Aurantiamide Acetate from Stems of Zanthoxylum Dissitum Hemsley

The genus Zanthoxylum (Rutaceae) is comprised of about 50 species in China.Zanthoxylum dissitum Hems-ley, locally called 'Shanpipa', has been used to treat pains in the loin,limbs and arthritis in Chinese folk medicine. Our previous study reported the isolation andidentification of five quinoline alkaloids . In this continuing study on the chemcial constituentsof Zanthoxylum dissitum Hemsley, a phenylalanine derivative was obtained .

铁冬青-单面针浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定

开展了HPLC法测定铁冬青-单面针及其浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量的方法学研究。确定了铁冬青的最优测定条件(流动相为乙腈-水;检测波长210 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL)、单面针的最优测定条件(流动相为甲醇-0.1%甲酸水;检测波长272 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL)、铁冬青-单面针浸膏的最优测定条件(流动相为乙腈-0.4%磷酸水;长梗冬青苷、白鲜碱检测波长为210 nm;紫丁香苷、氯化两面针碱检测波长为272 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量5μL)。在上述条件下,开展了HPLC测定法的线性范围、精密度、稳定性、重复性、回收率等实验,结果表明HPLC法可以较好地用于测定铁冬青-单面针及浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的含量。

蚬壳花椒中性亲脂性成分的抑菌活性及其化学成分

Effects of bacteriostasis of the Neutral Lipophilic Components in Zanthoxylum dissitum were studied. The neutral lipophilic extract was fractionated through SiO2 column and the products were identified by 1H-NMR, 13 C-NMR and MS. The results showed that the fraction exhibited strong bacteriostasis activity to Staphylococcus aureus and Salmonella sp. and also showed more or less inhibition on Escherichia coli. Six components were obtained,namely triacontane,1-hexadecanol,β-sitosterol,ursolic acid,isopimpinellin and bergapten. Except for β-sitosterol,the others were isolated from the plant for the first time. After the preliminary analysis,the coumarins were considered as the active components of bacteriostasis activity.

蚬壳花椒组培苗的增殖研究

为了筛选蚬壳花椒组培苗增殖的最优培养方案,对影响组培苗增殖的因素进行了单因素试验.结果显示,以MS为基本培养基,添加0.5～1.0mg/L6-BA,0.05～0.1mg/LNAA和使用添加物D对增殖影响显著,但不同浓度差异不显著.对各单因素进行L9(34)正交试验,结果表明,MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+添加物D1.0mg/L为蚬壳花椒增殖的最适培养基,增殖系数可达到4.

蚬壳花椒愈伤组织诱导的影响因素

以蚬壳花椒组培苗的叶片和茎段为外植体,研究不同的基本培养基、不同种类和浓度的激素及不同的培养条件对蚬壳花椒愈伤组织诱导及其生长的影响.结果表明,MS为最适培养基;单独使用6-BA不能诱导出愈伤组织,但配合生长素使用有利于愈伤组织的形成.诱导蚬壳花椒愈伤组织的较优激素组合为6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg/L+2,4-D0.1mg/L,诱导率达65.72%.在蚬壳花椒愈伤组织诱导过程中,2,4-D是最重要的因素.在培养过程中,以暗培养14d为最适暗处理时间.

药用植物蚬壳花椒的离体培养及再生体系的建立

为了研究蚬壳花椒的离体培养并建立再生体系,用蚬壳花椒的二年生植株的幼茎作为起始外殖体,接种在含不同激素的MS培养基上,结果为最佳腋芽诱导培养基为:MS+2.0 mg.L-16-BA+0.05 mg.L-1NAA,诱导率达64.0%;最佳丛生芽诱导培养基为:MS+2.0 mg.L-1ZT+0.2 mg.L-1NAA,诱导率达90.0%;最佳增殖培养基为:MS+6-BA0.5 mg.L-1+NAA0.05mg.L-1+生物素1.0 mg.L-1,增殖系数可达到4.0;最适生根培养基为:1/3MS+IBA0.3mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1,生根率达78%.

天然蚬壳花椒种群遗传多样性的ISSR标记分析

目的：对采自中国西南4省共12个天然蚬壳花椒种群进行遗传多样性分析。方法：采用ISSR分子标记技术,从100条引物中筛选出8条条带扩增稳定、清晰可见和多态性条带明显的引物用于后续实验。结果：8条引物共扩增出150个条带,147个多态性条带,多态性条带百分率（PPB）为98.0%,各种群的PPB值为26.0%~62.0%。种内Shannon指数（Hsp）为0.4175,种群内Shannon指数（Hpop）为0.1328~0.3267。分子方差分析（AMOVA）显示,种群间与种群内的变异数分别是总遗传变异数的47.98%和52.02%。结论：天然蚬壳花椒在物种和种群水平上均具有较高的遗传多样性,天然蚬壳花椒种群间（内）存在着高度的遗传分化。本研究为蚬壳花椒的遗传多样性分析奠定了理论基础。

