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Establishment of Embryonic Stem Cell Lines from C57BL/6J Mice and Generation of Chimeras
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作者 何维 高建刚 +1 位作者 刘晓 孙方臻 《Developmental and Reproductive Biology》 1997年第2期13-20,共8页
Four embryonic stem (ES) cell lines, designated CE1, CE2, CE3 and CE4, were isolated from C57BL/6J blastocysts. The ratio of normal diploid composition of these cell lines is above 70%. To examine the differentiation... Four embryonic stem (ES) cell lines, designated CE1, CE2, CE3 and CE4, were isolated from C57BL/6J blastocysts. The ratio of normal diploid composition of these cell lines is above 70%. To examine the differentiation potential of the ES cells, the CE2 cells were injected subcutaneously into syngenic mice, and many kinds of differentiated cells were observed on the sections of the teratoma derived from this ES cell line. On the other hand, to test the chimeric ability of the ES cells, the CE2 cells were microinjected into the blastocysts of ICR mice, and a chimera was obtained among living pups. These results show that CE2 ES cells are pluripotent stem cells, which can differentiate into many kinds of cell types, and can be used as a cell system for further research. 展开更多
关键词 C57BL/6J mouse ES cell line establishment chimera.
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Generation of rat-mouse chimeras by introducing single cells of rat inner cell masses into mouse blastocysts
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作者 TiANDa Li Leyun Wang +7 位作者 Xinxin Zhang Liyuan Jiang Yufei Li Junjie Mao Tongtong Cui Wei Li Liu Wang Qi Zhou 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2018年第6期325-328,共4页
In the field of developmental biology and regenerative medicine,mammalian interspecific chimeras have been proved very useful for investigating early embryonic development and the immune system establishment,and exten... In the field of developmental biology and regenerative medicine,mammalian interspecific chimeras have been proved very useful for investigating early embryonic development and the immune system establishment,and extended to a promising potential for human organ generation(Rossant et al.,1982). 展开更多
