过氧化氢干化学检测方法的实验研究

目的:采用次血红素六肽(DhHP-6)催化H2O2氧化4-氨基安替吡啉-氯代苯酚显色体系,建立了以反射光检测为原理的H2O2干化学测定方法。方法:实验采用TiO2和聚乳酸微球为试剂载体,通过试剂分层包埋制备H2O2干化学检测片,考察了方法的反应线性、精密度和准确度及与国标方法的相关性。结果:H2O2干化学测定方法响应的线性范围为2.0~20mg/L;H2O2浓度3.9mg/L和15.5mg/L的变异系数(CV)和加标回收率分别在3.2%~3.5%和98.2%~102.2%;与国家标准方法比较相关系数r=0.998 5;13例样品中的H2O2浓度在1.05~18.26mg/L;与国标方法之间的两组数据经统计差异不显著(P>0.05)。结论:该方法快速、准确、灵敏,适合测定食品中过氧化氢的残留。

基于次血红素六肽的过氧化氢和葡萄糖灵敏比色方法

采用次血红素六肽(DhHP-6)催化H2O2氧化4-氨基安替吡啉-氯代苯酚显色体系,建立了测定H2O2和葡萄糖的方法。研究了pH值、底物浓度和DhHP-6浓度对实验的影响,检测了比色方法的反应线性、稳定性、相关性和回收率。在最佳反应条件下,DhHP-6在不同时间及温度条件下,活性要优于过氧化物酶(POD);DhHP-6催化H2O2的米氏常数(Km)和最大反应速率(vmax)分别为0.171mmo/L和4.22×10^-6mol/s;H2O2响应的线性范围为0.39~25.0mmol/L;高、中、低3水平测定的变异系数(CV)和加标回收率分别在1.29%~2.16%和94.5%~101.1%之间;与葡萄糖商品试剂盒比较相关系数R^2=0.9946;36例血液样品中的葡萄糖浓度在4.26~17.48mmol/L之间。与葡萄糖检测商品试剂盒之间的两组数据经统计差异不显著(P>0.05)。该方法是一种简单、廉价、方便、灵敏的比色测定方法。

金振口服液氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸同时定量的质量控制方法研究

目的氨基酸自动分析仪建立金振口服液(JOL)氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸(磷酸丝氨酸、牛磺酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、肌氨酸、甘氨酸、丙氨酸、瓜氨酸、α-氨基丁酸、缬氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、β-丙氨酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、3-甲基组氨酸、精氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸)同时定量的分析方法。方法采用日立855-4507型离子交换色谱柱(60mm×4.6mm,3μm);检测波长分别为570、440 nm;流动洗脱泵体积流量0.35 mL/min;衍生泵体积流量0.30 mL/min;反应柱温135℃;以柠檬酸缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱,建立JOL氨基酸特征指纹图谱,对29个主要特征峰进行化学成分指认,运用中药指纹图谱相似度软件对16批市售制剂进行相似度评价,同时对29种氨基酸进行含量测定。结果建立了JOL氨基酸特征指纹图谱结合29种氨基酸同时定量的方法;16批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值在0.989~1.000;29种定量成分线性关系良好(R2=1.000),且平均回收率为95.71%~101.87%;16批市售制剂29种氨基酸的质量浓度分别为磷酸丝氨酸15.4572~29.3624μg/mL、牛磺酸64.4234~114.2386μg/mL、天冬氨酸19.0564~32.5490μg/mL、苏氨酸6.704 8~7.841 8μg/mL、丝氨酸22.609 4~39.382 8μg/mL、天冬酰胺61.134 0~115.456 0μg/mL、谷氨酸32.254 6~63.127 2μg/mL、谷氨酰胺5.2238~8.9532μg/mL、肌氨酸4.0810~44.0076μg/mL、甘氨酸12.4030~23.5164μg/mL、丙氨酸33.876 8~44.257 4μg/mL、瓜氨酸3.514 2~9.881 0μg/mL、α-氨基丁酸1.126 4~2.287 8μg/mL、缬氨酸11.584 6~15.469 0μg/mL、胱氨酸1.660 2~4.041 8μg/mL、异亮氨酸4.087 8~5.469 2μg/mL、亮氨酸8.295 2~11.724 0μg/mL、酪氨酸7.492 6~10.761 2μg/mL、苯丙氨酸4.856 4~9.248 0μg/mL、β-丙氨酸2.309 4~6.782 6μg/mL、β-氨基丁酸0.175 0~14.790 6μg/mL、γ-氨基丁酸17.654 4~26.621 8μg/mL、鸟氨酸42.338 4~58.172 6μg/mL、赖氨酸12.994 9~28.498 0μg/mL、组氨酸1.802 6~4.0674μg/mL、3-甲基组氨酸2.6084~4.3840μg/mL、精氨酸107.1416~301.6498μg/mL、羟脯氨酸15.8116~37.8076μg/mL、脯氨酸143.714 6~243.956 6μg/mL。结论氨基酸自动分析仪法测定JOL中氨基酸具有重现性好、结果可靠的优点;且JOL中氨基酸类成分定性定量研究在一定程度上明确了君药山羊角对制剂组方的成分贡献,为构建JOL全方位质量评价体系提供了有益补充。