双丙戊酸钠和丙戊酸钠对HepG2细胞的毒性作用及机制

目的探讨双丙戊酸钠和丙戊酸钠对肝细胞的毒性作用及其可能的作用机制。方法肝癌细胞株HepG2加入双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.1,0.3,1和3mmo.lL-1,培养24h后,MTT法测定HepG2的细胞存活;双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.3,0.5和1.0mmol.L-1作用HepG2细胞24h,丙酮酸法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,赖氏法测定培养液中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性;双丙戊酸钠和丙戊酸钠62.5,125,250,500和1000μmol.L-1作用24h,实时定量逆转录聚合酶链反应RT-PCR测定细胞色素P450家族中CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA表达的变化。结果与溶剂对照组比较,双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.1,0.3,1和3mmo.lL-1均显著抑制细胞的存活(P<0.05,P<0.01),且存在浓度依赖关系。双丙戊酸钠与丙戊酸钠0.3,0.5和1mmol.L-1使HepG2细胞培养液中GPT,GOT和LDH的活性明显升高(P<0.05,P<0.01),且随浓度升高,肝酶活性进一步升高。双丙戊酸钠与丙戊酸钠62.5,125,250,500和1000μmol.L-1使HepG2细胞中CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA的表达水平亦逐渐升高。结论双丙戊酸钠和丙戊酸钠对HepG2细胞都有明显的毒性作用,CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA表达水平的升高可能是丙戊酸类药物诱发肝毒性的机制之一。

Plackett-Burman设计联用星点设计-效应面法优化双丙戊酸钠缓释片处方

目的采用Plackett-Burman设计联用星点设计—效应面法优化双丙戊酸钠缓释片处方。方法以相似因子f2值为指标,运用Plackett-Burman设计评价各影响因素的显著性。以HPMC K100M、HPMC K15M的量和乙醇浓度为自变量,以各指标的总评"归一"值为因变量,通过星点设计—效应面优化法对自变量各水平进行多元线性拟合和二项式拟合,选择最佳模型进行预测分析,比较预测值与实验值的偏差。结果二项式拟合方程相关系数较高,r为0.962 0,表明该模型对研制的双丙戊酸钠缓释片预测性良好。最佳处方为HPMC K100M 286.72 mg,HPMC K15M 16.96 mg,乙醇浓度27%。结论该方法用于缓释片处方优化操作简便、预测性好,所制得缓释片效果理想值得进一步扩大应用。

丙戊酸钠与双丙戊酸钠的毒性比较

目的比较丙戊酸钠与双丙戊酸钠2种供试品毒性的大小。方法采用大鼠和小鼠2种动物,分别灌胃给予不同剂量的丙戊酸钠和双丙戊酸钠,观察大鼠和小鼠的毒性反应症状、死亡情况、病理变化,并计算出供试品对2种动物的LD50值。结果 2种供试品对大鼠和小鼠的毒性反应症状及病理变化基本一致,但是在剂量相当的情况下丙戊酸钠的毒性反应症状比双丙戊酸钠的严重,死亡的动物数更多,LD50值更小。结论丙戊酸钠的毒性比双丙戊酸钠的毒性大。

双丙戊酸钠的合成工艺研究

本文结合工业生产实际,经过大量实验对双丙戊酸钠的合成工艺进行了考察,优化出了适合工业化生产的双丙戊酸钠合成新工艺,并通过~1H-NMR、^(13)C-NMR等分析手段对双丙戊酸钠及重要中间体的结构进行了表征。此工艺收率高、环境友好、反应条件温和、操作简便,可为双丙戊酸钠原料药的工业化生产提供参考。

双丙戊酸钠合成工艺改进研究

以丙二酸二乙酯及1-溴丙烷为起始原料,经烷基化、水解和酸化、脱羧及双丙戊酸钠合成等4步操作,制备了双丙戊酸钠原料药,对合成工艺进行了较为系统的优化,合成的产物经核磁共振谱检测确定了双丙戊酸钠的结构。该工艺起始原料较为廉价易得、低毒环保,合成工艺操作简便成熟,适于工业生产。

