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Hybridisation in kiwi(Apteryx;Apterygidae)requires taxonomic revision for the Great Spotted Kiwi
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作者 Lara D.Shepherd Alan J.D.Tennyson +2 位作者 Hugh A.Robertson Rogan M.Colbourne Kristina M.Ramstad 《Avian Research》 CSCD 2021年第2期195-207,共13页
Background:Kiwi(Apteryx spp.)are flightless ratites from New Zealand whose numbers and distributions have declined following human arrival.Some of the kiwi species are known to hybridise but the extent of hybridizatio... Background:Kiwi(Apteryx spp.)are flightless ratites from New Zealand whose numbers and distributions have declined following human arrival.Some of the kiwi species are known to hybridise but the extent of hybridization is unknown.Methods:We reviewed hybridisation in kiwi(Apteryx spp.)and present new genetic data examining the extent of hybridisation between Rowi(A.rowi)and Little Spotted Kiwi(A.owenii)at Okarito,the location of the only remaining natural population of the threatened Rowi.We also genetically examined the syntype specimens of A.haastii Potts,1872,collected from near Okarito in the 1870s,which have unusual morphologies.Results:We found evidence of recurrent hybridisation between Rowi and Little Spotted Kiwi over the last 150 years,including one F1 hybrid found in the last 15 years,despite Little Spotted Kiwi’s likely extinction on the mainland in the 1970s.However,we found little evidence of introgression of Little Spotted Kiwi alleles into the extant Rowi popula-tion.The syntype specimens of A.haastii were also found to be hybrids between Little Spotted Kiwi and Rowi.Conclusions:Our genetic analyses indicate that,although we detected multiple instances of hybridisation between Rowi and Little Spotted Kiwi,it does not appear to be an ongoing threat to Rowi.Because the syntype specimens of A.haastii are hybrids and therefore not representative of the prevailing usage of the name for the Great Spotted Kiwi(A.haastii),we resurrect the nomen oblitum A.maxima Sclater and Hochstetter,1861 for the large spotted kiwi species. 展开更多
关键词 Apteryx Apteryx haastii DNA hybridisation KIWI TAXONOMY
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Hybridisation Potentials for Heavy Trucks Considering Route Topography
2
作者 Oliver Zim Stephan Krauth Michael Ahlborn 《Journal of Mechanics Engineering and Automation》 2016年第7期326-333,共8页
Based on dynamometer test cycles or plain motorway operation, heavy truck hybridisation must be considered as uneconomic if only the kinetic vehicle energy can be recuperated. In mountainous regions, micro hybridizati... Based on dynamometer test cycles or plain motorway operation, heavy truck hybridisation must be considered as uneconomic if only the kinetic vehicle energy can be recuperated. In mountainous regions, micro hybridization by a 48V-belt generator or mild parallel hybridisation by a large high voltage electric drive can result in considerable fuel consumption savings as well as additional benefits for heavy load utility vehicles. Additional electric power and battery size are still critical design parameters as well as critical cost factors considering the limited space and depreciation time as well as the need for maximum payload. Based on vehicle model simulations, this contribution quantifies fuel consumption savings, recuperation energy harvesting and battery requirements for different truck sizes with test cycles based on realistic route topography. The main route topography parameter for the recuperation benefit is the effective incline that integrates all downhill sections that overcompensates the vehicle resistance by tire friction and air resistance. The simulation parameter studies lead to an analytical benefit estimation, based on load cycle parameters like effective velocity, effective incline as well as the vehicle parameters mass, drag coefficient and cross sectional area. Thus, the return on investment can be assessed by an analytic rule of thumb, based on tracked cycles of existing vehicles. 展开更多
关键词 hybridisation vehicle model SIMULATION test cycles route topography.
