不同品系小鼠胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究

目的 研究甘油作为冷冻保护剂、不同基因型小鼠对胚胎玻璃化冷冻的影响。方法 采用 6 5mol L的甘油作为冷冻保护剂 ,采用二步法对CBA、NOD、C57BL 6J、ICR及CD1小鼠 3 5d的胚胎进行玻璃化冷冻 ,并比较了不同品系小鼠胚胎的复苏率及移植受孕率。结果和结论 CBA、NOD、C57BL 6J,ICR及CD1的复苏率分别为 5 7 6 %、4 8%、31 3%、86 5 %及 88% ,移植受孕率为 2 1%、2 3 5 %、11%、38%和 35 5 % ,封闭群小鼠的胚胎复苏率、移植受孕率均显著高于近交系小鼠。这提示胚胎的复苏率及移植受孕率可能与小鼠的不同基因型有关。五个品系中 ,桑椹胚及早期囊胚的体外复苏率均显著高于扩张囊胚。

输卵管上皮细胞共培养技术对受精卵体外发育的影响及临床应用价值

目前 IVF-ET的成功率仍较低 ,主要是由于胚胎过早移植入宫腔所致。输卵管上皮细胞共培养体系可以延长胚胎的体外培养时间 ,提高发育至囊胚期的胚胎数 ,从而提高IVF-ET成功率 ,减少多胎妊娠。

克隆绵羊遇到的问题及其分析

本研究以体外成熟不同时间的绵羊卵母细胞为胞质受体,对去核、融合、不同激活方法、卵裂率、桑/囊胚率和克隆胚受胎率等作了研究与分析.观察妊娠受体母羊的状态、胎儿体内发育情况,分析影响胎儿发育的原因.结果显示,成熟培养18h、22h、24h卵母细胞的盲吸去核率无显著性差异(84.9%,86.6%,84.3%,p>0.05),但显著高于26h组的去核率(71.7%).离子酶素联合cycloheximide(CHX)对重构胚进行激活,卵裂率显著高于A23187联合6-DMAP的激活方法(84.6%vs 63.2%,p<0.05),但二者处理对桑/囊胚率发育无显著差异(25.5%vs18.7%,p>0.05).作为胞质受体,成熟20h的卵母细胞与成熟24h和26h的卵母细胞相比,不利于重构胚的体外发育,桑/囊胚率差异显著(12.3%vs 25.3%,23.4%,p<0.05).分别以美丽奴、杜泊肉羊的体细胞为供体细胞进行克隆生产,90天以后的妊娠率为10%-17%,发育到期率为10%以上.出生羔羊的体重普遍较大.

合浦珠母贝卵子成熟的细胞学观察

用细胞学的方法对合浦珠母贝卵子在体内和体外的成熟过程进行了观察，结果发现：性腺内发育的卵子大多停留于第一次减数分裂的前期，处于排卵状态时，性腺内卵子进一步发育至第一次减数分裂的前中期，解剖性腺取出的卵子能在海水中继续发育达到第一次减数分裂中期，氨海水能够促进这一发育过程。自然排放的卵子在刚刚接触到海水时仍处于第一次减数分裂的前中期，它们的进一步成熟，即发育至第一次减数分裂中期是在海水中完成的。

家兔胚胎细胞核移植的研究

研究改进了兔胚胎细胞核移植的技术体系 ,并对核移植胚胎的体外培养以及克隆胚胎的体内发育进行了试验。结果表明 :卵母细胞去核率为 88.9% (8/ 9) ,重组胚融合率为 76 .7% (176 / 2 2 9) ,将融合的重组胚与兔胎儿成纤维细胞共同培养 ,其 2～ 4细胞发育率、8～ 16细胞发育率以及桑椹胚和囊胚的发育率分别为 6 5 .7% (2 3/35 )、2 8.6 % (10 / 35 )、2 2 .9% (8/ 35 ) ,显著高于“TCM - 199+10 %FCS”系统培养的 43.3% (13/ 30 )、2 6 .7% (8/30 )、16 .7% (5 / 30 )。 16及 32细胞期卵裂球的重组胚可发育到产仔 ,将 111枚重组胚移植给 9只同期处理的受体母兔 ,2只妊娠 ,其中 1只产出 2只足月克隆仔兔 ,1只在产前 1周 (妊娠 2 2d)

哺乳动物腔前卵泡的体内和体外发育

对哺乳动物包括啮齿类和家畜等卵巢腔前卵泡体内和体外发育，近几年的研究结果进行分析，认为哺乳动物卵巢腔前卵泡体内的发育模式基本相似，但不同动物又具有各自的特点。腔前卵泡在合适的培养条件下能在体外发育并成熟，促性腺激素和生长因子等在其体外发育过程中具有调节作用。发育过程中卵泡质量的鉴定和卵母细胞标准的确定及培养体系的建立是该领域需要解决的问题。