关键词 Generation of rat-mouse chimeras by introducing single cells of rat inner cell masses into mouse blastocysts GFP
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绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定 被引量:8
3
作者 招霞 马芸 +6 位作者 陈系古 葛坚 黄冰 邓新燕 喻瓴 赖英荣 黄春浓 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期784-790,共7页
为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 ... 为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 GFP ,通过对昆明小鼠的囊胚腔注射 ,获得了 4只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠。其中 1只存活至成年 ,3只出生时死亡。荧光显像及组织PCR检测显示了绿色荧光蛋白在小鼠体内的嵌合情况。以绿色荧光为指标可实现活体水平的动态观察 ,本实验首次观察到以GFP为指标所示的机体嵌合情况与根据毛色嵌合推测的机体嵌合情况存在很大差异 ,以GFP为嵌合指标更加全面而准确 ;但不排除GFP对小鼠发育存在一定毒性的可能 ;另外 ,有结果显示供体ES细胞在宿主体内除了大片补丁状嵌合外 ,还存在细胞散在嵌合的情况 ,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性 。 展开更多
关键词 小鼠 嵌合体 体内 观察 供体 ES细胞 宿主 绿色荧光蛋白(GFP) 绿色荧光蛋白 体胚
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品系对小鼠胚胎干细胞分离效率的影响 被引量:6
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作者 李相运 邸科前 魏巍 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期250-254,共5页
为了充分利用小鼠胚胎干(ES)细胞,就必须从众多小鼠品系中分离ES细胞系。本研究通过传统的成纤维细胞饲养层法,从CD-1、129/Sv、C57BL/6J和129/Sv×C57BL/6J四种不同遗传背景的小鼠中分离得到12个ES细胞系,而从KM小鼠没有得到ES细... 为了充分利用小鼠胚胎干(ES)细胞,就必须从众多小鼠品系中分离ES细胞系。本研究通过传统的成纤维细胞饲养层法,从CD-1、129/Sv、C57BL/6J和129/Sv×C57BL/6J四种不同遗传背景的小鼠中分离得到12个ES细胞系,而从KM小鼠没有得到ES细胞系。所有的ES细胞系都具有典型的ES细胞特征,AKP染色呈阳性。从四种不同遗传背景的ES细胞系得到了包含多种组织的畸胎瘤;与桑椹胚聚合后,都得到了生殖系嵌合体。结果表明:品系对小鼠ES细胞的分离有显著影响,利用129小鼠以及包含129小鼠遗传背景的杂交小鼠都较容易分离ES细胞,由ES细胞得到生殖系嵌合体的效率在不同品系间有显著差异,从杂交ES细胞比近交ES细胞中更容易得到生殖系嵌合体。 展开更多
关键词 小鼠 品系 胚胎干细胞 嵌合体
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两个可进入种系的ES细胞系的建立 被引量:5
5
作者 韩嵘 陈伟胜 +2 位作者 童英 尚克刚 孟令国 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第3期208-212,共5页
从129/ter小鼠中建立了9个ES细胞系,它们在核型、生长速度、体内外分化能力等方面显示了各自不同的特点。通过囊胚显微注射法,将ES细胞注入C57BL/6J胚胎中,制作了嵌合体,并通过对嵌合体后代毛色的观察,判断了嵌合体生殖细胞的组... 从129/ter小鼠中建立了9个ES细胞系,它们在核型、生长速度、体内外分化能力等方面显示了各自不同的特点。通过囊胚显微注射法,将ES细胞注入C57BL/6J胚胎中,制作了嵌合体,并通过对嵌合体后代毛色的观察,判断了嵌合体生殖细胞的组成。结果表明,ES细胞系MESPU21、MESPU22都具有很强的种系嵌合能力。比较这两个细胞系与其他细胞系,证明一个好的ES细胞系必须具备核型正常、生长速度快、体外分化速度适中的特点。建系过程中精心的操作有利于获得好的ES细胞系。ES细胞体内分化形成的肿瘤的组织成分可能与嵌合体制作的结果间存在一定的相关关系。 展开更多
