1,2-二氯乙烷急性吸入染毒脑组织损伤形态学研究

为了研究 1 ,2 二氯乙烷 (1 ,2 -DCE)在静式吸入染毒条件下对脑组织的急性损害。采用连续静式吸入染毒大鼠 1 2h后 ,观察不同染毒剂量下受试动物脑组织的形态学变化 ;测定脑组织干湿重及含水量。结果显示 :染毒剂量为 2 .5g m3 时 ,脑组织在形态学上无明显变化 ,含水量为 80 .41 % ,与对照组 (79.82 % )相比 ,无明显差异 ;5 .0g m3 染毒组在形态学上出现轻微脑水肿 ,脑组织含水量为 82 .1 4 % ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5) ;1 0 .0g m3 组脑组织在形态学上水肿明显 ,其含水量 (83 .65 % )与各组之间差异显著 (P <0 .0 5)。结果提示 :1 ,2 -DCE在短期大量吸入的情况下可导致动物出现脑水肿。

1,2-二氯乙烷及其主要代谢产物对离体神经细胞的毒性研究

[目的 ]探讨 1,2 二氨乙烷 (1,2 DCE)对培养神经细胞的毒性作用及致脑水肿的机制。 [方法 ]首先培养神经细胞 ,分别用 1,2 DCE、2 氯乙醛、2 氯乙醇对生长良好的神经细胞进行处理 ,然后做相应的组织学观察和生化检测。[结果 ] 1,2 DCE和 2 氯乙醛对神经细胞影响甚微 ,细胞在形态学上未见明显的变化 ;用 2 氯乙醇处理过的神经细胞出现不同程度的变大、肿胀 ;Ca2 + Mg2 + ATP酶活性显著降低 ,最高剂量组与各组相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。 [结论 ]1,2 DCE的急性神经毒性主要是引起神经细胞水肿 ,2 氯乙醇可以引起ATP酶活性下降继而引起“Ca2 + 超载” 。

ATP酶变化在1,2二氯乙烷致脑水肿过程中的作用研究

为探索Na+ K+ATP酶、Ca2 +、Mg2 +ATP酶在 1,2 -二氯乙烷 (1,2 DCE)致脑水肿过程中所起的作用 ,在复制脑水肿模型的基础上 ,检测受试动物脑组织中Na+ K+ATP酶、Ca2 +、Mg2 +ATP酶活力的变化。结果显示 ,随着染毒剂量的增加 ,Na+ K+ATP酶活力逐渐降低 ,最高剂量组与各组相比 ,具有显著性差异 ;Ca2 +、Mg2 +ATP酶活力显著下降 ,与其余各组相比 ,P <0 0 5。结果提示 :1,2 DCE引起了ATP酶活力的下降导致脑组织能量代谢障碍 ,从而可能引起“Ca2 +超载” ,ATP酶活力下降和“Ca2 +超载”

异氟烷和七氟烷对脑缺血大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的观察异氟烷和七氟烷对脑缺血后大鼠水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法72只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、Ⅰ(异氟烷)组和S(七氟烷)组。线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,再按缺血后24,48,78h分为3亚组,每组6只,观察每组大鼠的脑水肿程度和AQP4的表达。结果与假手术组比较,缺血后48,78h对照组、Ⅰ组和S组大鼠脑肿胀率和AQP4吸光度比值均明显增加(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,Ⅰ组、S组缺血后48,72h脑肿胀率和AQP4吸光度比值均明显减少(P<0.05)。结论异氟烷和七氟烷均可降低大鼠脑缺血后AQP4表达和减轻脑水肿。