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PCR及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选的比较 被引量:4
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作者 董伯振 李向阳 +2 位作者 符林春 周红燕 朱宇同 《中国热带医学》 CAS 2006年第7期1136-1137,共2页
目的比较PCR及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选的效果。方法分别利用PCR法及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选,并进行比较。结果与Dot-blot法比较,PCR法有简单、快捷、敏感度高等优点,且可避免Dot-blot带来的放射性污染。但PCR法所需费用高,... 目的比较PCR及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选的效果。方法分别利用PCR法及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选,并进行比较。结果与Dot-blot法比较,PCR法有简单、快捷、敏感度高等优点,且可避免Dot-blot带来的放射性污染。但PCR法所需费用高,易因交叉污染而导致假阳性结果。结论PCR与Dot-blot法筛选先天感染鸭乙肝的方面各有其优缺点。由于PCR法更为敏感、快捷,很有必要对其加以改进和完善。 展开更多
关键词 鸭乙肝病毒 PCR法 dot-blot
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Dot-blot对转DAF基因猪外源基因整合的检测
4
作者 曹军平 陈付学 +2 位作者 华文君 樊俊华 魏庆信 《湖北农业科学》 1999年第6期63-65,共3页
衰变加速因子(DAF) 是补体激活途径中的一个重要膜调节蛋白, 转人DAF 基因猪可以作为人器官移植的供体。采用斑点杂交试验(Dotblot) , 对经显微注射导入了hDAF 质粒片段、用聚合酶链反应(PCR) 鉴定的阳性猪所产仔猪32 头进行了整合检... 衰变加速因子(DAF) 是补体激活途径中的一个重要膜调节蛋白, 转人DAF 基因猪可以作为人器官移植的供体。采用斑点杂交试验(Dotblot) , 对经显微注射导入了hDAF 质粒片段、用聚合酶链反应(PCR) 鉴定的阳性猪所产仔猪32 头进行了整合检测, 获得转基因阳性仔猪14 头。说明了Dotblot 可作为转基因动物外源基因整合检测的一种手段。 展开更多
关键词 DAF dot-blot 转基因猪 外源基因整合 检测
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DOT-BLOTTING在离子交换层析纯化SO-Rb50瘤细胞抗原中的应用
5
作者 应方微 李永平 夏朝霞 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第1期82-82,共1页
关键词 dot-blotTING 离子交换层析 纯化 SO-RB50 瘤细胞 抗原 蛋白质 制备 抗RB单克隆抗体
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Dot-Blot Hybridization for Detection of Five Cucurbit Viruses by Digoxigenin-Labelled cDNA Probes 被引量:3
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作者 MENG Juan GU Qin-sheng +4 位作者 LIN Shi-ming PENG Bin LIU Li-feng TIAN Yan-ping LI Li 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第12期1450-1455,共6页
Dot-blot hybridization was applied in this paper to detect five viruses infecting cucurbitaceous crops, Zuccini yellow mosaic virus (ZYMV), Watermelon mosaic virus (WMV), Cucumber mosaic virus (CMV), Papaya ring... Dot-blot hybridization was applied in this paper to detect five viruses infecting cucurbitaceous crops, Zuccini yellow mosaic virus (ZYMV), Watermelon mosaic virus (WMV), Cucumber mosaic virus (CMV), Papaya ringspot viruswatermelon strain (PRSV-W) and Squash mosaic virus (SqMV), as a good alternative assay in seed health test and epidemiological and transgenic research. Digoxigenin-labelled cDNA probes of the five viruses were synthesized by PCR with the specific primers and applied in dot-blot hybridization to detect five viruses in crude extraction of the infected leaves. And three SqMV probes of different lengths (0.55, 1.6, and 2.7 kb, respectively) were designed to investigate the effect of hybridization. The results showed that the sensitivity