高效液相色谱法测定心肌组织腺苷酸的方法和意义

运用高效液相色谱技术(HPLC)分析心肌组织能量代谢的情况,以腺苷酸(ATP、ADP、AMP)含量的变化判断心肌的缺血程度。方法快速、灵敏、准确,且所需组织样品较小,是动态观察心肌缺血损害时能量代谢变化的理想方法。

木薯AGPase基因家族的生物信息学及其表达分析

【目的】搜索鉴定木薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)的基因家族成员,并分析其生物学信息及不同组织和非生物胁迫下的表达情况,为木薯AGPase基因的功能挖掘及淀粉性状遗传改良提供理论依据。【方法】从木薯基因组数据库(Phytozome)下载木薯全基因组序列,从中筛选含NTP_transferase(Pfam编号PF00483)保守结构域序列的AGPase基因家族成员,利用生物信息学方法对其结构特征及编码蛋白序列进行分析。基于NCBI转录组测序(RNA-seq)数据,对木薯AGPase基因家族成员在不同组织及冷害和干旱胁迫下的表达模式进行分析。【结果】从木薯全基因组序列中共鉴定出9个AGPase基因家族成员,包含6个AGPase大亚基(LS)基因和3个小亚基(SS)基因。6个LS基因在长度和编码氨基酸数目上差异明显,但3个SS基因间的差异不明显。LS基因外显子数目为8～15个,SS基因外显子数目均为9个。9个木薯AGPase基因家族成员分布于8条染色体和1个scalefold中,未在染色体上发现串联成簇分布现象。木薯AGPase基因家族启动子区域含有多个干旱响应元件、光响应元件、激素响应元件及多种除干旱外的其他非生物胁迫响应元件。9个AGPase基因家族成员在不同木薯组织间的表达模式具有组织特异性。经冷害胁迫后,除MeAGL1.3基因外,其余8个基因表达量均极显著(P<0.01,下同)或显著(P<0.05,下同)下调;经干旱胁迫后,MeAGL1.4、MeAGS1.1、MeAGS1.2和MeAGS2基因表达量极显著或显著下调,MeAGL1.3基因的表达量显著上调,其余基因与对照无显著差异(P>0.05)。【结论】木薯AGPase基因家族成员具有保守的基因结构和功能结构域,其表达具有组织特异性,大多数成员表达水平受冷害和干旱胁迫调控。

miR-222调控PARP-1在高糖致人肾脏系膜细胞tPA/PAI-1紊乱中的作用

目的探讨微小RNA-222(miR-222)调控多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖诱导人肾脏系膜细胞(HMC)组织型纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1(tPA/PAI-1)紊乱中的作用。方法体外培养HMC,实时定量PCR分别检测正常糖(5 mmol/L)及高糖(25 mmol/L)刺激下miR-222表达;另将体外培养的HMC分为正常糖组、25 mmol/L高糖组、高糖+miR-222 mimics阴性对照组、高糖+miR-222 mimics组4组,运用蛋白免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达,ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白。结果实时定量PCR显示,高糖组HMC在24 h时miR-222mRNA表达水平是正常糖组的2.537倍。高糖组HMC中PARP-1蛋白表达高于正常糖组(P<0.05),高糖+miR-222 mimics组HMC中PARP-1蛋白表达低于高糖组(P<0.05),而高糖+miR-222 mimics阴性对照组与高糖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常糖组比较,高糖组的tPA和tPA/PAI-1降低、PAI-1升高(P均<0.05);与高糖组比较,高糖+mimics组的tPA和tPA/PAI-1升高、PAI-1降低(P均<0.05)。高糖+miR-222 mimics阴性对照组与高糖组tPA、PAI-1及tPA/PAI-1比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论高糖可增强HMC PARP-1及分泌型PAI-1的蛋白表达、减弱分泌型tPA的蛋白表达,下调tPA/PAI-1比值。miR-222可有效下调靶蛋白PARP-1的表达,并有效改善高糖诱导的tPA/PAI-1紊乱。

