DDR1对结直肠癌侵袭和上皮细胞间质转化的影响

目的探究盘状结构域受体1(DDR1)对结直肠癌侵袭、上皮间质转化(EMT)的影响及机制。方法收集2018年1月至2021年1月在日照市人民医院进行外科手术肿瘤切除治疗的60例结直肠癌癌组织及其癌旁组织。免疫组化检测结直肠癌组织和癌旁组织中DDR1蛋白表达水平。体外培养人结肠上皮细胞和结直肠癌细胞,Western blot检测DDR1蛋白表达水平。随后结直肠癌上皮细胞分为转染DDR1阴性干扰片段组(DDR1⁃NC)、转染DDR1干扰片段组(DDR1⁃siRNA)、过表达DDR1无关片段组(OVE⁃NC)和过表达DDR1组(OVE⁃DDR1),Western blot检测DDR1、IL⁃6、p⁃STAT3和EMT相关蛋白表达变化。Trasnswell检测结直肠癌细胞侵袭情况。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织DDR1蛋白阳性表达率明显增加,差异有统计学意义(χ^(2)=20.979,P<0.05)。与人结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞DDR1蛋白表达明显增加差异有统计学意义(t=2.970、8.398、4.977、5.253,P<0.05)。与DDR1⁃NC组相比,DDR1⁃siRNA组细胞DDR1、IL⁃6、p⁃STAT3蛋白表达降低,差异有统计学意义(t=3.533、4.021、3.864,P<0.05),结直肠癌细胞侵袭能力降低,差异有统计学意义(t=6.695,P<0.05)、EMT进程被抑制。与OVE⁃NC组相比,OVE⁃DDR1组细胞DDR1、IL⁃6、p⁃STAT3蛋白表达升高,差异有统计学意义(t=4.752、6.759、4.896,P<0.05),结直肠癌细胞侵袭能力增加,差异有统计学意义(t=4.181,P<0.05),促进EMT进程。结论DDR1在结直肠癌细胞中表达升高,其能够通过调控IL⁃6/STAT3信号促进结直肠癌细胞侵袭和EMT。

维生素A调控DDR1介导的细胞自噬对孤独症大鼠神经行为学的影响

目的探究维生素A(vitamin A,VA)对丙戊酸钠(sodium valproate acid,VPA)诱导的孤独症大鼠神经行为学的影响及作用机制。方法将孕12.5 d大鼠分为对照组(Control)、模型组(Model)、VA组、DDR1抑制剂组(DDR1 inhibitor)、VA+DDR1过表达组(VA+OVE-DDR1),每组各10只。腹腔注射VPA(600 mg·kg^(-1))构建孤独症幼鼠模型。各组大鼠于出生后D28,自梳理实验检测大鼠重复刻板行为;三箱实验检测大鼠社交行为;Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;HE染色和免疫组化染色检测海马神经元形态和表型;电镜观察自噬小体数量;Western blot检测DDR1及自噬标志性蛋白LC3和p62表达。结果与Control组相比,Model组大鼠社交及学习记忆能力减弱,重复刻板行为增加,海马CA1区神经元损伤加重,NeuN阳性细胞数量明显减少,DDR1、p62表达升高,LC3表达降低,自噬小体数量减少(P<0.01)。与Model组相比,VA组和DDR1 inhibitor组大鼠社交及学习记忆能力增强,重复刻板行为减轻,海马CA1区神经元损伤减轻,NeuN阳性细胞数量增加,DDR1、p62表达降低,LC3表达增加,自噬小体数量增加(P<0.01)。与VA组相比,OVE-DDR1能够逆转VA对孤独症大鼠的作用。结论VA能够改善孤独症大鼠神经行为,机制与抑制DDR1表达,增强细胞自噬相关。

