Investigation of Aconitine-type Alkaloids from Processed Tuber of Aconitum carmiechaeli by HPLC-ESI-MS/MS^n

Introduction Aconitine-type alkaloids isolated from the roots of Aconitum carmiechaeli show a potential toxicity and a broad spectrum of bioactivity[1-4].On the basis of the C8-substituent of C19-diterpenoid skeleton,aconitine-type alkaloids can be divided into diester-diterpenoid alkaloids（DDAs）,monoester-diterpenoid alkaloids（MDAs）,and lipo-alkaloids（Fig.1）.

Analysis of lycopodiastrum casuarinoides transcriptome discovers lycodine-type alkaloid biosynthetic genes and genetic markers

OBJECTIVE o facilitate the basic acquaintance with the bioactive lycodine-type alkaloids biosynthetic pathways,we conducted the transcriptome analysis of L.casuarinoides by illumina sequencing.METHODS The plant of L.casuarinoides was collected and was subjected to RNA isolation,cDNA library construction,and illumina sequencing before bioinformatics analysis.After sequencing,the clean reads were obtained for de novo assembly by using Trinity software,and then further processed with TGICL sequencing clustering software to generate unigenes,The unigenes are aligned by Blast X alignment to six public protein database.In addition,all unigenes are functionally annotated by GO,KEGG and characterized putative genes involved in lycopodium alkaloids biosynthesis.RESULTS In total,124,524 high-quality unigenes were obtained with an average sequence length of 601 bp.Among the L.casuarinoides transcripts,61,304 showed significant similarity(E-value<1 e-5) to the known proteins in the public database.Among the total 124 524 unigenes,47,538 open reading frame(ORFs) were predicted.Based on the bioinformatics analysis,all possible enzymes involved in the Lycodine-type alkaloids biosynthetic pathway of L.casuarinoides were identified,including primary amine oxidase(PAO),and Malonly-CoA decarboxylase.In addition,a total of 64 putative cytochrome P450(CYP450) and 827 transcription factors were selected as the candidates of Lycodine-type alka.loids modifiers.Furthermore,a total of 13 352 simple sequence repeats(SSRs) were identified from the 124,524 unigenes,of which dinucleotide motifs AG/CT(50.1%),were the most abundant.CONCLU.SION This transcriptome analysis of L.casuarinoides,provides many valuable candidate genes involv.ing in the biosynthesis of novel secondary metabolites but also lays the foundation for genetic diversity analysis via SSRs markers in L.casuarinoides.

变异系数法-AHP复合加权联用TOPSIS模型优选白附片降毒增效炮制工艺

目的:运用变异系数法-层次分析法(AHP)复合加权联用TOPSIS优选白附片炮制工艺参数,为白附片规范化炮制提供参考。方法:以煮制时间、浸漂时间和蒸制时间为考察因素,以穷举寻根法开展试验设计,以苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、水分、灰分和胆巴残留量为评价指标,以变异系数法-AHP复合加权计算权重系数,通过TOPSIS模型优选白附片炮制工艺参数。结果:白附片最优炮制工艺参数为煮制20 min、浸漂48 h、蒸制3 h。结论:该工艺稳定、可行,可为白附片的规模化加工炮制提供参考。

金属离子对Trichoderma longibrachiatum UN32石斛碱型生物碱产量的影响

石斛碱是传统植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的特征药用活性成分,结构上属于石斛型生物碱(dendrobine-type total alkaloids,DTTAs)。石斛碱的积累受周期和环境的影响,仅从植物中获取难以满足需求。该研究的对象Trichoderma longibrachiatum UN32是实验室前期通过复合诱变获得的产DTTAs的正突变株。为提高UN32的生物碱产量,使产物表达水平趋于稳定,该研究从UN32发酵培养基中无机盐的添加量出发,利用响应面法确定金属离子的最优配比。根据Plackett-Burman法设计筛选出对响应结果影响程度最显著的3个因素分别为Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+),其最佳添加时间和添加浓度分别是Cu^(2+)0.5 mmol/L(第6天)、Fe^(2+)0.4 mmol/L(第6天)和Zn^(2+)0.7 mmol/L(第3天)。响应面统计的结果显示,当模型响应值生物碱量达最大值时,Cu^(2+)、Zn^(2+)和Fe^(2+)的浓度分别为0.54、0.69、0.39 mmol/L,此时生物碱产量达到(317.36±6.48)μg,比初始培养基提高了72.68%。综上,金属离子及其不同组合对菌株UN32生物碱的积累具有促进作用,该方法具有较好的开发价值和应用前景。

