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马尔他布氏杆菌divK基因的克隆与原核表达 被引量:1
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作者 李亚颖 冯飞 +11 位作者 庞峰 李国华 赵天靖 彭冬梅 朱华培 徐开莲 朱姝 杨小健 聂鑫 曹瑞勇 王凤阳 杜丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期890-893,共4页
为了克隆马尔他布氏杆菌M 5-90株divK基因并对其进行原核表达,根据GenBank中M5-90株divK基因序列,设计了1对引物;以此菌株的基因组为模板,用设计的引物扩增出了372 bp的基因片段。用凝胶回收纯化目的基因片段,并将其与pMD 20-T载体连接... 为了克隆马尔他布氏杆菌M 5-90株divK基因并对其进行原核表达,根据GenBank中M5-90株divK基因序列,设计了1对引物;以此菌株的基因组为模板,用设计的引物扩增出了372 bp的基因片段。用凝胶回收纯化目的基因片段,并将其与pMD 20-T载体连接,转化大肠杆菌(E.coli)DH 5α后测序;测序正确后将此基因片段克隆到pET-28a(+),构建重组质粒pET28a(+)-divK;然后,把构建好的重组质粒转化入E.coli BL 21(DE3)。1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western-blot分析的结果表明,诱导表达的蛋白与目的蛋白的大小一致,说明本研究成功构建了pET28a(+)-divk原核表达载体,并在E.coli BL21中成功表达了divK基因。 展开更多
关键词 马尔他布氏杆菌 divk基因 克隆 原核表达
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