卵巢储备功能下降患者颗粒细胞mtDNA拷贝数及4977bp缺失的研究

目的:研究卵巢储备功能下降(DOR)患者颗粒细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和4 977 bp缺失情况,初步探讨DOR患者颗粒细胞mtDNA结构的完整性。方法:选取DOR组及对照组各50例,分离提纯卵泡液中颗粒细胞,提取DNA,RT-PCR相对定量颗粒细胞mtDNA拷贝数及PCR检测其4 977 bp缺失情况。结果:DOR组及对照组均未检测到mtDNA 4 977 bp缺失,其拷贝数相对量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:DOR患者颗粒细胞mtDNA结构基本完整,颗粒细胞可作为DOR患者卵母细胞浆内线粒体自体移植的供体细胞。

补肾生精调和气血法调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路改善大鼠卵巢储备功能的研究

【目的】探讨补肾生精调和气血法对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠的干预机制。【方法】将60只性成熟雌性SD大鼠随机分为正常组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组,其余各组大鼠给予单次腹腔注射环磷酰胺构建DOR模型。于造模次日开始,西药组给予戊酸雌二醇0.105 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,中药低、中、高剂量组分别对应给予补肾生精调和气血法中药复方8.075、16.15、32.3 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组、模型组给予等体积去离子水灌胃,每日1次,连续21 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,采用电化学发光法检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)水平,采用Western Blot法检测卵巢组织血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的蛋白表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组血清FSH、LH水平升高,E2、AMH水平降低,卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9蛋白表达水平上调,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平下调(均P<0.05);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组上述各指标得到一定程度的改善,且中药各剂量组各指标的改善效果与西药组相当。【结论】补肾生精调和气血法通过调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善大鼠卵巢储备功能。

基于蛋白组学技术探究六味地黄丸治疗卵巢储备减退小鼠的作用机制

利用蛋白组学技术探究六味地黄丸对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve, DOR)的治疗效用和可能作用机制。首先采用环磷酰胺60 mg·kg^(-1)联合白消安6 mg·kg^(-1)一次性腹腔注射制备DOR模型小鼠,药物注射后连续观察小鼠动情周期,以动情周期紊乱判定造模是否成功。造模成功后,给予小鼠六味地黄丸混悬液连续灌胃28 d;结束后选取4只雌鼠按照2∶1与雄鼠进行合笼观察孕产率;剩余小鼠在灌胃结束后的次日采血、取卵巢。苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜下观察卵巢形态及超微结构变化;ELISA检测血清激素和氧化水平变化;定量蛋白组学技术分析小鼠造模前后和六味地黄丸干预前后卵巢蛋白的差异表达情况。结果显示,六味地黄丸能够调节DOR小鼠动情周期,改善小鼠血清激素水平,提高血清抗氧化水平,促进卵泡发育,保护卵巢颗粒细胞线粒体形态,提高DOR小鼠产仔数和存活数;显著负调节DOR模型相关的12个差异表达蛋白,这些差异蛋白主要参与了脂质分解代谢、炎症反应、免疫调节、辅酶生物合成等生物过程,并在鞘脂代谢、花生四烯酸代谢、核糖体、细胞铁死亡、cGMP-PKG信号通路等显著富集。总之,DOR的发生和六味地黄丸对其的防治作用与多种生物途径有关,主要包括氧化应激、炎症反应和免疫调节;“线粒体-氧化应激-细胞凋亡”是六味地黄丸治疗DOR的关键;YY1、CYP4F3是引发线粒体功能障碍、ROS积累的关键上游靶点,花生四烯酸代谢通路是药物作用的主要信号通路。

脱氢表雄酮对卵巢储备功能下降患者颗粒细胞WNT/CTNNB1通路及IVF结果的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)预治疗对卵巢储备功能下降(DOR)患者颗粒细胞WNT/CTNNB1通路相关信号分子及体外授精-胚胎移植(IVF-ET)结果的影响。方法选择进入IVF周期DOR的不孕患者9例为研究对象,比较分析DHEA预治疗前后IVF结果及卵巢颗粒细胞AKT、CTNNB1蛋白、WNT2 mRNA、CYP19A1 mRNA相对表达量。结果与既往IVF周期比较,DHEA预治疗后基础窦卵泡数目(AFC)显著增加,基础卵泡刺激素(FSH)、FSH/LH的水平明显降低,黄体生成素(LH)水平升高,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);DHEA预治疗后人绒毛膜促性腺激素(h CG)日雌二醇(E2)水平、获卵数、MⅡ卵子数、优质胚胎数显著提高(P<0.05);DHEA预治疗后AKT相对表达量降低、CTNNB1蛋白和CYP19A1mRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IVF治疗过程中,对DOR女性进行DHEA预治疗,可通过作用于WNT/CTNNB1通路相关信号分子改善卵巢微环境,进而提高卵巢的储备功能及反应性,改善IVF结果。