桑枝总生物碱治疗痰浊瘀阻型糖尿病肾病的临床疗效观察

目的:观察桑枝总生物碱治疗痰浊瘀阻型糖尿病肾病的临床疗效。方法:对2022年1月-2022年12月安徽中医药大学第一附属医院及淮北市中医院、安庆石化医院等多家医院门诊收治的90例痰浊瘀阻型糖尿病肾病患者的病例资料进行回顾性分析,随机分为治疗组和对照组,对比临床疗效、中医证候评分改善及相关血液指标改善情况等。结果经过治疗后,治疗组中医临床疗效明显优于对照组,两组在中医证候评分、肾功能相关指标、血糖血脂相关指标指标等方面均有着明显改善,治疗组各方面指标的改善程度上明显高于对照组。结论桑枝总生物碱治疗痰浊瘀阻型糖尿病肾病临床疗效显著,对于中医证候评分、肾功能相关指标、血糖血脂相关指标均有着明显的改善效果,同时还可以缓解临床症状,提高患者生活质量。

人参再造丸中3种双酯型生物碱的限量检查方法研究

目的建立人参再造丸中双酯型生物碱的限量检查方法。方法采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)对人参再造丸中双酯型生物碱(新乌头碱、次乌头碱、乌头碱)的含量进行测定,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,进行梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子模式下采用多反应监测模式测定。结果3种双酯型生物碱均有较好的线性关系,在精密度、稳定性、重复性试验中RSD均低于5%,平均回收率和RSD分别为96.14%~100.38%和1.59%~2.86%。结论所建立的方法能同时准确、快速地测定人参再造丸中3种双酯型生物碱成分的含量,专属性强、重复性好,可为全面、有效地控制人参再造丸的质量提供参考。

人参再造丸中6种乌头类生物碱的含量测定方法研究

建立人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱含量的检测方法。采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)对人参再造丸(浓缩丸)中双酯型生物和单酯型生物碱的含量进行测定,梯度洗脱模式下,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,电喷雾离子源(正离子模式),监测模式为多反应监测。结果表明,6种生物碱均有良好的线性关系,精密度试验、稳定性试验、重复性试验中RSD均低于5%,平均回收率和RSD分别为97.27%~108.29%和1.99%~4.01%。所建立的方法能同时准确、快速地测定人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱成分的含量,专属性强、灵敏度高、重复性好,能为全面有效管控人参再造丸(浓缩丸)质量提供参考。

不同灭菌工艺对生川乌中乌头类双酯型生物碱成分及产品质量影响研究

目的:在保证生川乌药效的前提下,筛选最优灭菌工艺。方法:分别采用热压灭菌、干热灭菌、钴-60辐照灭菌三种方法进行灭菌处理,采用HPLC法考察灭菌后乌头类双酯型生物碱含量变化情况,同步考察药材及其产品微生物数量是否符合标准,以综合评估大生产适用工艺。结果:3种灭菌方法均能使产品符合成品质量标准,综合考虑灭菌后样品微生物数量、指标成分含量、效率等因素,干热灭菌工艺是最优工艺。结论:在干热灭菌条件下,产品微生物限度符合要求,乌头类双酯型生物碱转移率较优,生产效率可接受,可作为工业生产最优工艺。

紫外-可见分光光度法测定舒筋消肿散中双酯型生物碱限量

目的建立舒筋消肿散中双酯型生物碱的限量测定方法。方法应用紫外-可见分光光度法,采用改良盐酸羟胺-高氯酸铁法显色,在520 nm波长处测定乌头碱对照液和供试品溶液的吸光度,计算供试品溶液中双酯型生物碱的含量。结果乌头碱对照液浓度在23.1~231.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,回归方程A=0.00705C+0.000134,r=0.999891。乌头碱平均回收率92.42%,RSD=1.20%(n=9)。测得10批舒筋消肿散中双酯型生物碱限量,以乌头碱计分别为:0.131%、0.065%、0.077%、0.117%、0.108%、0.081%、0.097%、0.122%、0.103%、0.092%。结论建立的测定方法简便、准确、灵敏、重现性良好,适用于舒筋消肿散中双酯型生物碱限量的测定。

