-
题名β-琼胶酶AgaB催化活性的定向进化
- 1
-
-
作者
马怡茗
路新枝
石超
马翠萍
于文功
-
机构
中国海洋大学医药学院
-
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期206-210,共5页
-
基金
863计划(2004AA625020)资助项目
-
文摘
用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶 AgaB 热稳定突变酶 M446的催化活性。采用易错 PCR 和化学诱变法相结合的方法,构建了 M446的突变体文库;利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的特性,建立了阳性克隆的高通量筛选体系。最终筛选得到酶活性得到提高且保持较高耐热性的突变酶 M117,其酶活提高为突变酶 M446的3倍。测序分析发现编码突变酶 M117的 DNA 序列中有4处点突变,其中2处为同义突变,另外2处引发氨基酸替换,分别为 R9K 和 I111V。对突变酶 M117与 M446的动力学常数进行了比较,发现 M117的 Km 值降低了93.4%,Kcat/Km 值提高了15倍,由此可以推断突变酶M117比活力提高的主要原因是酶与底物的亲和能力提高。
-
关键词
定向进化
易错pcr
化学诱变
酶活力
Β-琼胶酶
-
Keywords
directed evolution, error prone pcr, chemical mutant, enzyme activity, β-agarase
-
分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
-