for detecting the crude extraction of infected leaves by ZYMV, WMV, CMV, PRSV-W, and SqMV was down to 1:160, 1:160, 1:320, 1:160, and 1:320, respectively. Three SqMV probes of different length showed no differences on the sensitivity and specificity. The digoxigenin-labelled probes prepared by PCR could be used for accurate and rapid identification of 5 viruses infecting cucurbitaceous crops with good stabilities, sensitivities, specificity, and reproducibilifies. 展开更多
关键词 PCR digoxigenin-labelled cDNA probe dot-blot hybridization ZYMV WMV CMV PRSV-W SqMV
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The Use of the PCR-Based Dot-Blot Hybridization Assay to Detect Resistance Markers to Rifampicin and Streptomycin in Mycobacterium tuberculosis Isolates from the SW Region of Cameroon
7
作者 Irene Ane-Anyangwe Wilfred Fon Mbacham +7 位作者 Henry Dilonga Meriki Teyim Pride Theresa Nkuo-Akenji Veronique Mbeng Penlap Leopold Djomkam Tietcheu Damian Nota Anong Akindeh Mbuh Nji Vincent P. K. Titanji 《Journal of Tuberculosis Research》 2016年第2期72-79,共8页
Drug sensitivity testing to establish resistance to TB drugs takes many months to arrive at. Public health physicians have difficulties with such an approach due to long wait periods and cannot use it to establish com... Drug sensitivity testing to establish resistance to TB drugs takes many months to arrive at. Public health physicians have difficulties with such an approach due to long wait periods and cannot use it to establish community wide prevalence as a way to understand where resistance may be emerging faster and to limit its spread. The objective of this study was to use the dot-blot hybridization technique in the detection of resistance to rifamycin (RIF) and streptomycin (SM) in South- Western Cameroon and to compare the technique with the routine culture and drug susceptibility testing for detecting resistance in a resource poor country, Cameroon. A hospital-based study was conducted at the Regional hospitals of Buea and Limbe and Tiko Central Clinic. Tuberculosis (TB) patients aged 15 to 50 (mean age: 30.50 ± 8.33 standard deviation) were recruited for the study between December 2006 and April 2007. Cultures from 59 patients were tested for rifampicin and streptomycin sensitivity by the modified proportion method and mutational analysis for rpoB codon 516 and rrs codon 513 was performed by the dot-blot hybridization technique. Of the 59 sputum samples collected (36 were males and 23 were females) came from Buea 19 (32.2%), Limbe 20 (33.9%) and Tiko 20 (33.9%) towns respectively. Amplification for the gene showed that there was (59) 100% amplification with primers used for rpoB genes and 43 (72.9%) amplification with primers used for the rrs gene. Mutational analysis demonstrated that resistance to RIF was common in females (52.1%) than males (41.7%) while 6% of the samples were indeterminate. 