梨多倍体种质资源的鉴定

使用SSR荧光分子标记技术与流式细胞术相结合的方法,对保存于国家果树种质兴城梨、苹果圃内的100份梨种质资源进行倍性鉴定。结果表明:共鉴定出18份新的梨多倍体种质,其中三倍体梨种质17份,二、三倍体嵌合体1份;4份存在争议的三倍体种质,分别是其力阿木提、骚梨、六月鲜、窝窝。少量SSR位点的多等位基因扩增不能作为梨多倍体种质资源的判断依据,多个SSR位点的3个等位基因扩增,并结合流式细胞术可以准确鉴别梨多倍体种质资源。

四色荧光标记抗体在白血病免疫分型中的应用及意义

为探讨多参数流式细胞术对白血病免疫分型的方法及意义 ,本研究自行设计了一系列 4种荧光标记的单克隆抗体组合 ,对 88例急性白血病患者骨髓或外周血进行流式细胞仪免疫表型分析。应用本组抗体组合可对T ALL和B ALL及AML M1 -M7患者做出诊断 ,并可诊断形态学难以辨认的AML M0 ,及一般免疫分型法较难辨认的单核细胞白血病。应用 4组四色荧光标记的抗体组合 ,共含 1 3种抗体 ,既可将 90 %以上的白血病患者分为ALL或AML ,并可鉴别急性白血病的主要亚型 ,及反映血细胞的分化成熟度。结论 :四色荧光抗体组合可用较少的抗体 ,特异地对白血病细胞进行多参数免疫分型分析 。

CdTe量子点对HeLa细胞的初步标记

采用巯基丙酸作为稳定剂在水相中合成了水溶性的CdTe量子点,并通过量子点外层包被的羧基实现了量子点与兔抗人癌胚抗原抗体和山羊抗兔免疫球蛋白的链接.把链接了兔抗人癌胚抗原抗体的量子点溶液和链接山羊抗兔免疫球蛋白的量子点溶液作为荧光探针,利用直接法和间接法分别对HeLa活细胞和固定细胞进行了标记.通过荧光显微镜成像观察到直接法和间接法均可以对HeLa细胞进行标记,但间接法具有更好的特异性,表明可以通过癌细胞表面的癌胚抗原与抗体之间的免疫反应实现对癌细胞的荧光标记.

流式细胞术免疫荧光测量中的直标及间标

直接标记和间接标记是免疫荧光测量中两种不同的标记方法。在流式细胞计测量中，一般说来，直接标记不易引入样品的非特异性结合，因此引入干扰少，样品的数据好处理，而间接标记由于有放大作用，容易引入非特异结合的干扰，严重时所得数据无法区分特异及非特异信号，造成数据分析的混乱，通过样品实测比较，认为在流式细胞计测量中应用直接样品更为合适。

外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架效力测试实验方法的研究

摸索改进外用红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)细胞壁骨架的两种效力测试方法,即流式细胞术-荧光微球法、流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体),并与国家食品药品监督管理局原审批方法进行比较,经过统计学评估,评价两种方法的可行性。通过抽取小鼠免疫后获得的腹腔液注入到流式细胞仪,在发射光的荧光通路中,检测巨噬细胞的荧光强度,测定未吞噬荧光微球的巨噬细胞和吞噬荧光微球的巨噬细胞的比例,全部数据经统计学分析,按公式计算吞噬率及吞噬指数完成流式细胞术检测过程。分别采用荧光微球以及荧光微球+荧光抗体两种方式上机检测巨噬细胞吞噬结果。测得的结果与原检验方法——人工显微镜观察法的结果进行比较,确定评估方法的有效性和准确性。结果表明,显微镜人工计数法与流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体)的3次实验结果与正常对照组比较,吞噬率明显升高(P<0.01),吞噬指数明显增大(P<0.01),有显著性差异,判定结果为阳性;3次流式细胞术-荧光微球法实验,结果不稳定。流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体)由于加入了成熟小鼠巨噬细胞表面特异性标志物抗体F480荧光抗体,可有效标记小鼠巨噬细胞,加强了流式细胞仪收集巨噬细胞的准确性,两者结合应用更能准确反映供试品对小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。利用此方法检测外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架增强免疫力的结果和药品原检验方法的统计学结果一致。该方法获取的巨噬细胞数量远多于原方法,加入的荧光微球及荧光抗体,能更准确反应供试品对小鼠巨噬细胞的吞噬作用。该方法灵敏性高、稳定性好,并且易操作,可作为原实验方法的改良参考。

莪术醇诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡与细胞内活性氧增加的实验研究

目的:研究莪术醇抑制BGC-823人胃癌细胞增殖、影响细胞凋亡以及细胞内活性氧(reactive oxy-gen species,ROS)水平变化等生物效应。方法:用MTT法、AO/EB双荧光染色及荧光显微镜、FITC-AnnexinV与PI双染法、流式细胞术检测观察各种生物及形态指标。结果:不同浓度莪术醇在不同时间作用BGC-823,可抑制细胞增殖,并呈浓度、时间依赖性;荧光显微镜观察,经莪术醇作用后,实验组细胞核呈固缩状或圆珠状,可见凋亡小体;人胃癌BGC-823细胞经过不同浓度的莪术醇作用后,凋亡细胞比例明显升高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05):不同浓度莪术醇作用人胃癌BGC-823细胞后,细胞内活性氧水平与莪术醇呈浓度依赖性升高,莪术醇作用24、48h后与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:莪术醇可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖及诱导细胞凋亡。莪术醇诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡与ROS产生增加相关。

流式细胞术在神经细胞研究中的应用进展

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。近年来荧光驱动的细胞分选(fluorescence-activatied cell sorting,FACS)广泛应用于神经细胞研究领域中。该文将流式细胞分选与其他分选方法进行了对比,并评述了流式细胞术在神经细胞中的研究应用,总结了流式细胞术在神经细胞研究中的技术难点及解决途径,以期通过流式新技术更好地寻找针对神经系统发育相关性疾病的治疗思路和线索。