关键词 小鼠 ES细胞系 种系嵌合
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用免疫手术及胚泡注射法产生小鼠嵌合体 被引量:5
6
作者 张肇英 王达珍 +2 位作者 李昱 郭继彤 李雪峰 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1990年第3期438-445,共8页
用免疫手术的方法分离白色(昆明白)或棕色[昆明白×C57BL/6N)F_1,自交20代以上]小鼠胚泡的内细胞团,通过显微注射术将分离出的内细胞团,注入另一品系(棕色或白色)小鼠胚泡的胚泡腔内,经体外培养后移植到假孕受体子宫内,生下了嵌合... 用免疫手术的方法分离白色(昆明白)或棕色[昆明白×C57BL/6N)F_1,自交20代以上]小鼠胚泡的内细胞团,通过显微注射术将分离出的内细胞团,注入另一品系(棕色或白色)小鼠胚泡的胚泡腔内,经体外培养后移植到假孕受体子宫内,生下了嵌合体小鼠。共注射受体胚泡137枚,注射后成活121枚,成活率为88.3%(121/137),将98枚成活的胚泡移植到14只同步假孕受体小鼠子宫,移植后成活受体11只,其中7只受体受胎,受胎率为63.6%(7/11),7只受胎的受体小鼠,共接受胚胎49枚,产仔鼠30只,产仔率为61.2%(30/49)。到目前为止共存活14只仔鼠,仔鼠存活率为46.6%(14/30)。在9只已生长出毛的仔鼠中,2只仔鼠属于毛色嵌合,新生仔鼠中另2只仔鼠的眼睛颜色与供体胚的品系相同。眼球与其它组织的嵌合性,待进一步分析,免疫手术可以快速准确地得到大量的纯内细胞团,这种方法与胚泡注射法相结合,为制备动物嵌合体提供一条有效的新途径。 展开更多
关键词 胚胎移植 胚胞注射 免疫手术 小鼠
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小鼠胚胎干细胞构建嵌合体的方法 被引量:4
7
作者 郭雨霁 高英茂 +1 位作者 邴鲁军 李盛芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期324-327,共4页
目的 利用本实验室新近分离培养的远交系KM小鼠胚胎干细胞进行嵌合体构建实验。 方法 从KM小鼠囊胚的内细胞团中分离培养胚胎干细胞 ,进行近交系C5 7BL 6J小鼠受体囊胚腔内注射 ,进行嵌合体构建实验。 结果 从内细胞团中分离的胚... 目的 利用本实验室新近分离培养的远交系KM小鼠胚胎干细胞进行嵌合体构建实验。 方法 从KM小鼠囊胚的内细胞团中分离培养胚胎干细胞 ,进行近交系C5 7BL 6J小鼠受体囊胚腔内注射 ,进行嵌合体构建实验。 结果 从内细胞团中分离的胚胎干细胞具有胚胎干细胞的典型特征 ,克隆状生长 ,碱性磷酸酶染色呈强阳性 ,核型正常 ,悬浮培养能形成类胚体 ,已成功构建 1只嵌合鼠。 结论 利用我们分离的KM小鼠胚胎干细胞可成功地构建嵌合体。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 嵌合体 显微注射 小鼠
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小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究 被引量:3
8
作者 韦相才 马芸 +3 位作者 邓新燕 黄冰 陈系古 招霞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期215-218,i001,共5页
目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到... 目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。 展开更多
关键词 小鼠 嵌合体 细胞群 胚胎干细胞 囊胚 注射 雌鼠 假孕 毛色 品系
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小鼠孤雌胚的体内体外发育研究 被引量:2
9
作者 刘红林 范必勤 +3 位作者 汪河海 宗卉 王公金 陈宜峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期103-109,共7页
小鼠孤雌激活卵体外培养于CZB溶液中可发育至孵出囊胚阶段,而且孤雌胚移植后可在受体子宫内附植发育。单倍体、二倍体孤雌胚发育至桑椹胚的能力相似,但发育至囊胚的能力,后者高于前者。孤雌囊胚体外发育至孵出的比率仅为20%,... 小鼠孤雌激活卵体外培养于CZB溶液中可发育至孵出囊胚阶段,而且孤雌胚移植后可在受体子宫内附植发育。单倍体、二倍体孤雌胚发育至桑椹胚的能力相似,但发育至囊胚的能力,后者高于前者。孤雌囊胚体外发育至孵出的比率仅为20%,但在卵巢切除的受体子宫内其发育至孵出囊胚的比率提高到733%。与受精扩张囊胚相比,孤雌扩张囊胚在成纤维细胞饲养层上很难贴壁生长,但延迟孤雌囊胚的内细胞团(ICM)可在细胞饲养层上增殖,并可形成孤雌ES细胞集落。昆明鼠孤雌囊胚内细胞团细胞注射入C57BL/6J受精囊胚腔制作的嵌合胚可完成附植后的发育,但这些后裔未见毛色嵌合。 展开更多