12 (20.3%) samples showed phenotypic and genotypic resistance to RIF compared to 34 samples (58.1%) for SM. Phenotypic resistance and genotypic susceptibility were found in 5 (8.5%) RIF and 3 (4.7%) SM compared to phenotypic susceptibility and genotypic resistance that were found in 2 (3.5%) RIF and 3(4.7%) SM. Double mutation on rpoB and rrs genes occurred in 8 (13.6%) DNA samples. Resistance to RIF and SM due to mutations on the rpoB and rrs genes respectively in the SW region was found to be high and comparable to the drug susceptibility testing by 92%, (95% CI: 75.7 - 99.1). The Dot-blot technique will be useful in rapidly assessing the effectiveness of national TB control programs in limiting the spread of resistance strains in Cameroon. 展开更多
关键词 PCR-Based dot-blot Analysis RIFAMYCIN STREPTOMYCIN SW Region
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云南天竺葵上发现番茄斑萎病毒 被引量:6
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作者 朱敏 王泊婷 +2 位作者 黄莹 李佳 陶小荣 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期450-456,共7页
[目的]在云南省昆明市植物园中发现症状表现为叶片褪绿和环斑的天竺葵,怀疑其为番茄斑萎病毒属病毒侵染。[方法]将病叶汁液摩擦接种至本氏烟,显症后取样与原样一起用3种番茄斑萎病毒属病毒的抗体采用Dot-blot ELISA方法进行检测,并用RT-... [目的]在云南省昆明市植物园中发现症状表现为叶片褪绿和环斑的天竺葵,怀疑其为番茄斑萎病毒属病毒侵染。[方法]将病叶汁液摩擦接种至本氏烟,显症后取样与原样一起用3种番茄斑萎病毒属病毒的抗体采用Dot-blot ELISA方法进行检测,并用RT-PCR方法对本氏烟叶片进行检测。[结果]接种本氏烟的系统叶片在7 d后表现典型的花叶、卷曲和枯斑等症状,天竺葵病叶和接种显症的本氏烟系统叶Dot-blot ELISA和本氏烟叶片RT-PCR检测结果均表明其病原为番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)。RT-PCR产物的测序结果显示其N基因与TSWV-LE分离物核苷酸相似性达99.74%。[结论]天竺葵病样为TSWV侵染所致,这是首次在中国天竺葵上发现TSWV,对该病毒的防治工作具有参考价值。 展开更多
关键词 天竺葵 番茄斑萎病毒 dot-blot ELISA RT-PCR
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用套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA 被引量:5
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作者 肖一红 尹训南 +2 位作者 仇华吉 李娜 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期389-393,共5页
利用套式反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对实验性感染猪瘟病毒猪的福尔马林固定石蜡包埋组织标本中的病毒RNA进行检测,将所扩增产物点样于尼龙膜上进行Dot-blotting鉴定,扩增结果与各器官的病理组织学变化进行了比较。从攻毒对照组... 利用套式反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对实验性感染猪瘟病毒猪的福尔马林固定石蜡包埋组织标本中的病毒RNA进行检测,将所扩增产物点样于尼龙膜上进行Dot-blotting鉴定,扩增结果与各器官的病理组织学变化进行了比较。从攻毒对照组猪的肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结和扁桃体中检出了猪瘟病毒RNA,未从免疫攻毒猪只的脏器中检出猪瘟病毒RNA;所有扩增产物经Dot-blotting鉴定均得到了阳性信号;病毒基因的检出率与猪瘟病毒导致的病理组织学变化程度相一致。本试验成功建立了套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA方法,为猪瘟病毒的诊断和回顾性分析提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 石蜡包埋组织 病理变化 套式RT-PCR dot-blotting
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食管鳞癌中Paxillin mRNA的表达及其与癌转移的关系 被引量:7
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作者 高冬玲 赵志华 +3 位作者 张岚 张红新 张云汉 陈奎生 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第27期7-8,共2页