职业性急性1,2-二氯乙烷中毒3例死亡病例分析

目的分析职业性急性1,2-二氯乙烷中毒(1,2-DCE)死亡病例的临床特点及其救治。方法回顾性分析3例职业性急性1,2-DCE中毒死亡病例的临床资料。结果 3例病例均为中年女性,均有明确的职业性1,2-DCE接触史,从发病到死亡分别为48、25、32d。2例为散发发病。临床上主要表现为中毒性脑病。首发症状1例为头晕、眼花,2例为头痛。死亡前,3例病例脑水肿持续时间长,且容易反复和加重;2例合并肺部感染、消化道出血及肾功能异常等。3例病例均诊断为职业性急性重度1,2-DCE中毒。1例死于脑疝,2例死于多器官功能衰竭。结论职业性急性1,2-DCE中毒脑水肿、颅压高持续时间长,病情可突然恶化;应密切观察神经系统症状体征,早期发现脑水肿,及时处理,防治反复;特别要警惕脑疝和多器官功能衰竭发生。

1,2-二氯乙烷对SD大鼠亚急性吸入毒性研究

目的确定1,2-二氯乙烷（1,2-DCE）亚急性吸入的毒性作用和靶器官。方法无特定病原体级健康成年SD大鼠64只,雌雄各半,随机分为对照组、低剂量组和高剂量组。采用口鼻式动式吸入染毒法,低和高剂量组予质量浓度为600和1 800 mg/m3的1,2-DCE染毒8 h/d,连续7 d;对照组吸入新鲜空气。染毒期间称量大鼠体质量,观察其活动状况。实验结束后,检测大鼠血常规和血清血生化指标;解剖、分离主要脏器计算脏器系数,并进行组织病理学检查。结果染毒后第4~7天,高剂量组雌性和雄性大鼠体质量均分别低于同性别对照组（P〈0.05）,并从染毒后第3天开始出现不同程度的体质量负增长（P〈0.05）。雌性高剂量组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰基转移酶、乳酸脱氢酶的活力和甘油三酯、尿素氮、肌酐的水平均高于雌性对照组（P〈0.05）。高剂量组大鼠脑、肝脏、肺脏的脏器系数均分别高于对照组（P〈0.05）;与雌性对照组比较,雌性高剂量组大鼠心脏、肾脏和肾上腺的脏器系数均升高（P〈0.05）,脾脏脏器系数下降（P〈0.05）;雄性高剂量组大鼠肾脏和肾上腺的脏器系数均高于雄性对照组（P〈0.05）。肉眼可见大鼠脑、肝脏和肾脏大体形态学改变。组织病理学检查结果显示,高剂量组部分大鼠出现大脑皮质和血管周围空泡化,小脑颗粒细胞坏死等脑水肿病变;部分大鼠肝脏可见肝细胞水肿;部分大鼠肾脏可见肾小管蛋白沉积、肾小管上皮细胞水肿、肾小管扩张等病理改变,并可见肾小管上皮细胞异型性。各组大鼠血常规指标未出现有生物学意义的改变;低剂量组大鼠血清血生化指标基本未出现有生物学意义的改变。结论 1,2-DCE亚急性吸入可引起大鼠脑水肿、肝脏和肾脏损害;大脑、小脑、肝脏和肾脏是1,2-DCE亚急性吸入毒性作用的靶器官;1,2-DCE毒作用存在性别差异。

