．2 Gy，放疗后患者胸闷症状轻度缓解。2016年1月患者左下腹出现皮下肿物，质硬、活动度欠佳，拒绝活检取病理，考虑为肿瘤转移所致。2016年3月14日于家中病亡。

缩泉益肾方对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响

目的观察缩泉益肾方对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响。方法体外培养小鼠足细胞,分为正常(N)组、高糖(HG)组、含5%、10%、20%缩泉益肾方含药血清低/中/高剂量高糖(SQYSF-L、M、H)组、含4.45μg/ml卡格列净高糖(Cana)组,CCK8法检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术分析细胞凋亡,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测各组细胞骨架相关蛋白分子结蛋白(Desmin)、α-辅动肌蛋白(actinin)-4表达。结果体外实验结果显示,与SQYSF-L、SQYSF-H组比较,SQYSF-M组细胞存活率明显升高(P<0.01);与N组比较,HG组足细胞活力、划痕愈合率显著降低,凋亡率明显升高(P<0.01);与HG组比较,SQYSF-M组和Cana组足细胞活力、划痕愈合率显著升高,凋亡率显著下降(P<0.01);与N组比较,HG组Desmin mRNA和蛋白水平均明显增加,α-actinin-4 mRNA和蛋白水平均明显减少(P<0.01);与HG组比较,SQYSF-M组和Cana组Desmin mRNA和蛋白水平均明显减少,α-actinin-4 mRNA和蛋白水平均明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论缩泉益肾方可增加高糖诱导的小鼠肾脏足细胞活力,提高细胞划痕愈合率,减少其凋亡,其可能通过修复细胞骨架相关蛋白分子Desmin、α-actinin-4的异常表达,稳定细胞骨架,减轻足细胞损伤。