目的探讨Pax illin mRNA表达与食管癌转移的关系。方法采用原位杂交方法检测54例食管鳞癌、癌旁不典型增生组织及其正常食管组织中Pax illin mRNA的表达。结果有淋巴结转移的21例(A组)食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管组织中... 目的探讨Pax illin mRNA表达与食管癌转移的关系。方法采用原位杂交方法检测54例食管鳞癌、癌旁不典型增生组织及其正常食管组织中Pax illin mRNA的表达。结果有淋巴结转移的21例(A组)食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管组织中Pax illin mRNA阳性表达率分别为90.48%(19/21)、52.38%(11/21)和0,无淋巴结转移的33例(B组)食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管组织中的Pax illin mRNA阳性表达率分别为33.33%(7/33)、23.80%(5/33)和0。两组癌组织、癌旁不典型增生组织中Pax illin mRNA阳性表达率比较,P均<0.05。结论Pax illin mRNA表达与食管鳞癌的转移密切相关。 展开更多
关键词 食管肿瘤 Paxillin基因表达 原位杂交
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17号染色体缺失与乳酸脱氢酶相关性研究及其对多发性骨髓瘤预后的影响 被引量:11
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作者 丁路 周芙玲 +11 位作者 左学兰 刘尚勤 陈飞 肖晖 何莉 邵亮 汪英颖 周怡 刘明辉 吴江 罗琳 熊蓓 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第1期115-119,共5页
目的:分析del(17p13)(TP53)与多发性骨髓瘤患者临床资料的关系及其对预后的影响。方法:收集56例初诊多发性骨髓瘤患者临床资料,并对其骨髓标本行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测。统计软件采用SPSS 19.0,研... 目的:分析del(17p13)(TP53)与多发性骨髓瘤患者临床资料的关系及其对预后的影响。方法:收集56例初诊多发性骨髓瘤患者临床资料,并对其骨髓标本行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测。统计软件采用SPSS 19.0,研究del(17p13)与临床基本资料间的关系使用卡方检验,与实验室检查指标间的关系使用t检验。生存分析使用Kaplan-Meier法。结果:初诊多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者del(17p13)缺失的检出率为21.43%。Del(17p13)与乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平相关联(P=0.034),与性别、年龄、分型、D-S分期、ISS分期、血小板、白蛋白、球蛋白、β2微球蛋白、尿素氮、血肌酐、血钙、骨髓瘤细胞比例无关。Del(17p13)患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)及总生存期(overall survival,OS)均较未缺失者显著缩短(P<0.05)。结论:本研究发现del(17p13)与部分临床特征相关,del(17p13)的MM患者预后不良。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 荧光原位杂交 del(17p13) 乳酸脱氢酶
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月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异 被引量:2
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作者 唐颖 王莉芬 +4 位作者 吕丽 苏本利 冯晓海 王乃玉 张文波 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期665-671,共7页
目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR... 目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达。结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量最高。结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化最显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加。提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同。 展开更多
关键词 HOXA11基因 免疫组化 RT-PCR dot-blot 子宫内膜
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国人细小病毒B19感染相关疾病谱 被引量:16
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作者 张国成 许东亮 +4 位作者 王晓明 张笑飞 钱新宏 郑跃杰 李飚 《第四军医大学学报》 1999年第6期495-498,共4页