单酯型生物碱类对CHF大鼠心肌细胞的保护作用及机制

目的 分析单酯型生物碱类对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将100只大鼠随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组20只。C、D、E组在慢性心力衰竭模型建模成功后给予附子浓缩液灌胃,剂量分别为2.79、5.57、11.14 g/kg。灌胃6周后检测各组大鼠病理组织学变化、超声心动图指标、心肌细胞凋亡率,心肌组织促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)表达量,心肌细胞自噬蛋白、BNP、AI、PO_(2)、IL-6、TNF-α水平及PI3K/AKT通路蛋白表达量。结果 B~E组超声心动图指标室间隔收缩末期厚度(IVSs)、室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左心室后壁收缩末期厚度(LVPWs)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPWd)。心肌细胞凋亡率,Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平,心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ,BNP及AI水平均高于A组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量均低于A组(P<0.05);C~E组IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率及Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平、自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平低于B组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量高于B组(P<0.05);随着附子浓缩液剂量的增加,IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率、Bax、Caspase-8表达,IL-6、TNF-α水平、心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平降低,LVEF及Bcl-2表达、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量升高(P<0.05)。结论 单酯型生物碱类通过上调p-PI3K、p-AKT蛋白表达量,激活PI3K/AKT通路,缓解心力衰竭恶性进展,且呈剂量依赖性。

A new monoterpenoid indole alkaloid from Rauvolfia yunnanensis

One new monoterpenoid indole alkaloid, l l-methoxyburnamine-17-O-3′,4′,5′-trimethoxybenzoate （1）, was isolated from Rauvolfia yunnanensis Tsiang. Its structure was identified by speclroscopic evidences.

Matrix Solid-phase Dispersion Extraction of Alkaloids from the Roots of Aconitum kusnezoffii Reichb

Matrix solid-phase dispersion（MSPD） was developed for the extraction of four alkaloids, including aconitine, mesaconitine, hypaconitine and deoxyaconitine, from the roots ofAconitum kusnezoffii Reichb. The determination of the analyte was carried out by high performance liquid chromatography with UV detection. The alkaline alumina was used as sorbent. The mixture of acetonitrile and water was used as elution solvent. Several extraction parameters, such as type of sorbent, the ratio of sample to solid support material, type of the elution solvent and the volume of the elution solvent were tested. Mean recoveries ranged from 93.16% to 102.73%, with relative standard deviations from 0.27% to 4.17%. With the extraction efficiency and time expenditure taken into account, MSPD extraction should be a comparatively good method.

桑枝总生物碱与阿卡波糖在痰浊瘀阻型餐后高血糖患者中的临床疗效比较

目的:比较桑枝总生物碱(SZ-A)和阿卡波糖(AC)在痰浊瘀阻型餐后高血糖患者中的临床效果及中医证候改善差异性。方法:将90例痰浊瘀阻型2型糖尿病患者。患者被随机分为对照组(接受AC治疗)和治疗组(接受SZ-A治疗),对照组30例,治疗组60例。研究期为12周,期间定期对患者进行随访,并观察药物的临床指标。结果:治疗后,治疗组的中医临床疗效为75%,显著优于对照组的40%。在血液指标方面,两组患者治疗后的血糖、胰岛素、胆固醇等指标均有明显改善。尤其在甘油三酯(TG)的改善程度上,SZ-A组明显优于AC组。此外,两组患者的体重指数(BMI)在治疗后都有所下降。结论:SZ-A和AC在降低痰浊瘀阻型餐后高血糖患者的血糖水平上具有同等效果,但SZ-A在改善中医证候积分、临床疗效、降低总胆固醇、炎症反应、以及减少胃肠道不良反应方面更优于AC。

裂褶菌对生附子减毒增效作用的研究

本文以裂褶菌(Schizophyllum commne)为菌种,系统研究了生附子固体发酵炮制的工艺,并通过动物实验对发酵产物进行了毒性评价。结果表明,生物转化后的制附子中有毒成分双酯型生物碱含量降至0.0009%,远低于《中华人民共和国药典(2020版)》规定的0.020%;其有效成分单酯型生物碱含量增加至0.0325%,远高于《中华人民共和国药典(2020版)》规定的0.010%。生附子和市售药用制附子能够引起动物俯卧不动、体重减轻等反应,且生附子可以引起动物死亡。发酵后的附子组动物未发现上述毒性症状,行为学观察及体重指标与正常对照组相比未见明显差异。

心宝丸中不同产地附子的毒效成分含量测定方法及质量评价

目的:建立心宝丸中附子组分单酯型生物碱和双酯型生物碱毒效成分的含量测定方法,以对不同产地附子制备的心宝丸进行质量评价,优选附子产地。方法:采用HPLC法,使用Phenomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm),以乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.03 mol/L磷酸二氢钾的0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,检测波长为232 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为25℃。结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱分别在3.2500~25.9997µg/mL、3.0660~24.5280µg/mL、3.2397~25.9179µg/mL、3.7107~18.5083µg/mL、3.9164~19.5822µg/mL、3.8569~19.2845µg/mL范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.4%、100.8%、100.6%、100.9%、100.4%和99.4%,RSD分别为1.4%、0.6%、0.6%、1.3%、1.3%和0.7%(n=9);4个不同产地附子制备得到的心宝丸成品中,四川江油制成的心宝丸中单酯型生物碱的含量最高,为0.103%。结论:建立的方法结果准确,专属性强,为心宝丸的质量评价和组方附子的产地选择提供依据。