关键词 小鼠 孤雌胚 ES细胞 嵌合体 发育
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C57 BL/6J小鼠ES细胞系的建立及其特性分析 被引量:15
10
作者 柴桂萱 韩嵘 尚克刚 《细胞生物学杂志》 CSCD 1996年第3期121-126,共6页
本文报道从C57BL/6J个鼠的囊胚中,建立了三个ES细胞系MESPU17,MESPU18,MESPU19。这些细胞的细胞学特征和强AKP反应,表明这三个细胞系具有干细胞的特征。这三个细胞系均为XY型,正常二倍体核型分别占70%、88%和59%。体外分化可形成简... 本文报道从C57BL/6J个鼠的囊胚中,建立了三个ES细胞系MESPU17,MESPU18,MESPU19。这些细胞的细胞学特征和强AKP反应,表明这三个细胞系具有干细胞的特征。这三个细胞系均为XY型,正常二倍体核型分别占70%、88%和59%。体外分化可形成简单类胚,体内分化可形成瘤块。与国际上通用的CCE和来自129/ter的ES细胞MESPU13相比,这三个细胞系的ES细胞较大;在体外培养时,生长较慢;细胞也较粘,进行显微注射时,很容易粘在注射针壁上。MESPU17,MESPU18进行了嵌合体制作,以BALB/c和昆明鼠的囊胚为受体,采用囊胚注射法未获嵌合体,但使用昆阴鼠的8细胞胚注射法和共培养法得到嵌合体。 展开更多
关键词 小鼠 EB细胞 细胞系 细胞生物学
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囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究 被引量:2
11
作者 付志新 刘宗平 +2 位作者 梁建兰 李善刚 陈学进 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期149-154,共6页
在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系(S8),在此基础上,以S8为供体细胞,以远交系昆明白小鼠3.5d胚胎为受体,通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内,经过恢复培养,移植到... 在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系(S8),在此基础上,以S8为供体细胞,以远交系昆明白小鼠3.5d胚胎为受体,通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内,经过恢复培养,移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中;后代在嵌合体出生一周后进行判定。本试验用8~13代的S8细胞共注射胚胎597枚,经1~3h恢复培养,有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔,细胞轮廓分明,滋养层细胞间连接也清晰可见,胚胎成活率为97%;胚胎移植后,代孕母鼠共移植胚胎228枚,经17~19d的妊娠期后,产仔37只(2只死胎),产仔率为16%;有35只仔鼠(雄鼠18只,雌鼠17只)存活到可以判断毛色,共获得8只S8细胞毛色嵌合体小鼠,嵌合体的产生率为21.6%。结果表明用S8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体,并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本试验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 囊胚注射 LACZ基因 胚胎移植 嵌合体小鼠
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不同小鼠品系囊胚受体对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响 被引量:2
12
作者 周舒雅 左琴 +4 位作者 刘甦苏 王辰飞 李保文 贺争鸣 范昌发 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期353-358,共6页