目的:探讨我国人细小病毒B19感染引起的相关疾病谱.方法:用聚合酶链反应(PCR)技术及原位杂交技术对66例先天性心脏病(CHD)心肌组织标本及108例血小板减少性紫癜(TP)、47例急性再生障碍性贫血(AAA)、5... 目的:探讨我国人细小病毒B19感染引起的相关疾病谱.方法:用聚合酶链反应(PCR)技术及原位杂交技术对66例先天性心脏病(CHD)心肌组织标本及108例血小板减少性紫癜(TP)、47例急性再生障碍性贫血(AAA)、5例传染性红斑(EI)及40例缺铁性贫血(IDA)患儿的外周血、骨髓标本进行了B19-DNA检测,并随机对其中23例B19-DNA阳性标本作巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)及弓形体(TOX)-DNA的检测.结果:①上述疾病中B19-DNA的总阳性检出率为26.3%(70/266),其中EI,AAA,ITP和CHD病例中B19-DNA的阳性率分别为100%(5/5),25.5%(12/47)及38.0%(41/108)和18.2%(12/66);②23例B19-DNA阳性病例中,AAA,TP及CHD的标本CMV-DNA的检出率分别为10.0%(1/10),20.0%(1/5)及40.0%(2/5).结论:我国HPVB19病毒感染可引起EI,AAA和急性血小板减少性紫癜,并可能为CHD的重要致病因子之一. 展开更多
关键词 细小病毒感染 细小病毒B19 疾病谱 聚合酶链反应
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无核荔枝果实形成差异表达基因cDNA的克隆 被引量:4
14
作者 禤维言 郑学勤 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期597-601,共5页
采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经R... 采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经Reverse Northern Dot-Blot筛选该文库,共获得61个阳性克隆,随机选取17个克隆进行测序,共获得10条非重复序列,对其中较长的7个序列进行同源分析,结果表明:有6个序列在荔枝中为首次报道。 展开更多
关键词 无核荔枝 无核果实 抑制差减杂交(SSH) Reverse NORTHERN dot-blot
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“百衲被”与民族文化记忆——艾丽思·沃克短篇小说《日用家当》的文化解读 被引量:24
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作者 张峰 赵静 《山东外语教学》 2003年第5期16-19,共4页
'百衲被'是当代美国文化身份的中心隐喻之一,也是重要的黑人美学主题,这在艾丽思·沃克的短篇小说<日用家当>中得以充分展示.本文试从文化的角度揭示'百衲被'与民族文化记忆的关系及其在多元文化杂交时代的... '百衲被'是当代美国文化身份的中心隐喻之一,也是重要的黑人美学主题,这在艾丽思·沃克的短篇小说<日用家当>中得以充分展示.本文试从文化的角度揭示'百衲被'与民族文化记忆的关系及其在多元文化杂交时代的特殊意义. 展开更多
关键词 百衲被 文化身份 民族文化记忆 文化杂交 美国 短篇小说 《日用家当》
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Pen a1抗原表位187—202关键氨基酸的筛选和鉴定 被引量:1
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作者 牟慧 高美须 +5 位作者 潘家荣 支玉香 赵杰 刘超超 李树锦 赵鑫 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1793-1801,共9页
【目的】Pen a1是虾中主要的过敏原蛋白,其抗原表位与致敏作用有关。对Pen a1的一个抗原表位187—202中氨基酸的出现频率及保守性进行分析后合成突变肽,并检测该突变肽与表位抗体的结合能力,筛选关键氨基酸,为研究虾致敏机理及脱敏方法... 【目的】Pen a1是虾中主要的过敏原蛋白,其抗原表位与致敏作用有关。对Pen a1的一个抗原表位187—202中氨基酸的出现频率及保守性进行分析后合成突变肽,并检测该突变肽与表位抗体的结合能力,筛选关键氨基酸,为研究虾致敏机理及脱敏方法提供理论依据。【方法】利用MEGA5软件对Pen a1蛋白5个表位及其氨基酸的组成与出现频率进行分析,选出这些表位中出现频率大的氨基酸;对过敏原数据库中所有致敏食物原肌球蛋白的氨基酸序列的保守性进行分析,筛选出保守性高的氨基酸。两种方法筛选出的共有氨基酸为潜在的关键氨基酸。用丙氨酸分别替代这些潜在的氨基酸形成突变肽。利用固相合成法分别合成原表位肽及突变肽。并将原表位肽作为免疫原免疫新西兰大白兔,获得表位多克隆抗体。利用间接ELISA方法及竞争性Dot-blot方法检测突变的表位肽与表位抗体IgE结合能力,筛选出结合能力明显下降的突变肽,其中替换的氨基酸即为该表位的关键氨基酸。【结果】谷氨酸(E)、亮氨酸(L)、精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、缬氨酸(V)、丝氨酸(S)、天冬氨酸(D)在表位中出现频率较大,并高于在Pen a1整体蛋白中出现的概率,为活性氨基酸。将序列在187—202的表位中氨基酸组成及出现频率进行统计,推测E、V、L可能为该表位的关键氨基酸。将SDAP数据库中致敏食物原肌球蛋白序列与Pen a1氨基酸序列用DNAMAN软件进行多序列比对,K、L、E、V、G在所有比对的序列中都存在,表明这5个氨基酸为保守氨基酸。选择共有的E、V、L为可能的关键氨基酸,用丙氨酸替代表位中E、V、L分别合成1、2和3号突变肽。用竞争性Dot-blot检测突变肽结合抗体能力,以提取纯化的虾致敏蛋白为包被原,用突变肽抑制虾蛋白结合抗体,发现原表位肽抑制作用明显,1号突变肽的抑制作用与原表位肽相似,2、3号肽的抑制作用明显低于原表位肽。谷氨酸突变的1号突变肽对表位活性并没有较大影响,说明谷氨酸不是该表位的关键氨基酸;而2、3号突变肽与抗体的结合能力明显降低,即亮氨酸和缬氨酸是该表位的关键氨基酸。同时,利用间接ELISA方法,将原表位肽和突变肽与兔血清反应,比较OD450值。结果显示,1号突变肽致敏性降低,OD450值约为对照的1/2.1,2号突变肽OD450值降低为对照的1/2.6,3号突变肽OD450值降低为对照的1/3.2。说明突变表位与表位抗体结合能力均有不同程度的降低。结合竞争Dot-blot试验结果,亮氨酸和缬氨酸为该抗原表位的关键氨基酸。【结论】建立了一种关键氨基酸的筛选和鉴定的方法。亮氨酸和缬氨酸被丙氨酸取代后,其与表位对应抗体的结合能力发生明显下降,是Pen a1中表位187—202的关键氨基酸。这种筛选关键氨基酸的方法可以用于其它抗原表位的关键氨基酸的确定及氨基酸对表位致敏性的影响,深入研究过敏原脱敏机理;同时也可用于基因工程或氨基酸修饰中降低过敏原致敏性。 展开更多
