Experiment on Tissue Culture Technique of Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk

The study aimed to optimize the induction and differentiation medium by exploreing different tissue culture of Saposhnikovia divaricata （Turcz.） Schischk. In tissue culture with the root, stem segments, young leaf, cotyledonary node and axillary bud of Saposhnikovia divaricata （Turcz.） Schischk as explants, a lot of plantleles were obtained and the corresponding plant regeneration-system was established. The results showed that when use MS＋1.0 mg·L^-1 6-BA＋0.2 mg·L^-1 NAA as callus induction medium, the cotyledonary node had the highest bourgeon rate, and its callus was better than any others; MS＋2 mg·L^-1 6-BA＋0.4 mg·L^-1 NAA was the best adventitious buds induction medium, and the best adventitious buds induced condition was 3% sucrose as carbon source, illumination for 12-14 h·d^-1 and pH 5.8, The best rootage medium was 1/2 MS＋0.5 mg·L^-1 NAA.

不同降水量对防风(Saposhnikovia divaricata)幼苗生长状态的影响

通过对不同水份条件下防风幼苗的根冠比、根粗和根重三项形态指标及幼苗中丙二醛、可溶性糖及叶绿素含量三项生理指标的测定,证明了在以甘南县为代表的黑龙江省西部半干旱气候条件下,防风幼苗在降水量超过40mm情况下可以正常生长。人工栽培时要根据实际情况处理,如苗期降水量少于40mm,幼苗会受到干旱胁迫,要依据缺水的程度补足水份或选择在雨水充足的季节之前播种。在本实验进行的气候和土壤条件下,除降水量外,根冠比、根粗、根重、丙二醛含量、可溶性糖含量和叶绿素含量也可作为判断防风幼苗能正常生长的依据。降水量低于40mm时随着干旱胁迫的加深,丙二醛和可溶性糖含量不断提高,而叶绿素含量逐渐降低。

防风对春季低温胁迫的生理响应

目的:探究防风对春季低温胁迫的生理响应,根据次生代谢产物含量确定防风的最佳采收时间。方法:在秋末和春季分别采收防风鲜根,比较防风内活性氧含量、抗氧化酶活性、次生代谢产物关键酶活性、次生代谢产物含量和总多糖、酸性多糖含量之间的关系。结果:在春季低温的影响下,防风鲜根中活性氧和丙二醛的含量,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶活性,防风次生代谢产物关键酶苯丙氨酸裂解酶、乙酰辅酶A羧化酶、查耳酮合成酶活性及代谢途径产物1,3-二磷酸甘油酸含量比秋季均有显著提高。与秋季比较,春季防风中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和升麻素含量分别提高了17.7%、36.7%、11.1%;秋季防风总多糖和酸性多糖含量均高于春季。结论:防风抗氧化酶和次生代谢产物共同作用维持机体在春季低温胁迫下活性氧的平衡,春季采收可显著提高色原酮含量。

基于改进ShuffleNet V2的轻量级防风药材道地性智能识别

[目的/意义]目前,对于防风药材产地和品质的鉴别方法主要是根据其物理或化学特征,其方法需对中药材进行分离提取,存在耗时长,费用高,专业性强,技术难度大等问题,不利于推广应用。随着深度学习的不断发展,其无需人工提取特征、分类精度高等优点被广泛应用在中药材的识别之中。[方法]针对大多数卷积神经网络模型在识别防风药材时计算量大、精度低的问题,本研究提出了一种改进的ShuffieNet V2的轻量级防风道地性识别模型。在不降低网络性能的情况下调整模型架构,减少模型参数量和计算量,用沙漏残差网络(Hourglass Residual Network)代替传统残差网络,同时引入SE(Squeeze-and-Excitation)注意力机制,把具有附加信道注意力的沙漏残差网络嵌入到ShuffleNet V2中,使用SiLU激活函数替换ReLU激活函数,丰富局部特征学习,从而提出轻量化的中药防风道地性识别模型Shuffle-Hourglass SE。为了验证本文所提出模型的有效性,选用VGG16、MobileNet V2、ShuffleNet V2和SqueezeNet V2四种经典网络模型进行对比实验。[结果和讨论]结果表明,本研究提出的模型Shuffle-Hourglass SE获得了最佳性能。在测试集上取得95.32%的准确率、95.28%的召回率,F_(1)分数达到95.27%,测试时间、模型大小为246.34 ms和3.23 M,不仅在传统CNN网络中是最优的,在轻量级网络中也具有较大优势。[结论]本研究所提出的模型在保持较高识别精度的同时占用较少的储存空间,有助于在未来的低性能终端上实现防风道地性的实时诊断。