目的考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响,进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。方法选取近交系B6(Cg)-Tyrc-2J和BALB/c品系及封闭群ICR作为囊胚供体鼠,通过在TLX3、Ai3K和SL... 目的考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响,进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。方法选取近交系B6(Cg)-Tyrc-2J和BALB/c品系及封闭群ICR作为囊胚供体鼠,通过在TLX3、Ai3K和SL三个不同基因修饰ES细胞的种系嵌合实验中,平行比较三者的囊胚利用率、嵌合鼠获得效率以及种系遗传效率等三个方面,并进一步针对囊胚来源这一因素对效率的影响进行统计学分析。结果三种ES细胞均未能通过B6(Cg)-Tyrc-2J品系囊胚的注射获得种系遗传。而BALB/c品系与ICR品系相比,囊胚利用率明显低于ICR品系(P<0.05);嵌合鼠获得效率方面,BALB/c与ICR相当(P=0.115);而种系遗传效率方面,BALB/c品系显著高于其他品系(P<0.01)。结论 BALB/c品系在C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率方面确实具有优势,然而,由于BALB/c囊胚较难获得,并且存在发育延迟和透明带脆性高等问题,而ICR品系在囊胚获得和利用方面的效率明显高于BABL/c,并且也可以支持C57BL/6胚胎干细胞的种系遗传,因此也是C57BL/6胚胎干细胞囊胚注射中较好的选择。 展开更多
关键词 C57BL/6胚胎干细胞 BALB/c囊胚 ICR囊胚 B6(Cg)-Tyr^c-2J囊胚 种系嵌合效率
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^(131)I-chTNT在分化型甲状腺癌肺转移患者体内的生物学分布 被引量:2
13
作者 张浩然 马庆杰 +3 位作者 赵劼 高识 孟祥芹 赵国庆 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-67,共3页
目的研究131I标记的肿瘤细胞核人鼠嵌合单克隆抗体(131I-chTNT)在分化型甲状腺癌肺转移病人体内的生物学分布。方法10例分化型甲状腺癌患者,单次静脉注射131I-chTNT(5MBq/kg体重)后测量各时间点血、尿样放射性;应用超饱和三氯醋酸检测13... 目的研究131I标记的肿瘤细胞核人鼠嵌合单克隆抗体(131I-chTNT)在分化型甲状腺癌肺转移病人体内的生物学分布。方法10例分化型甲状腺癌患者,单次静脉注射131I-chTNT(5MBq/kg体重)后测量各时间点血、尿样放射性;应用超饱和三氯醋酸检测131I-chTNT在体内的稳定性和代谢情况。采用连续显像法勾画感兴趣区估算全身、肿瘤和主要器官不同时间点的摄入百分比。结果静脉推注131I-chTNT后血清时间放射性曲线结果符合单次静脉给药二室模型,T1/2(65.28±14.83)h,AUC0-t(8.93±1.32)MBq.h-1.ml-1,AUC0-∞(10.58±2.19)MBq.h-1.ml-1,CL(1635±359.15)ml.min-1.kg-1;静脉推注131I-chTNT后尿液时间排除放射性百分比曲线符合单次静脉给药一室模型,T1/2(99±9.6)h,1w累计有注入剂量(31±9)%的放射性经尿液排泄;血清中131I-chTNT占放射性成分的百分率,其中24,48,72h血清中的131I-chTNT均超过95%,168h131I-chTNT仍达到(88±7)%;尿中放射性物质的化学成分,24,48,72,168h尿液样本放射性100%源于游离的131I;131I-chTNT静脉推注后放射性主要浓聚在肺和肝,脑最少。肿瘤组织放射性24h达到最大值,T/N比值在3~7d达到最大值(1.28~3.83)。结论131I-chTNT在分化型甲状腺癌肺转移病人体内的生物学分布特点有可能为该肿瘤的治疗提供帮助。 展开更多
关键词 放射性核素 肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 分布 肺转移
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小鼠胚胎聚合法的几个技术环节 被引量:1
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作者 孙兴参 谭景和 +2 位作者 刘中华 贺桂馨 秦鹏春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期295-298,共4页