腰带长体茧蜂卵和早期胚胎体外发育的初步研究

通过在体外条件下培养腰带长体茧蜂侧输卵管处解剖得到的脱去滤泡细胞的成熟卵及从寄生早期幼虫血淋巴中获得的初期胚胎,对腰带长体茧蜂卵和胚胎的初期发育进行了初步的研究。结果表明,以TC-100为基础培养基加入一定量寄主幼虫血浆和胎牛血清时,从侧输卵管处解剖得到的卵在合适的体外培养条件下可以进行卵裂,且卵裂产生的初级胚胎可以被释放到培养基中。初级胚胎可以在胚外膜内进行分裂生成二级胚胎细胞,但二级胚胎不能被释放出胚外膜。从寄生初期寄主幼虫体内得到的初级胚胎可以在体外培养条件下长大并持续通过胚外膜凹陷进行增殖,但无法进入个体发育阶段,胚胎最后黑化死亡。

小鼠上颌突间充质细胞体内成骨发育和体外诱导成骨分化的比较

目的 :比较体外成骨诱导培养的小鼠胚胎10.5 d(E10.5)的上颌突间充质细胞与体内发育的上颌突间充质细胞的成骨分化差异。方法:体外培养E10.5和E17.5的小鼠上颌突间充质细胞,观察其细胞形态。取体外培养3 d的E10.5原代细胞进行成骨诱导培养7 d,然后应用免疫荧光、qPCR等方法比较其与体外培养3 d的E17.5原代细胞的成骨分化差异。采用SPSS 20.0软件包对数据进行成组样本t检验。结果:E10.5和E17.5的小鼠上颌突细胞在体外呈贴壁生长,细胞呈多边形、椭圆形。E17.5的小鼠上颌突原代间充质细胞在体外培养时,增殖速度较E10.5的小鼠上颌突细胞快。E10.5的小鼠上颌突间充质细胞成骨诱导7 d后,成骨标志物Runx2和OCN的蛋白表达与未成骨诱导的E17.5上颌突间充质细胞表达相似,成骨标志物Runx2、OCN和OPN的mRNA表达和未成骨诱导的E17.5上颌突细胞表达相似。成骨诱导培养14 d的E10.5的小鼠上颌突细胞与成骨诱导7 d的E17.5上颌突细胞形成的钙结节无显著差异。结论:E10.5的小鼠上颌突间充质细胞体外成骨诱导培养,能较好模拟上颌突细胞体内成骨发育过程,为研究颌骨发育提供了合适的细胞模型。

牙本质牙髓复合体的形成研究(一) 牙本质牙髓复合体的新概念及其在牙齿发育中的形成研究

牙本质及牙本质牙髓复合体的形成研究一直是口腔医学研究的重大课题。近年来,生命前沿科学领域的飞速发展和重大进展,也掀起了牙本质牙髓形成研究的热潮。本文阐述了对牙本质牙髓复合体概念的新认识,系统回顾了牙齿发育过程中、牙齿发育完成后,牙本质牙髓复合体体内形成研究、体外形成研究的新进展,及这些研究对临床治疗的指导意义和应对策略,分析了面临的挑战。这对我们把握该领域的研究现状和进一步深入研究奠定了必要的基础。

犬卵母细胞体内发育及体外成熟的研究进展

本文就犬卵母细胞体内发育及体外成熟的影响因素进行综述,并对其培养方法进行了总结,以期为克服犬相关辅助生殖技术的障碍,保护珍贵和濒危犬种提供理论基础。

漆黄素脂质体的制备及其质量评价

目的:制备漆黄素脂质体,并对其进行制剂学研究及体内外评价。方法:采用薄膜分散法制备漆黄素脂质体,以粒径为指标,通过单因素考察,制备不同磷脂与胆固醇总量、不同磷脂胆固醇比例及不同药脂比的漆黄素脂质体,确定漆黄素脂质体最优处方。采用激光散射粒径仪测定漆黄素脂质体的粒径、多分散系数、Zeta电位;采用超滤离心法测定漆黄素脂质体的包封率和载药量;对漆黄素脂质体的稳定性,在3种释放介质(pH 1.2盐酸、双蒸水和pH 7.4磷酸盐缓冲液)中的体外释放情况,细胞毒性以及药物代谢动力学等体内外参数进行评价。结果:采用最优处方(漆黄素22.2 mg、磷脂133.3 mg、胆固醇16.7 mg、胆酸钠110 mg、肉豆蔻酸异丙酯60 mg)制备的漆黄素脂质体平均粒径为(60.32±1.08)nm,多分散系数为0.198±0.011,包封率为(94.37±0.62)%,载药量为(4.500±0.021)%。透射电镜结果显示漆黄素脂质体外形圆整且分布均匀。制成脂质体后可提高漆黄素原料药的溶解度、体外释放率以及相对生物利用度;漆黄素脂质体在30 d内具有较好的稳定性。漆黄素脂质体对人肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现剂量依赖关系。结论:漆黄素脂质体能显著提高难溶性药物漆黄素的溶解度和生物利用度。