盘状结构域受体1在七氟烷麻醉诱导老年大鼠认知功能障碍中的作用研究

目的 探究盘状结构域受体1(DDR1)对七氟烷麻醉诱导老年大鼠认知功能障碍的影响及作用机制。方法 选取老年雄性SD大鼠40只随机分为对照组、DDR1抑制剂组、七氟烷麻醉组、DDR1抑制剂处理组,每组各10只。对照组大鼠常规培养,定量吸入空气;DDR1抑制剂组大鼠以DDR1抑制剂5μg侧脑室注射,30 min后定量吸入空气;七氟烷麻醉组大鼠经持续性吸入3%七氟烷6 h构建认知功能障碍模型;DDR1抑制剂处理组大鼠以DDR1抑制剂5μg侧脑室注射,30 min后吸入3%七氟烷6 h。采用Morris水迷宫实验评价各组大鼠认知功能,酶联免疫吸附试验检测各组大鼠海马组织炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;HE染色观察海马神经元损伤;免疫组织化学和Western blotting检测DDR1蛋白表达水平。结果 与对照组比较,七氟烷麻醉组大鼠逃避潜伏期时间延长,海马神经组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,神经元损伤评分和DDR1蛋白表达水平均显著升高,目标象限停留时间占比降低,穿越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与七氟烷麻醉组比较,DDR1抑制剂处理组大鼠上述指标明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 七氟烷麻醉诱导的老年大鼠认知功能障碍与海马组织DDR1蛋白表达增加相关。

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。

盘状结构域受体1对高糖诱导血管内皮凋亡的影响

目的初步探究盘状结构域受体1(DDR1)对高糖诱导血管内皮凋亡的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型(12周),血管多普勒超声检测主动脉内皮功能;HE染色观察主动脉内皮结构;Western blot检测凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;免疫组织化学和Western blot检测DDR1表达与分布。高糖(33 mmol·L-1)处理HUVECs 48 h,Hoechst染色检测细胞凋亡;转染DDR1 siRNA后检测细胞凋亡情况与凋亡相关蛋白表达。结果糖尿病大鼠主动脉内皮出现严重损伤。Bax、caspase-3和DDR1表达显著升高,Bcl-2表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。高糖处理HUVECs亦可上调Bax、caspase-3和DDR1,下调Bcl-2表达(P<0.05,P<0.01),诱导细胞凋亡。siRNA DDR1可降低高糖诱导的凋亡阳性细胞率增加(P<0.05,P<0.01),下调Bax和caspase-3,上调Bcl-2表达(P<0.05)。结论高糖可通过促进DDR1蛋白表达,诱导血管内皮细胞凋亡,导致血管内皮损伤。

人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

目的分析人参皂苷Rh2(G-Rh2)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级,雄性,SD大鼠30只,随机分为对照组(Control组)、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型,Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后,G-Rh2药物干预组给予G-Rh2(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续灌胃12周,Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态,Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度,TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;Western blot检测大鼠肾组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平;免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果与Control组相比,DN组肾组织纤维化程度加重,细胞凋亡指数升高(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01);与DN组相比,G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度,细胞凋亡指数,CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleavedcaspase-3、DDR1表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2表达显著升高(P<0.05)。结论G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。

白花蛇舌草乙醇提取物调控DDR1对大鼠肝癌细胞增殖的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对大鼠肝癌细胞增殖的影响及作用机制。方法选取Wistar大鼠82只,采用小剂量二乙基亚硝铵(DEN)构建大鼠肝癌模型,在动物造模成功后随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,各20只。造模成功后1 d,模型组给予乙醇提取物溶剂1 mL/(100 g·d)灌胃处理8周,后三组分别给予90、180、360 mg/(kg·d)白花蛇舌草乙醇提取物灌胃处理8周。观察各组大鼠一般情况;常规检测各组大鼠血清ALT、AST水平;采用HE染色观察各组大鼠肝脏组织形态学变化;采用免疫组化染色法测算各组大鼠肝组织PCNA阳性细胞表达率;采用Western blotting法检测各组大鼠肝组织PI3K、Akt和DDR1蛋白。结果模型组大鼠精神表现萎靡、毛发散乱,饮食量降低,低、中、高剂量组大鼠上述状态得到一定的改善。与模型组相比,低、中、高剂量组大鼠ALT和AST水平降低(P<0.05或<0.01)。HE染色显示模型组大鼠肝组织多处坏死,伴有明显的形态异常;低、中、高剂量组大鼠肝组织坏死减轻,细胞变性程度减轻。与模型组相比,低、中、高剂量组PCNA阳性细胞率降低,PI3K、Akt、DDR1蛋白表达降低(P<0.05或<0.01)。结论白花蛇舌草乙醇提取物能够抑制大鼠肝癌细胞增殖,其机制可能与下调DDR1表达,抑制PI3K/Akt信号通路有关。

