培养用液对小鼠胚胎移植效果的影响

为提高小鼠胚胎移植的成功率,探索了合适的胚胎培养用液,研究了原核移植和囊胚移植对产仔率的影响.结果表明,CZB培养液适合ICR小鼠原核胚胎培养,囊胚发育率达到90.67%,囊胚移植的产仔率为53.33%,高于原核移植的34%.受体和供体不必同期处理,前者可比后者晚1 d处理.

供者淋巴细胞输注治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的:观察供者淋巴细胞输注(DLI)对小鼠H2 2肝癌的治疗作用。方法:荷瘤昆明小鼠分荷瘤对照组(A组)、5- 氟脲嘧啶(5 - FU)化疗组(B组)、DLI组(C组)及5 - FU加DLI组(D组) 4组。比较各组小鼠生存期、抑瘤率及瘤体病理检查结果,检测NK细胞及IL 2的活性。结果:B、C组生存时间长于A组(P <0 .0 1) ,D组长于C组(P <0 .0 1) ;B、C、D各组抑瘤率依次为61.3 %、3 4.7%、89.5 % ;C、D两组NK细胞及IL 2活性明显高于A、B组(P <0 .0 5 ) ;病理观察见C、D组大量炎性细胞浸润。结论:DLI对小鼠H2 2肝癌有治疗作用,是一种潜在可行的实体瘤细胞过继免疫治疗方法。

移植前选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨在移植前选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病（GVHD）的效果。方法以（BALB／c×C57BL／6）F1雌性小鼠（H-2^d/^b）为受鼠，于第0天接受亚致死量的^60Co γ射线全身照射（TBI），总剂量为4Gy，第1天接种P388D1白血病细胞，第2天输注由C57BL／6雄性小鼠（H-2^b）为供鼠提供的不相匹配的供者脾淋巴细胞，第6天再次TBI 9Gy，第7天输注由（BALB／c×C57BL／6）F1雄性小鼠（H-2^d/^b）提供的骨髓造血干细胞。结果以TBI选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生，生存期超过了210d。对照组的小鼠出现了明显的GVHD、白血病或因出血、感染导致的死亡，生存期短，为20～36d（P〈0．01）。结论在造血干细胞移植前输注不相匹配的供者淋巴细胞诱导移植物抗白血病（GVL）效应，然后再选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞来预防GVHD的发生是可行的。

移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射(TBI),移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因(SRY)以及外周血供鼠CD3+细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI+骨髓细胞移植(TBI+BMT)组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3+细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组(P<0.05)。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。

供精个体和异种动物精浆对小鼠精子介导转染外源基因效率影响的研究

目的探讨供精个体和异种动物精浆对小鼠精子转染外源DNA效率的影响,以探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的影响因素。方法从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子,用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为供精个体和异种动物精浆。结果不同供精个体间转染效率存在一定差异,但有的个体间差异极显著(P<0.01),而有的个体间差异不显著;共孵育体系中异种动物精浆可显著降低转染效率(实验组与对照组分别为(8.6±1.7)% vs (51.3±5.3)%,P<0.01)。结论小鼠供精个体和异种动物精浆可影响小鼠精子转染外源DNA的效率。

缓释硫化氢供体对小鼠脑缺血急性期保护作用实验研究

目的:探讨缓释硫化氢缓释供体对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法:采用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血模型,将雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、溶剂对照组(Veh)和缓释硫化氢缓释供体ADT-OH组。缺血再灌24h取脑组织,利用TTC染色法检测小鼠脑梗死体积;通过实时定量PCR(qPCR)检测组织中炎症因子。结果:TTC染色结果显示,与Veh相比,ADTOH能够显著降低脑缺血再灌注后大脑皮层、内囊以及大脑半球的梗死体积;qPCR结果显示,与Sham组相比,Veh组小鼠的缺血皮层组织中促炎因子iNOS、IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平明显升高;与Veh相比,ADT-OH显著降低促炎因子表达。结论:硫化氢缓释供体对急性期脑缺血损伤具有一定的保护作用,机制可能与抑制脑缺血损伤诱导的炎症反应相关。

不同种鼠对实验脑型疟发生的影响研究

目的比较昆明小鼠和C57BL/6小鼠作为种鼠对实验脑型疟模型的影响。方法分别以伯氏疟原虫ANKA株感染C57BL/6小鼠和昆明小鼠作为传代用种鼠,当种鼠原虫率为5%～15%时接种子代C57BL/6小鼠,观察两组小鼠原虫率、脑型疟发生率以及死亡率。同时,通过脑组织切片和脑部淋巴细胞的流式检测,观察两组发生脑型疟小鼠的脑部微血管中感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞的粘附情况,另外,通过感染CD8+TKO小鼠,证实CD8+T细胞在两组小鼠发生脑型疟中的作用。结果用昆明小鼠作为种鼠的实验组的原虫率和脑型疟发生率均明显高于用C57BL/6小鼠作为种鼠的实验组,发生脑型疟小鼠的脑部组织切片发现,脑部微血管可见明显的感染疟原虫红细胞的粘附和CD8+T淋巴细胞浸润;而用昆明小鼠作为种鼠感染CD8+T细胞缺失的C57BL/6小鼠并不能诱导实验脑型疟的发生。结论与C57BL/6小鼠相比,昆明小鼠作为种鼠的实验组的脑型疟发病率更高,而且感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞在脑部微血管内的粘附也是该脑型疟发生的主要因素,因此,更适合用于实验脑型疟模型的建立及其机制的探讨。

单倍体供者淋巴细胞输注诱导慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的建立单倍体相合供者淋巴细胞输注（DLI）后慢性移植物抗宿主病（cGVHD）小鼠模型并对其进行鉴定。方法以近交系雄性Balb/cH-2d小鼠为供鼠；以雌性CB6F1小鼠（Balb/c×C57BL/6 F1H-2d/b）为受鼠，随机分为移植3×10^7、6×10^7、9×10^7个脾细胞组及空白对照组，脾细胞移植后流式细胞学检测H-2b和H-2d进行嵌合体分析。观察受鼠的体重、体形、体位、毛发变化及生存情况并评分，移植100 d处死小鼠，观察皮肤、肝脏、回盲端小肠靶器官的病理变化并评分，并鉴定模型的特征。结果输注6×10^7、9×10^7个Balb/c小鼠脾细胞组可较为稳定的诱导小鼠cGVHD模型，两组间cGVHD的发生率的差异无统计学意义（P〉0.05），统计学分析提示是以皮肤硬皮病样改变的小鼠慢性GVHD模型。结论输注6×10^7、9×10^7个Balb/c供鼠脾细胞的CB6F1受鼠可建立以皮肤硬皮病改变为主的稳定的cGVHD小鼠模型。