结合细胞计数方法研究了胚胎聚合法的几个技术环节。结果:(1)8-细胞早期胚胎在0.03%的聚合液(PHA)中作用5、10、15min,胚胎聚合率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05);(2)8-细胞早期胚胎,在0.0... 结合细胞计数方法研究了胚胎聚合法的几个技术环节。结果:(1)8-细胞早期胚胎在0.03%的聚合液(PHA)中作用5、10、15min,胚胎聚合率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05);(2)8-细胞早期胚胎,在0.06%PHA和0.12%PHA中作用的胚胎聚合率显著高于在0.03%PHA中作用的(P<0.05),而在0.03%PHA和0.06%PHA中作用的聚合胚的囊胚发育率显著高于在0.12%PHA中作用的(P<0.05);(3)PHA浓度(在0.03%~0.12%范围内)对8-细胞晚期聚合胚的发育率影响不大(P>0.05);(4)在相同条件下,8-细胞晚期胚胎的聚合率显著高于8-细胞早期胚胎和桑椹期胚胎,8-细胞晚期聚合胚的发育率也高于其他时期的,因此8-细胞晚期是进行胚胎聚合的最佳时期;(5)8-细胞早期胚胎的聚合率和囊胚发育率随操作室温的降低而显著下降;(6)细胞计数分析表明,链霉蛋白酶和酸性台氏液2种去透明带方法产生的聚合囊胚细胞数目没有差异,但移植用链霉蛋白酶处理的聚合囊胚,8只受体中无1例妊娠,而移植用酸性台氏液处理的聚合囊胚,5只受体中有1只妊娠;(7)向子宫的子宫颈方向移植聚合囊胚,6只受? 展开更多
关键词 小鼠 嵌合体 聚合技术 细胞计数
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胚胎干细胞嵌合体小鼠的制备及其影响因素 被引量:4
15
作者 白照岱 沈和 《生殖医学杂志》 CAS 2007年第6期444-447,共4页
胚胎干细胞(ES cell)嵌合体制备在发育生物学,功能基因组学等研究领域发挥越来越重要的作用。其技术本身随着干细胞生物学,体细胞核移植技术进步而不断发展。但其制备过程受ES细胞,宿主囊胚遗传背景、生存状态及嵌合体制备程序等诸多因... 胚胎干细胞(ES cell)嵌合体制备在发育生物学,功能基因组学等研究领域发挥越来越重要的作用。其技术本身随着干细胞生物学,体细胞核移植技术进步而不断发展。但其制备过程受ES细胞,宿主囊胚遗传背景、生存状态及嵌合体制备程序等诸多因素影响,导致ES细胞嵌合体的制备程序颇为复杂。本文将对ES细胞嵌合体小鼠制备技术的最新进展作一综述。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 嵌合体 小鼠
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小鼠胚胎嵌合的研究 被引量:2
16
作者 吴民耀 窦忠英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 1993年第S2期77-83,共7页
选用昆白.CI_(57)及B/L_(615)三个品系小鼠,对其8细胞期(8C),桑椹期(M)和囊胚期(B)的全胚和半胚(半)进行聚合,培养和移植试验。8细胞期及桑椹期胚胎的聚合发育率显著高于囊胚期(P<0.05),全胚聚合的发育率显著高于半胚(P<0.05)。... 选用昆白.CI_(57)及B/L_(615)三个品系小鼠,对其8细胞期(8C),桑椹期(M)和囊胚期(B)的全胚和半胚(半)进行聚合,培养和移植试验。8细胞期及桑椹期胚胎的聚合发育率显著高于囊胚期(P<0.05),全胚聚合的发育率显著高于半胚(P<0.05)。将同品系和不同品系的8细胞期,桑椹期和囊胚期胚胎嵌合移植给27只受体,9只妊娠,妊娠率分别为17%(1/6),40%(6/15)及33%(2/6),平均为33%(9/27),共产仔35只,其中不同品系胚胎的嵌合胚移植,产仔15只,4只为皮毛嵌合体。 展开更多
关键词 嵌合体 胚胎嵌合 小鼠
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人源化小鼠人源细胞检测方法 被引量:2
17
作者 陈炜 冯娟 +2 位作者 施海霞 梁虹 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第7期63-66,共4页
目的人源化小鼠在人类疾病与再生医学研究中具有广泛应用,为获得一种理想的人源化小鼠检测方法,研究人特异性线粒体序列扩增作为人源化动物模型中人类DNA检测方法的可行性。方法设计人线粒体DNA特异性引物,并用该引物对人脐血造血干细... 目的人源化小鼠在人类疾病与再生医学研究中具有广泛应用,为获得一种理想的人源化小鼠检测方法,研究人特异性线粒体序列扩增作为人源化动物模型中人类DNA检测方法的可行性。方法设计人线粒体DNA特异性引物,并用该引物对人脐血造血干细胞嵌合体小鼠进行了检测。结果在人源化动物模型的人类DNA检测中,这种人线粒体DNA的PCR检测方法能够达到理想的特异性与灵敏性,是一种理想的嵌合体小鼠检测方法。结论获得了一种理想的人源化小鼠人源细胞检测方法。 展开更多
关键词 人源化小鼠 脐血干细胞 线粒体DNA
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应用FRAP技术分析小鼠嵌合体和正常胚胎发育中细胞间隙连接介导通讯 被引量:1
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作者 徐营 雷蕾 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第1期48-53,共6页