丙戊酸处理对猪体细胞克隆胚胎体外、体内发育效率的影响

为了探讨丙戊酸(valproic acid, VPA)处理对猪体细胞克隆胚胎体外、体内发育效率的影响,提高猪体细胞克隆效率,试验比较了VPA不同处理浓度(2,4,6 mmol/L)和时间(18,24,48 h)对克隆胚胎体外发育的影响,并将VPA处理的克隆胚胎移植给代孕母猪,比较对照组和VPA处理组的妊娠率、分娩率、窝均总仔数、克隆效率、平均单头代孕母猪产活仔数,验证VPA处理对克隆胚胎体内发育效率的影响。结果表明:用2 mmol/L VPA处理克隆胚胎24 h可显著提高囊胚率(P<0.05),但对卵裂率和囊胚内细胞数无显著影响(P>0.05)。VPA处理组代孕母猪妊娠率高于对照组,分娩率、窝均总仔数、窝均活仔数、克隆效率、平均单头代孕母猪产活仔数均低于对照组,但差异不显著(P>0.05)。说明用2 mmol/L VPA处理克隆胚胎24 h可显著提高囊胚率,对妊娠率、分娩率、窝均总仔数、窝均活仔数、克隆效率、平均单头代孕母猪产活仔数无影响。

奥斯特线虫虫卵检测及发育研究

奥斯特线虫病是一种严重危害绵羊和牛的寄生虫病。该病多呈现隐形感染,根据临床症状很难诊断,多数圆线虫虫卵形态相似,通过粪便虫卵检测仅能够初步诊断该病。笔者通过饱和蔗糖水漂浮法优化奥斯特线虫虫卵检测方法,虫卵检出率100%,单次虫卵的检出数量为30个左右;收集奥斯特线虫虫卵,研究其虫卵形态和体外发育情况,根据幼虫形态准确诊断奥斯特线虫病,为该病的生前诊断提供技术支持。

基于体内外相结合的中药大品种二次开发物质基础研究思路

中药大品种二次开发是中药现代化、科学化、标准化进程的重要环节之一。如何准确有效地识别原方有效物质基础是二次开发中最首要的难题,同时也是中药现代化发展的瓶颈。该文在目前已有的试验方法的基础上,根据中药复方多成分、复杂作用需要综合多学科的方法与技术协同研究的思路,提出基于体内外相结合的中药大品种二次开发物质基础研究思路,认为物质基础研究需要分为识别、筛选、验证3个环节,每个环节设计相应的体内、外的研究方法相互补充、相互验证,最终筛选正确可靠的复方物质基础。该思路为中药大品种二次开发以及复方物质基础研究提供参考。

口服固体制剂溶出方法建立和验证的技术探讨

体外溶出检查通常被认为可反映药物的体内溶出行为和生物利用度情况,其在药物制剂研发和上市产品的质量控制中发挥着巨大的作用。一种溶出度实验方法的建立,需要综合考虑药物的物理化学性质和制剂学特征,确立合适的溶出条件以模拟药物的体内溶出行为。新建立的溶出方法不仅需要具有良好的准确性和耐用性,还要能区分不同质量属性的药物制剂。本文依据国内外药品监管机构关于建立和验证药物溶出方法的最新指导原则,通过查阅文献,综述了口服固体制剂溶出方法建立和溶出度标准制定的常见问题及研究进展,以期为药物溶出方法的建立和验证提供参考。

3种土源性线虫虫卵体外发育形态学观察

目的掌握蛔虫、鞭虫和钩虫等3种土源性线虫虫卵的体外发育形态学变化,完善和补充各种虫卵的多维视觉效果及图像信息,为教学培训及科研提供参考。方法在土源性线虫病现场调查发现阳性虫卵粪样后,于次日收集阳性感染者全粪便复查,确认虫卵感染后将阳性粪便标本以水洗沉淀法收集虫卵,保存于生理盐水中,并连续多次镜检观察虫卵的发育情况,同时登记环境温度与湿度等,拍摄各种虫卵不同发育阶段发育情况的图(影)像。结果3种虫卵在体外的发育过程,经过单细胞期、多细胞期、桑椹期、胚胎或幼虫期等多个阶段,其中蛔虫卵在宿主排出体外后,在适宜的温度与湿度及富氧的环境下逐渐开始卵细胞分裂,受精虫卵从单个细胞不断发育成多细胞、桑椹细胞直至发育为感染期幼虫;鞭虫卵随粪便排出体外后,在温暖、潮湿、荫蔽及富氧的土壤中,卵细胞开始分裂发育,逐渐发育为感染期幼虫;钩虫卵随粪便排出体外后,在适宜的温度和湿度的富氧疏松的土壤中,虫卵内的细胞快速分裂,在粪便中数小时内即可发育为杆状蚴而破壳孵出,应及时检测观察,否则虫卵便快速消失而漏诊。结论收集保存蛔虫、鞭虫和钩虫等3种虫卵标本,获得其体外发育过程形态学变化的高清影像图片,属稀缺且少见的寄生虫种质资源。