乌头碱类双酯型二萜生物碱水解反应的电喷雾质谱分析

阐明了乌头碱类双酯型二萜生物碱水解反应过程,确定水解反应的类型以及最佳水解条件。利用电喷雾离子阱质谱分析比较了生川乌提取液,制川乌提取液及其水解反应提取液中生物碱的差异。生川乌炮制后生物碱大多数由双酯型水解转化为单酯型,水解反应最容易发生的位置在C8位,水解反应的类型是烷氧键发生断裂的酯的碱性水解。

HPLC测定附子及其炮制品中3种双酯型生物碱的含量

目的：建立同时测定附子中3种双酯型生物碱——新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量的HPLC分析方法。方法：Zorbax Eclipse XDB C18柱，40mmol乙酸铵缓冲液-乙腈，梯度洗脱，流速1.0mL·min^-1，检测波长230nm。结果：3种双酯型生物碱新乌头碱、乌头碱、次乌头碱均达到了较好的分离，分别在0．0357-1.784μg（r=0．9999），0.0126-0．632μg（r=0．9997）和0．0334-1．672μg（r=0．9997）呈良好的线形关系。结论：该方法简便、快速、灵敏，可有效地用于附子的鉴别和内在质量控制。

近红外漫反射光谱结合相关系数法快速检测制川乌中双酯型生物碱的限量

目的:建立快速检测制川乌中双酯型生物碱限量的近红外漫反射光谱结合相关系数法。方法:选择制川乌、生川乌,分析双酯型生物碱的近红外特征区间,同时测定每批次样品中双酯型生物碱的含量,采用OPUS软件中相关系数法分析每批次样品与生川乌的相关系数,确定方法阈值。结果:炮制充分的样品,相关系数均≤25%;未炮制充分的样品,相关系数均为60%~70%。当定义阈值为40%时,能准确地对样品进行初筛。结论:近红外漫反射光谱结合相关系数法可以对制川乌样品中双酯型生物碱的限量进行初筛,用于该类药品的质量控制,同时可以应用于药品监管机构进行快速筛查和监督抽样。

HPLC测定附子与“半蒌贝蔹及”各药材配伍前后3种双酯型生物碱的含量变化

目的:应用现代分析检测技术,定量分析附子与半夏、瓜蒌、贝母、白蔹、白及配伍前后水煎液中3种双酯型生物碱(乌头碱、中乌头碱、次乌头碱),考察其含量变化的影响因素。方法:采用高效液相色谱法,Agilent Ex-tend C18柱,乙腈-甲醇(V∶V=1∶1)-35 mmol/L乙酸铵梯度洗脱,流速0.6 mL/min,检测波长235 nm。结果:除川贝母、白蔹、法半夏外,其他各药与附子配伍后煎煮液中3种双酯型生物碱均高于附子单煎液,而其变化趋势与煎煮液的pH值有联系。结论:共煎液的pH值是影响药液中3种双酯型生物碱含量的直接因素。

市售黑顺片口尝味道与生物碱及胆巴含量的关系探讨

目的:探讨黑顺片中生物碱含量及胆巴残留量与其味觉的关系,为黑顺片质量控制标准的完善提供参考。方法:高效液相色谱法(HPLC)检测黑顺片中6种生物碱成分的含量;Na 2EDTA络合滴定法检测胆巴残留量,结合人工口尝对黑顺片味道的测评,综合分析市售黑顺片样品间味道差异与两类成分的关系。结果:32批市售黑顺片中,单酯型生物碱总量均符合《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版规定;26批黑顺片的双酯型生物碱含量符合《中国药典》2015年版规定,有6批样品质量分数为0.021%~0.030%,合格率为81%,口尝麻舌感明显的黑顺片样品双酯型生物碱含量偏高;胆巴质量分数为1.85%~8.95%,咸味明显的黑顺片样品胆巴残留量偏高;收集的样品中黑顺片味道差异较大,符合《中国药典》2015年版“味淡”要求的约占16%。结论:收集的样品中黑顺片大多符合《中国药典》2015年版中生物碱的质控标准,但味道不合格的比较普遍,双酯型生物碱含量与黑顺片口尝麻舌感有关联性;胆巴含量与咸味有关联性,建议制定相应的胆巴残留量化标准。