阿司匹林调控DDR1对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响

目的探究阿司匹林调控盘状结构域受体1(DDR1)对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法选取30只无特定病原体级6~8周龄雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组和阿司匹林干预组,每组10只。线栓法制备脑缺血再灌注模型。观察阿司匹林(60 mg/kg)对神经元细胞凋亡以及胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和DDR1蛋白表达的影响。苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑神经元形态变化;原位末端转移酶标记技术染色检测神经元细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注组海马CA1区域椎体细胞稀疏、有大量空泡,细胞间质增宽,细胞核固缩,神经元细胞凋亡率显著升高[(50.25±8.50)%比(8.98±2.50)%](P<0.01),脑组织caspase-3、Bax和DDR1蛋白表达均显著上调[(2.58±0.38)比(0.71±0.20)、(1.82±0.43)比(0.72±0.27)、(2.33±0.58)比(1.21±0.44)](P<0.05),Bcl-2表达显著下调[(0.61±0.21)比(1.21±0.40)](P<0.05)。与脑缺血再灌注组相比,阿司匹林干预组CA1区域椎体细胞增多、空泡减少,细胞间质变窄,神经元细胞凋亡率降低[(30.25±9.44)%比(50.25±8.50)%](P<0.05),脑组织caspase-3、Bax和DDR1蛋白表达显著下调[(1.47±0.57)比(2.58±0.38)、(1.21±0.31)比(1.82±0.43)、(1.58±0.48)比(2.33±0.58)](P<0.05),Bcl-2表达显著上调[(1.02±0.31)比(0.61±0.21)](P<0.05)。结论阿司匹林能够改善脑缺血再灌注大鼠神经损伤,其作用机制可能与抑制DDR1蛋白表达、减少细胞凋亡相关。

ARD1、DDR2和IFITM1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨逮捕缺陷1蛋白(ARD1)、盘状结构域受体2(DDR2)、干扰素介导的跨膜蛋白1(IFITM1)在慢性鼻咽炎组织和鼻咽癌组织中的表达差异及其与患者临床预后的关系。方法选取2012年10月至2015年7月经病理组织活检确诊和存档的42例鼻咽癌组织和20例慢性鼻咽炎组织,采用实时荧光定量PCR法检测两组ARD1mRNA、DDR2 mRNA、IFITM1 mRNA表达水平;免疫组化法检测ARD1、DDR2、IFITM1蛋白表达水平;分析ARD1、DDR2、IFITM1蛋白表达与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析鼻咽癌组织中ARD1、DDR2、IFITM1表达与患者生存率的关系。结果与慢性鼻咽炎组织相比,鼻咽癌组ARD1 mRNA、DDR2 mRNA表达水平及蛋白阳性率均升高(P<0.05),IFITM1 mRNA表达水平及蛋白阳性率下降(P<0.05);ARD1、DDR2、IFITM1在有淋巴结转移、低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者中阳性表达率高于无淋巴结转移、中高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);ARD1阴性表达者3年生存率(85.7%)高于阳性表达者(45.7%)(P<0.05),DDR2阴性表达者3年生存率(84.6%)高于阳性表达者(37.9%)(P<0.05),IFITM1阳性表达者3年生存率(81.8%)高于阴性表达者(41.9%)(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中ARD1、DDR2高表达,IFITM1低表达,与患者临床病理特征及预后有关。

盘状结构域受体1(DDR1)激酶抑制剂的研究进展

盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1, DDR1)是一种胶原激活的受体酪氨酸激酶,在调节细胞分化、增殖、粘附、迁移、侵袭和基质重塑等重要过程中发挥关键作用. DDR1的过度表达或激活与炎症发生、发展以及肿瘤侵袭、转移等过程密切相关,因此DDR1是治疗炎症、纤维化和恶性肿瘤等疾病的潜在靶标.自20世纪90年代初,多种DDR1小分子抑制剂相继被报道,重点介绍了DDR1的结构功能、作用机制和信号通路,从药物化学的角度总结DDR1小分子抑制剂的设计方法、构效关系和药理活性.