应用激光扫描共聚焦显微镜的光漂白恢复(fluorescence redistribution after photobleaching,FRAP)技术分析小鼠嵌合体胚胎和正常胚胎的卵裂球之间细胞间隙连接介导通讯(gap junctional inter-cellular communica-tion,GJIC),结果发现:8... 应用激光扫描共聚焦显微镜的光漂白恢复(fluorescence redistribution after photobleaching,FRAP)技术分析小鼠嵌合体胚胎和正常胚胎的卵裂球之间细胞间隙连接介导通讯(gap junctional inter-cellular communica-tion,GJIC),结果发现:8-细胞期嵌合体胚胎的光漂白恢复率(24.3%)明显低于正常胚胎(64.2%),提示GJIC的降低可能是影响嵌合体胚胎发育率降低的因素之一;囊胚的光漂白恢复率也较低(22.7%),提示随着细胞分化,GJIC的水平有所降低。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微镜 光漂白恢复技术 细胞间隙连接介导通讯 嵌合体 鼠卵裂球
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人类胚胎干细胞与小鼠囊胚嵌合的探讨
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作者 徐小明 杜丽丽 +2 位作者 林戈 段馨 卢光琇 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第2期42-46,共5页
【目的】探讨人类胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)能否在小鼠胚胎环境中生存并参与其各个组织器官的分化,为hESCs与小鼠囊胚嵌合的可行性研究提供依据。【方法】将154枚受精后3.5 d(3.5days postcoitum,3.5 dpc)ICR品... 【目的】探讨人类胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)能否在小鼠胚胎环境中生存并参与其各个组织器官的分化,为hESCs与小鼠囊胚嵌合的可行性研究提供依据。【方法】将154枚受精后3.5 d(3.5days postcoitum,3.5 dpc)ICR品系小鼠囊胚随机分为3组:试验组(注射hESCs)、模拟注射组(注射针仅刺破透明带及滋养层细胞,但不注射细胞和溶液)及对照组(未注射),于注射后培养24 h统计囊胚完全孵化率。将稳定转染增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的含有9~15个hESCs的小细胞团块,显微注射入3.5 dpcICR品系小鼠囊胚腔内,注射后分别于3,24,48,69,77,94和116 h,在普通荧光显微镜下观察EGFP阳性细胞的定位与动态分布情况,并将嵌合体胚胎移植入假孕母鼠子宫内,分别于移植后第4天和第6天处死孕鼠,普通荧光显微镜下观察EGFP阳性细胞在整个小鼠胚胎中的分布情况。【结果】注射后24 h,试验组和模拟注射组的囊胚完全孵化率分别为73.6%和77.1%,均极显著高于对照组(38.3%)(P〈0.01),有88.9%(32/36)的胚胎中的hESCs迁移并定位在小鼠内细胞团(ICM)及其临近的滋养层细胞上;体外培养48 h后,EGFP阳性细胞数进一步减少;116 h后,只有1枚胚胎仍残留3~4个EGFP阳性细胞,且散在分布于ICM克隆之外。体内发育试验结果显示,将43枚注射后的嵌合体囊胚移植入6只代孕母鼠子宫内,获得了22枚脱膜,有17枚脱膜中含有胚胎,其中形态正常胎儿14枚,没有胚胎含有EGFP阳性细胞。【结论】hESCs很难与小鼠囊胚正常嵌合。 展开更多
关键词 人类胚胎干细胞 囊胚 小鼠 嵌合体
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EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
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作者 段彪 邵华 +2 位作者 魏著英 王凤武 旭日干 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期417-422,共6页
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光... 生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。 展开更多
关键词 EGFP转基因小鼠 嵌合体 杂种ES细胞 生殖系
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