药用植物蚬壳花椒种子休眠及萌发特性

为研究木本药用植物蚬壳花椒生殖环节中的致危因素,采用多种方法处理其种子,研究其休眠和萌发特性.结果表明,当年成熟的种子去除种皮后可以萌发,证明种子的胚发育成熟,种皮的透水性也较好,与休眠关系不大;休眠的主要原因可能是种皮内含有抑制萌发物质,及种皮坚硬的机械阻碍作用.采用不同的处理,获得种子萌芽率较高的方法为:浓硫酸处理6min,去除种皮,然后用50mg·L-1的GA3浸泡5min,清洗后置于25℃恒温培养箱内培养,萌芽率可达60%.

单面针茎中生物碱类成分研究

目的：对单面针茎中的生物碱成分进行研究。方法：将0.5%盐酸渗滤得到酸水用氨水调pH值至11,以此提取单面针茎中总生物碱,采用氧化铝、硅胶柱层析法进行分离,并根据理化性质及光谱数据对单体化合物进行结构鉴定。结果：分离得到4个化合物,经鉴定分别为：两面针碱（Ⅰ）、血根碱（Ⅱ）、花椒棚碱（Ⅲ）、白鲜碱（Ⅳ）。结论：其中,化合物Ⅰ~Ⅲ为首次从单面针茎中分离得到。

单面针茎不同极性部位抗菌及对MCF-7细胞抑制活性的研究

研究单面针茎不同极性部位的抗菌及抗肿瘤活性。本实验通过微孔比浊法比较了单面针茎各极性部位对3种革兰氏阴性菌:大肠杆菌、铜绿假单胞菌、幽门螺杆菌,4种革兰氏阳性菌:表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌共7种细菌进行抗菌能力评价;以MTT法测定了各极性部位对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制活性。实验结果表明,单面针茎各极性部位对本实验所有菌株,尤其是革兰氏阳性菌均有较强的抑制作用,其中以氯仿部分的抗菌效果最佳;本实验所有样品对MCF-7细胞均有较好的抑制作用,同样氯仿浸膏的抑制活性最强,对实验细胞株的半数抑制浓度IC50为2.35±0.97×10-1mg/m L,正丁醇浸膏部分的IC50值分别为3.19±0.54×10-1mg/m L,然而乙酸乙酯浸膏部分则相对最弱,其IC50值为6.47±0.94×10-1mg/m L。本实验结果揭示有望从氯仿、正丁醇浸膏中分离得到抗菌、抗乳腺癌活性较强的单体化合物,为单面针的后续开发提供了科学的依据。

单面针茎中苯丙素类化学成分研究

目的对单面针茎的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱及重结晶等方法进行成分分离,并利用1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR等波谱学技术和理化性质鉴定其化学结构。结果从单面针茎乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇（β-sitosterol,1）、香兰醛（vanillin,2）、表芝麻脂素（episesamin,3）、柄果脂素Ⅱ[（-）plu-viatilol-γ,γ-dimethyallyl ether,4]、辛夷脂素（fargesin,5）、[（-）eudesmin 6]。结论化合物2~6均为首次从单面针茎中分离得到。

蚬壳花椒ISSR-PCR反应体系的建立及优化

通过单因素试验及正交设计方法对影响蚬壳花椒ISSR-PCR扩增的主要因素(模板DNA、Mg2+的浓度、引物、dNTPs,TaqDNA聚合酶的用量以及退火温度)进行优化,以建立蚬壳花椒ISSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:最佳反应体系(20μL)为模板DNA 60ng、MgCl2 2.5mmol/L、dNTPs 0.15mmol/L、引物0.6μmol/L、TaqDNA聚合酶2.4U。在此基础上,从100条引物中筛选出18条扩增稳定、多态性好的ISSR引物并经过10份蚬壳花椒种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点。该反应体系的建立为蚬壳花椒种质资源分类、遗传多样性分析提供了更客观可靠的方法。

蚬壳花椒营养器官解剖结构及其生物碱分布

采用石蜡切片和组织化学定位法对蚬壳花椒营养器官的解剖结构及生物碱的分布进行研究.结果表明,蚬壳花椒根的初生木质部有三原型和四原型;幼茎表面有表皮毛和腺体,茎内含少量分泌囊和结晶;叶上、下表皮细胞结构差异显著,上表皮细胞较大,有一分泌囊紧接下表皮.生物碱组织化学定位显示,茎中生物碱主要存在于周皮、次生木质部的射线细胞及髓部细胞内;根中生物碱大量存在于周皮、次生韧皮部及次生木质部的射线细胞中;叶片中不含生物碱.采用HPLC法测定根、茎、叶及生药中的主要有效生物碱的含量,根中主要有效生物碱含量比茎中含量高.