关键词 PEN A1 抗原表位 关键氨基酸 竞争性dot-blot 间接ELISA
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银屑病皮损中IL-1受体拮抗物的蛋白和mRNA表达 被引量:2
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作者 刘玮 赵庆利 +2 位作者 RenoDebets ErrolPPrens 蔡瑞康 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期340-342,共3页
采用抗人IL-1ra单抗和地高辛标记的RNA探针,在银屑病皮损和正常人皮肤切片上进行APAAP染色和原位杂交,检测并比较IL-1ra的蛋白表达和mRNA转录水平。结果发现,正常人皮肤中IL-1ra蛋白染色阴性,IL-1ramRNA信号微弱;相比之下,银... 采用抗人IL-1ra单抗和地高辛标记的RNA探针,在银屑病皮损和正常人皮肤切片上进行APAAP染色和原位杂交,检测并比较IL-1ra的蛋白表达和mRNA转录水平。结果发现,正常人皮肤中IL-1ra蛋白染色阴性,IL-1ramRNA信号微弱;相比之下,银屑病皮损中IL-1ra蛋白和mRNA的表达均异常增高,统计学比较相差显著。上述结果显示:IL-1ra在银屑病皮损中增强表达,提示银屑病病理过程中IL-1系统平衡失调。 展开更多
关键词 银屑病 原位杂交 IL-1 MRNA 受体
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荧光原位杂交在子宫颈病变的癌变风险预测中的应用 被引量:2
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作者 杨继洲 肖兰 杨娟 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期420-422,共3页
目的探讨hTERC基因在不同宫颈病变中的扩增情况及hTERC基因扩增对宫颈病变发展趋势的预测意义。方法利用FISH在荧光显微镜下观察3号染色体着丝粒CSP3和hTERC基因双色探针的杂交效果,检测不同宫颈病变中hTERC基因扩增情况,对部分存在hTER... 目的探讨hTERC基因在不同宫颈病变中的扩增情况及hTERC基因扩增对宫颈病变发展趋势的预测意义。方法利用FISH在荧光显微镜下观察3号染色体着丝粒CSP3和hTERC基因双色探针的杂交效果,检测不同宫颈病变中hTERC基因扩增情况,对部分存在hTERC基因扩增的患者进行随访。结果随着宫颈病变的发展,hTERC基因扩增的阳性率及扩增的细胞所占比例均在不断升高,差异具有统计学意义。结论 hTERC基因扩增与宫颈病变的发展密切相关,FISH检测hTERC基因是否存在扩增可能成为预测宫颈病变发展趋势的可靠手段。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 宫颈上皮内病变 HTERC基因
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荧光原位杂交在膀胱尿路上皮癌中的应用 被引量:2
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作者 肖兰 杨继洲 康照利 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期302-304,共3页
目的探讨3,7,17号染色体及9p21(p16基因)组合探针在监测膀胱尿路上皮癌术后复发及诊断膀胱尿路上皮癌的应用价值。方法利用荧光原位杂交(FISH)检测膀胱尿路上皮癌患者的尿脱落细胞及组织切片中3,7,17号染色体及9p21组合的畸变情况。结果... 目的探讨3,7,17号染色体及9p21(p16基因)组合探针在监测膀胱尿路上皮癌术后复发及诊断膀胱尿路上皮癌的应用价值。方法利用荧光原位杂交(FISH)检测膀胱尿路上皮癌患者的尿脱落细胞及组织切片中3,7,17号染色体及9p21组合的畸变情况。结果 FISH监测膀胱尿路上皮癌术后复发的敏感度为87.50%;术前FISH阳性的患者术后更易复发;FISH诊断膀胱尿路上皮癌的阳性率为78.85%。结论利用FISH检测尿脱落细胞中3,7,17号染色体及9p21组合的畸变能有效辅助监测膀胱尿路上皮癌术后复发;并可能在一定程度上预测术后复发;同时利用FISH检测组织切片中3,7,17号染色体及9p21组合的畸变也能有效辅助膀胱尿路上皮癌的诊断。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 膀胱尿路上皮癌 染色体畸变
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FISH/MAR技术及其在环境微生物学研究中的应用 被引量:3
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作者 张瑛 阮晓红 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期100-104,共5页
荧光原位杂交与微量自动照相集成技术(FISH/MAR)能够同时在单细胞水平原位进行细胞的分类鉴定和细胞对底物的吸收特性研究,这是微生物学研究领域的一大突破。目前,这一技术已有效应用于工程系统(污水处理厂、生物反应器等)和自然生态系... 荧光原位杂交与微量自动照相集成技术(FISH/MAR)能够同时在单细胞水平原位进行细胞的分类鉴定和细胞对底物的吸收特性研究,这是微生物学研究领域的一大突破。目前,这一技术已有效应用于工程系统(污水处理厂、生物反应器等)和自然生态系统中微生物的研究。污染水体的原位强化净化及其生态修复与微生物也有着密切的关系,因此,这一技术的应用不仅能够提高工程系统污水处理效率,也将为受损水生态系统的原位修复提供科学依据。 展开更多
关键词 荧光原位杂交(FISH) 微量自动照相术(MAR) 微生物 种属特性 功能特性
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