防风总色原酮苷元提取工艺优化及其抗炎活性研究

目的:优化防风总色原酮苷元提取工艺,并初步探究其体外抗炎活性。方法:以升麻素及5-O-甲基维斯阿米醇总提取率为指标,通过响应面法优化防风总色原酮苷元提取工艺;采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(RAW 264.7)炎症模型,探究最优参数下防风总色原酮苷元对细胞上清中一氧化氮(NO)含量的影响。结果:最佳工艺为加酶量89.87%,酶解时间59.97 min,酶解温度55.95℃;预测提取率为4.58 mg/g,实际平均提取率为4.49 mg/g,与理论值相差0.09 mg/g,与未加酶提取法相比,提高了3倍;最优参数下防风总色原酮苷元显著抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞NO分泌,与参比提取物比较,抑制效果显著提高,具有良好的体外抗炎活性。结论:该工艺稳定性好,提取率高,提取物抗炎活性好,为防风药材的开发利用提供了新思路。

不同种源防风种子质量分析

对不同种源防风种子的长、宽、千粒重、发芽势、发芽率、出苗率、成苗率进行室内和田间试验统计,并进行方差分析,最后通过隶属函数法对各种源的种子质量进行综合评价分析。结果表明,在种子长度、宽度、千粒重、种子发芽势等各项指标值野生种源较大的是内蒙古额尔古纳市陈巴尔虎旗哈吉嘎查种源和内蒙古额尔古纳市室韦镇临江村种源,栽培种源较大的是内蒙古赤峰市敖汉旗敖吉村种源和河北省张家口市蔚县吉家庄镇种源。研究表明,栽培种源种子长度、宽度及千粒重、田间成苗率及出苗率间,均显著高于野生种源;经隶属函数对野生种源与栽培种源防风种子质量综合分析得出,野生种源种子质量最好的为内蒙古额尔古纳地区的种源,栽培种源种子质量最好的为内蒙古赤峰地区的种源。

不同种源防风种子的萌发特性与鉴别

为建立防风种子质量的显微鉴别方法,明确防风种子的萌发特性,采用石蜡切片法,对野生、栽培以及不同产地的防风种子进行显微鉴别。在正置荧光显微镜及体式显微镜下,观察防风种子萌发过程中油管、种胚及胚轴的变化。结果表明,野生防风种子的油管面积、周长及饱满度均大于栽培防风种子,可以作为防风种子的主要鉴别依据之一。防风种子在萌发过程中依次经历了球形胚阶段、心形胚阶段、鱼雷形胚阶段及子叶胚阶段。种子萌发过程的解剖观测分析结果表明,种子萌发过程中,种子横切面油管的面积、周长及饱满度不断减小。

防风化学成分的分离与结构鉴定

防风乙醇提取物经大孔树脂富集后,采用各种柱色谱法进行分离纯化,从中得到14个化合物,根据理化性质和光谱数据鉴定结构为:防风嘧啶(1),clemiscosin A(2),5-羟基-8-甲氧基补骨脂素(3),亥茅酚苷(4),亥茅酚(5),紫花前胡苷元(6),升麻素苷(7),升麻素(8),5-O-甲基维斯阿米醇苷(9),5-O-甲基维斯阿米醇(10),异紫花前胡苷(11),腺苷(12),胡萝卜苷(13)和β-谷甾醇(14)。其中化合物1为新化合物,化合物2为首次从伞形科植物中分离得到,化合物3为首次从防风中分离得到。

防风正丁醇萃取物对大鼠血液流变学的影响

防风正丁醇萃取物5．6g／（kg·d）连续给大鼠im10d，可使大鼠全血高切粘度、低切粘度、血浆粘度、纤维蛋白原含量、血球压积及全血还原粘度均明显降低；对血沉、血沉方程K值、血小板最大聚集率及1min解聚率无明显影响。提示防风正丁醇萃取物具有活血化瘀作用。

第4代太空防风的X射线荧光研究

利用我国发射的神舟三号飞船搭载防风种子,回收后在地面上筛选繁育,定向培育成新品种获得优良的种质资源。本文用X射线荧光光谱法(XRF)对枝叶和产量等方面占优势的第4代太空及地面组防风药用部分的元素含量进行测定和对比分析。两组样品的元素种类基本相同,但多种矿质元素含量是太空组>地面组。尤其是太空防风中与性味功效和归经相关的Zn,Fe,Mn和Cu含量比地面组分别提高到4.39,1.23,0.84和0.90倍。太空防风矿质元素指标明显优化。XRF方法可以从整体上对中药材的元素进行测定分析和研究。利用太空搭载防风种子可以筛选出多种元素优化的防风药材新品种。

防风组织培养中畸形胚状体的发生和控制

采用组织培养和石蜡切片法 ,分析多种因素对防风畸形胚状体发生和发育过程的影响及控制 .结果表明 ,诱导正常体细胞胚高频发生的培养基组合是 :启动胚性愈伤组织的培养基是 MS+0 .5 m g/ L 2 ,4 - D,蔗糖浓度3% ;分化培养基是 MS+1mg/ L 6 - BA+0 .2 mg/ L NAA +0 .5 m g/ L ABA,蔗糖浓度 4 %～ 5 % ;成熟培养基是 MS培养基 ,蔗糖浓度 3% .结论 :一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素 ,细胞分裂素在体细胞胚的分化和发育过程中起协同作用 ;蔗糖浓度、ABA。

