猪链球菌2型二肽酶Ⅳ的克隆、表达及酶活性鉴定

目的克隆表达猪链球菌2型二肽酶Ⅳ(DPPⅣ)编码基因,分析表达产物的免疫原性,并测定其酶活性。方法采用PCR法,从四川资阳中毒性休克综合征病人分离株05ZYH33基因组扩增DPPⅣ的编码基因dppⅣ,构建重组表达质粒pET32a-dppⅣ,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定,并用western blot检测其抗原活性;最后对表达产物进行亲和层析纯化,测定其在不同pH、温度下的酶活性。结果dppⅣ基因在原核细胞中得到高效表达,在最适温度和pH下具有最强酶活性。结论我国猪链球菌2型毒力株05ZYH33含有dppⅣ基因,在原核系统高效表达的重组蛋白具有良好的免疫原性和酶活性。