1,2-二氯乙烷的神经毒性

近年的病例报道显示,1,2-二氯乙烷对工人神经系统的危害严重,但目前尚缺乏系统的研究资料。本文对1,2-二氯乙烷神经毒性作用机制方面的研究进展进行了总结。

亚急性1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿实验动物模型的建立

目的建立小鼠亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)中毒性脑水肿实验动物模型,探索较为合适的染毒剂量及染毒时间。方法将昆明种小鼠随机分为4组:对照组及1.0、1.1和1.2mg/L 1,2-DCE染毒组。采用静式吸入方式染毒,每天染毒4h,各组染毒天数根据半数以上小鼠在染毒过程中出现明显中毒症状或死亡而确定。末次染毒结束后次日处死小鼠,快速取脑组织,分别测定脑含水量、脑脏器系数及HE染色观察脑组织病理改变。结果各组小鼠的实际染毒天数:1.0mg/L组染毒4d,1.1mg/L组染毒3d,1.2mg/L组染毒2d。各染毒组小鼠在染毒结束时,其脑含水量及脏器系数均高于对照组,根据脑组织病理观察结果判定,1.0mg/L组染毒4d、1.1mg/L组染毒3d及1.2mg/L组染毒2d的小鼠脑水肿模型成功率分别为30%、40%和60%。结论该实验成功建立了亚急性1,2-DCE中毒性脑水肿实验动物模型,1.2mg/L 1,2-DCE每天染毒4h、连续染毒2d所建立的中毒性脑水肿模型的成功率最高。

急性1,2-二氯乙烷中毒脑脊液常规指标的动态监测

目的探讨脑脊液(cerebral spinal fluid,CSF)常规检查在急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)中毒诊治中的价值。方法68例急性1,2-DCE中毒患者入院后行CSF压力、常规及生化检查,并在病程中动态监测及分析CSF各项指标的变化。结果急性1,2-DCE中毒患者入院时CSF外观无色透明、细胞数均正常;CSF压力增高阳性率为47.1%(32/68),其中脑水肿组为66.7%,无脑水肿组无增高;脑水肿组CSF压力均值高于无脑水肿组(P<0.01);蛋白质浓度正常或轻微升高占16.2%,无脑水肿组总蛋白与白蛋白浓度高于脑水肿组(P<0.05);葡萄糖和氯化物大致正常;重度中毒组CSF压力均值显著高于轻度中毒组(P<0.05);急性1,2-DCE中毒患者入院后CSF压力持续升高,于病程(脱离接触)31~60 d最高,治疗后期患者CSF压力恢复缓慢,CSF压力的回落滞后于高颅压的临床表现及CT、MR等影像学改变。结论动态监测CSF压力及各项常规指标对急性1,2-DCE中毒的临床诊治具有重大价值。

水通道蛋白4在1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿中表达研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)亚急性吸入所致中毒性脑水肿发生中的作用。方法无特定病原体级健康成年雌性SD大鼠,随机分为对照组(8只)、低剂量组(12只)和高剂量组(12只)。采用口鼻式动式吸入法染毒,3组大鼠1,2-DCE染毒剂量分别为0、600和1 800 mg/m3,连续7 d,8.0 h/d。染毒结束后,取大脑皮质行病理组织学检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测大脑皮质组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)、AQP4的mRNA相对表达水平,采用免疫印迹法检测大脑皮质组织中AQP4蛋白相对表达水平。结果病理组织学检查结果显示,低剂量组大鼠可见大脑皮质血管周围组织疏松,血管组织间隙扩大;高剂量组大鼠可见较明显的大脑皮质或血管周围组织疏松和空泡,程度较低剂量组严重。分别与对照组及低剂量组比较,高剂量组大鼠大脑皮质MMP2 mRNA相对表达水平均升高[(1.07±0.41)vs(1.56±0.55),(1.21±0.59)vs(1.56±0.55),P<0.05],AQP4 mRNA相对表达水平均下降[(1.03±0.25)vs(0.81±0.12),(1.00±0.20)vs(0.81±0.12),P<0.05];3组大鼠大脑皮质NKCC1 mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义[(1.03±0.31)vs(1.14±0.43)vs(1.36±0.50),P>0.05]。高剂量组大鼠大脑皮质AQP4蛋白相对表达水平低于对照组[(0.80±0.25)vs(1.19±0.42),P<0.05]。结论 1,2-DCE亚急性吸入所致大鼠脑水肿是以血管源性为主的混合型脑水肿,其发病机制与AQP4的表达量改变有关。