荣筋片对SAMP6鼠血清及骨髓组织中脂联素的影响

观察荣筋片对SAMP6鼠血清中ADP水平及骨髓组织中ADP蛋白表达水平的影响,探讨荣筋片治疗骨质疏松症的作用机制。方法:选取6月龄SAMP6鼠30只,按体重随机分为荣筋片组、空白对照组。同源对照组选取同月龄SAMR1鼠15只。荣筋片组给予3ml药液灌胃,空白对照组给予3ml生理盐水灌胃,均每天1次,连续12周后,摘眼球采血,ELISA法检测血清ADP的含量;取股骨骨髓制作涂片,免疫组化测定骨髓组织中ADP的蛋白表达。结果:各组血清ADP的含量比较,空白对照组、荣筋片组ADP血清含量明显高于SAMRl对照组(P﹤0.01),差异有统计学意义;荣筋片组低于空白对照组(P﹤0.05),差异有统计学意义。各组骨髓组织ADP蛋白水平表达比较,与空白对照相比,SAMRl对照组、荣筋片组骨髓组织ADP蛋白表达水平明显下调(P﹤0.01),差异有统计学意义;与SAMRl对照组相比,荣筋片组骨髓组织ADP蛋白表达水平明显下调(P﹤0.01),差异有统计学意义。结论:荣筋片能够降低SAMP6鼠ADP血清含量及下调骨组织蛋白表达水平,可能会改善自发性骨质疏松动物骨髓基质干细胞成骨-成脂分化ADP水平的异常。

妊娠对大鼠脂肪干细胞增殖及成肝分化潜能的影响

背景:研究发现妊娠与干细胞的活性有明显关联。然而,尚未见到有关妊娠对脂肪干细胞影响的相关报道。目的:评估妊娠状态对大鼠脂肪干细胞增殖能力和诱导分化为类肝细胞潜能的影响。方法:分别获取正常大鼠和妊娠大鼠2种来源的脂肪干细胞进行原代分离、培养和鉴定。利用CCK8法检测脂肪干细胞的增殖能力。采用相同肝诱导培养基,诱导脂肪干细胞分化为类肝细胞。荧光定量PCR检测诱导第0,7,14,21天时肝细胞标志物的表达;ELISA方法检测白蛋白分泌和尿素合成水平。结果与结论:(1)成功分离培养出正常大鼠和妊娠大鼠来源脂肪干细胞,经流式细胞术鉴定符合干细胞一般特性(CD44+/CD45-/CD90+);(2)与正常大鼠来源脂肪干细胞相比较,妊娠大鼠来源脂肪干细胞增殖更快,诱导分化为成骨、成脂和成肝细胞时间更短,肝细胞标志物变化更加迅速,白蛋白分泌和尿素合成能力更高;(3)妊娠对脂肪干细胞的增殖和分化具有促进作用,推测可能与雌激素水平相关。

绿茶有效组分固定剂量联合对牙周炎大鼠的治疗效果

目的探讨绿茶4种主要有效组分联合用于牙周炎大鼠治疗的效果。方法将288只牙周炎模型SD大鼠随机均分为空白组(生理盐水)、单用1组(茶多酚)、单用2组(咖啡碱)、单用3组(铁)、单用4组(锌)、联用1组(茶多酚联用铁)、联用2组(茶多酚联用锌)、联用3组(咖啡碱联用铁)、联用4组(咖啡碱联用锌),共9组,均干预5 d;比较9组大鼠干预前后龈沟液中脂联素(ADP)及内毒素(RSE)的含量,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-17(IL-17)含量,使用相加交互作用分析4个联用组对ADP的影响。结果干预后,ADP含量单用1组和单用2组高于空白组、联用1组高于单用1组、联用2组高于单用2组、联用4组高于单用2组,RSE含量正好相反(P<0.001);TNF-α含量,单用1组低于空白组、联用2组低于单用2组、联用4组低于单用2组(P<0.001);IL-17含量,4个单用组低于空白组,联用1组低于单用1组、联用2组低于单用2组、联用4组低于单用2组(P<0.001);4个联用组均存在相加交互作用,作用最强的是联用2组(AP=70.27)。结论绿茶中茶多酚和咖啡碱有抗菌作用,且茶多酚、咖啡碱、铁、锌兼有抗炎作用,其中茶多酚和锌搭配的使用效果最好。