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0.5mg/L2,4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度,0.5mg/LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0.5mg/L2,4-D可减少畸形胚的发生,NAA浓度降至0.2mg/L时促进体细胞胚的发生和分化;生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生;通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度,可促进体细胞胚的分化和生长;体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0.2mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的MS培养基上,均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。

栽培密度对防风抽薹、产量和有效成分的影响

文章通过对不同栽培密度条件下防风的抽薹情况、产量及有效成分色原酮含量的变化进行研究,确定防风的最佳栽培密度。结果表明,栽培密度为株行距7 cm×30 cm时,抽薹率较低,为10%左右,折干率和小区总产量较高,根中的四种主要有效成分的含量均显著高于其他栽培处理,是较为适宜的种植密度。

防风挥发油的GC—MS分析

用气相色谱-质谱联用、气相色谱以及柱层析方法分析、分离了防风挥发油的化学成分,鉴定了38个化合物,主成分为人参醇(panaxynol)。

RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量

目的建立防风药材中4种有效成分含量同时测定的方法，以比较不同产地防风药材及不同部位中有效成分的含量，为防风药材质量标准的制定及防风的资源开发提供科学依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1．0mL·min^-1；检测波长：254mm；柱温：30℃。结果升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷能够达到基线分离；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度在1．92～400mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9998，n=5），平均加样回收率分别为97．5％、97．7％，RSD分别为1．3％、2．8％（n=9）；升麻素、亥茅酚苷质量浓度在0．96～200mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999，n=5），平均加样回收率分别为99．3％、97．7％，RSD分别为2．0％、1．7％。结论本方法为防风药材的资源开发提供了参考，可用于防风药材的质量控制。

HPLC测定感冒清热颗粒中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

目的 :建立反相高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中的升麻苷及 5 O 甲基维斯阿米醇苷含量 ;方法 :采用APEXODS色谱柱 ,分别以醋酸钠水溶液 (40mmol·L-1,pH 6 .9) 甲醇 (6 5∶35 )和水 甲醇 四氢呋喃 (6 2∶38∶1)为流动相 ,检测波长为 2 5 4nm ,流速为 0 .8mL·min-1;结果 :升麻苷与 5 O 甲基维斯阿米醇苷分别在 0 .72～ 6 .5 μg·mL-1与 0 .92～ 16 .5 μg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好 (r =0 .9999) ;加样回收率分别为 10 0 .3%和 94 .7%。测得感冒清热颗粒中含有升麻苷 0 .133mg·g-1和 5 O 甲基维斯阿米醇苷 0 .16 7mg·g-1。结论 :该法简便、快速。

防风内生真菌DL02次生代谢产物化学成分及其生物活性

目的研究防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.内生真菌DL02次生代谢产物的化学成分及其生物活性。方法防风发酵物的乙酸乙酯、甲醇提取物的分析采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。最小抑菌浓度法测定其抗真菌、抗细菌活性。结果从中分离得到7个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、曲酸(2)、豆甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇(3)、尿嘧啶(4)、尿囊素(5)、赤藓醇(6)、腺嘌呤核苷(7)。化合物4对绿脓杆菌有较强的抑制作用,MIC 31.3μg/m L。结论化合物2~5、7为首次从该真菌中分离得到。化合物4~5有较强的生物活性。

大庆市不同产地防风中有效成分含量比较

目的:比较大庆市不同产地防风药材中升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。方法:采用岛津Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(40∶60),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,进样量为10μl。结果:大庆市各个地区的防风有效成分含量均符合《中国药典》2010年版标准,其中以杜尔伯特及肇源地区有效成分总量较高。结论:杜尔伯特及肇源地区的防风质量更优。

防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的微波提取工艺研究

[目的]优选防风色原酮的微波辅助提取工艺。[方法]以升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为指标,考察了料液比、乙醇浓度、提取时间和提取温度对防风色原酮含量的影响。[结果]防风微波提取的最佳工艺条件为料液比1∶30(g/ml),乙醇浓度70%,提取温度90℃,提取时间3 min。[结论]微波提取技术具有时间短、效率高的优点,可较好地用于防风色原酮的提取。

提高防风种子发芽率的实验研究

目的：提高防风种子发芽率，加大黑龙江省地道药材防风的开发力度。方法：分别采用45℃温水浸种12、24h；150w微波辐射15s、20s、25s 30s；流水冲洗防风种子3—4h；柳枝浸出液为萌发剂培养防风种子，同时培养未经处理的种子作为对照组。结果：对照组发芽率为36．67％；温浸组为60．33％；微波15s组发芽率为68．00％，20s组为74．33％，25s组为71．17％，30s组为67．33％；流水组发芽率为84．00％；柳枝组发芽率为68．67％。结论：大规模播种可采用45℃温水浸种12-24h、150w微波辐射20s、流水冲洗3—4h、柳枝浸出液为萌发剂均可提高发芽势、发芽率，缩短发芽历期，改善出芽不齐等现象。