HPLC-Q-TOF/MS法鉴定两面针和单面针中的生物碱

目的通过HPLC-Q-TOF/MS法鉴定两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.和单面针Zanthoxylum dissitum Hemsl.中的生物碱。方法植物甲醇提取液的分析采用XAqua C8色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 m L/min,再根据对照品裂解规律和参考文献推测生物碱结构。结果从中鉴定出32种生物碱,其中14种为首次在2种植物中报道。结论该方法快速准确,可为两面针和单面针成分研究及单面针开发利用提供依据。

药用植物单面针离体胚培养的研究

为了满足市场对单面针Zanthoxylum dissitum Hemsl资源的需求,解决单面针自然繁殖率低的问题,采用L9(34)正交设计,以单面针种子胚为外植体进行胚培养.结果表明:6-BA、NAA、消毒时间3因素的最佳水平组合为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.4mg/L+消毒时间8 min,发芽率可达86.7%.

蚬壳花椒总生物碱的提取工艺

采用回流提取法,通过单因素试验和正交试验,研究了蚬壳花椒茎中总生物碱的提取工艺,用干重法及酸性染料比色法测定总生物碱含量.结果表明,最佳提取溶剂为乙醇,总生物碱最佳提取条件为:超声波提取1 h,浸泡48 h后,75%体积分数的乙醇为溶剂,料液比为1∶25,pH值为2.0,70℃回流提取2 h,蚬壳花椒茎的总生物碱的提取率达5.57%.

酸碱胁迫对药用植物蚬壳花椒白藓碱含量的影响

采用HPLC方法,分别对不同生长时期及不同酸碱度溶液胁迫处理后的幼苗有效成分白藓碱含量进行检测。结果表明:愈伤组织、1～2年生茎、成熟的叶及叶柄中不含白藓碱,组培苗、3年生茎、1～3年生根及生药中含白藓碱,3年生根中白藓碱的含量是茎含量的3.89倍,是生药中白藓碱含量的2.19倍;不同程度的酸碱胁迫均能促进植株内白藓碱含量增加,其中pH值为2.5的处理中白藓碱含量是对照的7.13倍,pH值为9.5的处理是对照的4.83倍,但植株在酸碱过强的环境中不能正常生长。

高效液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量

【目的】建立单面针药材中木兰花碱的含量测定方法,为该药材质量评价方法的建立提供基础。【方法】采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钠（体积比为11∶89）;检测波长268 nm;柱温25℃。【结果】木兰花碱在20～300μg/mL范围内线性关系良好,r为0.999 9;理论塔板数不低于25 000;样品中木兰花碱检测无干扰,与邻峰分离度大于1.5,样品含量在0.74～6.61 mg/g之间,平均含量为2.99 mg/g,加样回收率为97%以上,sR为0.81%。【结论】所建方法简单可行,重复性好,可用于单面针药材的质量控制。

赤霉素和浓硫酸对单面针种子萌发的影响

对单面针种子进行赤霉素和浓硫酸浸种处理以及湿沙层积催芽试验,结果表明,赤霉素浸种处理对单面针种子萌发具有明显的促进作用。与清水浸种的对照相比,萌发率显著提高,萌发时间显著提早,用1 000~2 000 mg/L赤霉素溶液浸种6-72 h,萌发率比对照提高15个百分点以上,其中以1 000 mg/L浸种48h的萌发率最高,达85%,以1 000 mg/L浸种72 h的萌发率较低,但也达到46%,萌发高峰期出现在处理后的52-90天期间;而对照处理的萌发率最高只有31%,多数低于30%,萌发高峰出现较晚,到128天时萌发仍处高峰期,萌发缓慢,整齐度不高。单面针种子先用80%浓硫酸浸泡处理3.5 min后,再用1 000 mg/L赤霉素溶液浸泡处理6 h、12 h、24 h、48 h和72 h,各处理的萌发率均不超过8%,萌发活动主要发生在处理后的52天之前,之后一直至128天未发现萌发的种子。研究表明,在实际的单面针育苗生产中,单独使用赤霉素浸种处理比使用浓硫酸和赤霉素组合浸种处理的方法较为简便、实用。

蚬壳花椒组培苗的生根试验

以蚬壳花椒无菌组培苗为试材,采用单因子、双因子以及正交试验研究IBA、NAA、IAA、活性炭、基本培养基(大量元素、微量元素、有机质)对组培苗生根的影响。试验结果表明,基本培养基、IBA、NAA对不定报的分化有较大影响,蚬壳花椒组培苗适宜的生根培养基为1／3MS+IBA 0．3 mg·L-1+NAA 0．05 mg·L-1．生根率达78％,移栽成活率可达95％。