双丙戊酸钠缓释片在比格尔犬体内的药动学和相对生物利用度研究

目的:建立HPLC-MS法测定比格尔犬体内丙戊酸浓度,研究双丙戊酸钠缓释片(divalproex sodium sustainedrelease tablets,DSSRT)在比格尔犬体内的药动学及相对生物利用度。方法:采用双周期随机交叉实验设计,进行国产和进口DSSRT的比格尔犬单剂量与多剂量给药药动学实验,用HPLC-MS法测定比格尔犬血浆中丙戊酸的浓度,并对两者的药动学参数进行比较。结果:比格尔犬单剂量口服给予进口和国产DSSRT后药动学参数如下:t1/2(7.49±2.03)和(6.07±0.94)h,MRT(11.20±1.75)和(8.81±1.31)h,cmax(18.97±3.24)和(20.63±2.93)μg/ml,tmax(3.7±1.6)和(4.0±1.6)h,AUC0~24h(146.06±35.67)和(142.28±22.17)μg·h·ml-1,AUC0~∞(165.41±41.26)和(152.77±25.98)μg·h·ml^(-1);国产制剂对进口制剂的相对生物利用度为(100.1±14.9)%。多剂量口服给予进口和国产DSSRT后药动学参数如下:tmax(3.7±1.6)和(3.8±1.2)h,cmax(20.34±1.19)和(18.77±2.17)μg/ml,AUCSS(166.38±23.18)和(169.81±22.99)μg·h·ml-1,cmin(1.83±0.60)和(1.87±0.40)μg/ml,cav(6.93±0.97)和(7.08±0.96)μg/ml,DF(2.72±0.43)和(2.40±0.23),相对生物利用度为(102.4±7.7)%。结论:本研究建立的HPLC-MS法可用于比格尔犬体内丙戊酸的浓度测定。国产和进口DSSRT在比格尔犬体内的药动学参数无显著差异。

双丙戊酸钠的合成工艺研究

目的:优化双丙戊酸钠的合成工艺。方法:以丙戊酸为原料与强碱在有机溶剂中反应,强碱为包括氢氧化钠,甲醇钠,乙醇钠,有机溶剂为乙腈和丙酮,当有机溶剂为丙酮时反应温度控制在40~45℃,当有机溶剂为乙腈时,反应温度控制在80~81℃,反应时间为2个小时,反应过程中水浴加热回流,然后在室温或低温中析出双丙戊酸钠固体,将双丙戊酸钠晶体用丙酮或乙腈进行清洗,然后在室温,将所得溶液过滤,由此得到固体。结果:对合成反应进行了单因素优化实验,其适宜的反应条件是,以乙腈为反应溶剂,以甲醇钠为反应的碱,原料丙戊酸与碱的配比为2:1,在80度反应2个小时,在0~5℃析出双丙戊酸钠固体,产率在80%以上,纯度在90%以上。结论:实验表明,此方法一步合成工艺简单,产率高,纯度高。

高效液相色谱-质谱联用法快速测定人血浆中丙戊酸钠浓度

目的:建立有效测定人血浆中丙戊酸钠浓度的高效液相色谱-质谱连用(HPLC-MS/MS)的方法。方法:血浆样本经乙腈沉淀蛋白后,以替米沙坦为内标,采用Agilent ZORBAX300SB-C18柱(2.1 mm×150 mm, 5μm)色谱柱,乙腈-20 mmol·L-1乙酸胺(55∶45)为流动相,流速0.25 mL·min -1,以液相色谱分离,电喷雾离子化串联质谱进行检测,采用多反应监测(MRM)测定丙戊酸钠(m/z 143.0→m/z 143.0)和内标替米沙坦(m/z 513.5→m/z 469.4)的浓度。结果:校准曲线线性浓度范围从0.2~100μg·mL-1,最低定量限为0.2μg·mL-1。3个不同浓度(低、中、高)丙戊酸钠提取回收率分别为90.46%,93.18%,95.31%。日内和日间精密度均小于10%和8%。结论:此法简单灵敏,重现性好。已成功应用于丙戊酸钠片在中国健康志愿者的药动学研究。