直接多肽结合试验组合人细胞系活化试验预测皮肤致敏物的探讨

目的建立直接多肽结合试验(DPRA)和人细胞系活化试验(h-CLAT)的皮肤致敏组合检测方法,对化学品及植物提取物的致敏性进行初筛。方法选择12种化学品和7种植物提取物为受试物,把不同受试物分别与两种肽(半胱氨酸肽和赖氨酸肽)共孵育24 h,采用高效液相色谱法分析反应后多肽消耗。同时将不同浓度的受试物与体外培养的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)共孵育24 h,通过流式细胞仪检测暴露后细胞表面标志物CD86和CD54的变化。再进一步比较DPRA和h-CLAT预测结果的一致性。结果 DPRA方法和h-CLAT方法准确区分了12种化学品的皮肤致敏性,其中2种判定为阴性,10种判定为阳性,两种方法检测结果一致。DPRA对植物提取物致敏性的预测中,除绿茶提取物无法判定外,其余6种均为皮肤致敏疑似物质。h-CLAT预测中,除绿茶提取物、马齿笕提取物和人参果提取物为非致敏物,其余4种植物提取物为致敏物。DPRA与h-CLAT预测的一致性为0.57。结论 DPRA与h-CLAT的简单组合可以实现对单一化合物的准确预测,对于复杂混合物可实现初步预测,确认需要进一步组合其他方法。

直接多肽反应试验在化妆品检测中的应用

以OECD指南为基础,在实验室建立直接多肽反应试验(DPRA)方法并进行实验室内验证,同时评估该方法对测试化妆品配方致敏反应的可能性。依据OECD TG 442C指南,将受试物(包括化学品和化妆水配方)分别与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽以10:1和50:1的比例避光孵育24h,采用高效液相色谱法分析两种多肽的消耗,计算多肽消耗率并依据DPRA预测模型对受试物致敏性进行判定。由试验结果可知,DPRA可准确区分16种化学品的致敏性,检测结果与OECD TG 442C指南及文献中小鼠淋巴结试验(LLNA)结果一致;DPRA对3种化妆水配方检测结果分别为致敏物、致敏物、非致敏物,与多肽反应程度分别为中、低和无。

直接肽段结合方法在中药注射剂过敏反应预测中的应用

目的:采用直接肽段结合方法(DPRA)考察两种中药注射剂的过敏反应,评估该方法在中药注射剂过敏反应检测中应用的可能性。方法:运用HPLC法,通过测定两种中药注射剂对半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽的消耗,来推测其产生过敏反应的可能性。结果:两种中药注射剂对半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽均有不同程度的消耗,预示有潜在的致敏性。结论:该方法可以作为中药注射剂过敏反应的预测方法。

一种新型in silico模型在化妆品原料皮肤致敏性初筛中的应用

用Derek EC3模型对OECD TG429和TG442C中32个验证化合物、114个外部数据集中已有致敏结果和120个已有小鼠局部淋巴结试验(LLNA)和直接肽反应(DPRA)试验数据的化妆品原料化合物进行致敏性评价,通过比较Derek结果与致敏性结果(LLNA或DPRA)的一致性对Derek模型的适用性进行评价。对于LLNA试验的标准验证物质,Derek方法的预测特异度为50%(3/6),灵敏度为81.25%(13/16),准确度为72.73%(16/22);对于DPRA试验的标准验证物质,Derek方法的预测特异度为75%(3/4),灵敏度为100%(6/6),准确度为90%(9/10);Derek方法对109个外部数据集中化合物致敏性预测特异度为79.01%(64/81),灵敏度为71.43%(20/28),准确度为77.06%(84/109);与LLNA比较,120个化合物致敏性评价结果中Derek和DPRA方法特征参数分别为特异度60.71%/74.07%、灵敏度84.27%/67.42%、准确度78.63%/68.97%,组合这两种方法特异度为51.72%(15/29),灵敏度为90.11%(82/91),准确度为80.83%(97/120)。结果表明,Derek EC3模型适用于化妆品原料的皮肤致敏性初筛。