ERK/AP-1信号通路在亚急性1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿中的作用

目的探究细胞外信号调节激酶/激活蛋白-1(ERK/AP-1)信号通路在亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)中毒性脑水肿形成中的作用。方法选取40只健康雌性昆明种小鼠随机分为对照组及3个染毒组;染毒组小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1,2-DCE染毒3.5 h/d,分别染毒1 d、2 d和3 d。染毒结束次日取材,观察脑组织病理切片,测定血清白细胞介素-1β(IL-1β)含量;检测各组小鼠脑组织含水量,MMP-9、Occludin、ERK1/2、p-ERK1/2及AP-1的c-Fos、c-Jun亚基蛋白和mRNA表达水平。结果染毒2 d和3 d组小鼠出现脑水肿病理改变;与对照组相比,染毒2 d和3 d组小鼠脑组织含水量、MMP-9蛋白和mRNA表达水平上调,Occludin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);各组ERK1/2蛋白和mRNA表达水平无差别,染毒3 d组小鼠脑组织中p-ERK1/2蛋白、AP-1的c-Fos亚基蛋白和mRNA表达水平及血清IL-1β含量均显著高于对照组(P<0.05);染毒组AP-1的c-Jun亚基蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论1,2-DCE可通过诱导小鼠血液生成IL-1β,激活小鼠脑组织中ERK/AP-1信号通路上调MMP-9蛋白表达,破坏血脑屏障通透性,参与1,2-DCE中毒性脑水肿形成。

p38 MAPK/AP-1信号通路在1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿形成中对iNOS表达的上调作用

目的探究p38 MAPK/AP-1信号通路在小鼠1?2-二氯乙烷(1?2-DCE)中毒性脑水肿形成过程中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其对脑水肿的影响。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组、染毒组、低剂量以及高剂量p38抑制剂组。染毒小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1?2-二氯乙烷染毒3.5 h/d,连续染毒3 d,低、高剂量抑制剂组小鼠于染毒前1 h腹腔注射200μl 3.75、15 mg/kg的p38 MAPK抑制剂(SB202190)。染毒结束次日取材,测定各组小鼠脑含水量及HE病理观察脑水肿,Western Blot检测各组小鼠脑组织中磷酸化p38、激活蛋白1(AP-1)两个亚基c-fos、c-jun的磷酸化形式表达水平以及iNOS的蛋白表达,Real-Time RT-PCR检测iNOS mRNA表达水平。结果单纯染毒组的小鼠出现抱爪现象,SB202190干预能够明显改善1?2-DCE中毒小鼠的抱爪症状。染毒组小鼠脑组织含水量与对照组小鼠相比明显增加,SB202190干预能够有效缓解小鼠出现脑水肿。单纯染毒组小鼠脑组织中p-p38蛋白、磷酸化c-jun和c-fos表达水平明显上调,iNOS蛋白和mRNA表达水平也显著增加,而SB202190能够显著降低iNOS、磷酸化c-jun和c-fos的表达水平。结论小鼠脑组织iNOS mRNA和蛋白表达水平在1?2-DCE中毒性脑水肿形成过程中显著上调。p38 MAPK/AP-1信号通路参与iNOS表达增多的调控过程。

核转录因子-κappa B在1,2-二氯乙烷中毒所致基质金属蛋白酶-9表达上调过程中的作用

目的探究核转录因子-κappa B(nuclear transcription factorκappa B,NF-κB)在1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒引起的基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达上调以及脑水肿形成过程中的作用。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组及3个染毒组。染毒组小鼠置于100 L静式染毒柜中,每天染毒1,2-DCE 1.2 mg/L×3.5 h,分别染毒1 d、2 d和3 d。观察脑组织病理切片,检测各组小鼠的脑含水量、MMP-9以及NF-κB的P65、P50亚基蛋白和mRNA表达水平。结果染毒3 d组的小鼠出现抱抓现象,染毒2 d和3 d组小鼠出现典型脑水肿病理改变,脑含水量、MMP-9以及NF-κB的P65蛋白和mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论 1,2-DCE可通过诱导小鼠脑组织中NF-κB的活性亚基(P65)表达增强上调MMP-9的表达,从而导致血脑屏障通透性增加,最终引起脑水肿的发生。