Evaluation of Nitrate Reductase Assay for Rapid Detection of Drug Resistant Tuberculosis

Emergence of multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) urgently demands for simple, rapid and inexpensive methods of its detection for the effective treatment of drug resistant tuberculosis, particularly in low-income countries. A total of 113 clinical isolates of M. tuberculosis were tested for four first line antitubercular drugs by nitrate reductase assay (NRA) and were compared with standard proportion method to evaluate NRA efficacy. Results were available in 7 - 14 days by NRA as compared to proportion method which generally takes 4 - 6 weeks. The sensitivity and specificity of NRA were 98.1% and 100% for isoniazid, 95.1% and 98.6% for rifampicin, 91.4% and 94.9% for streptomycin, and 78.6% and 97.9% for ethambutol, respectively. Agreement between NRA and proportion method were 99.1%, 97.3%, 93.8%, 95.6% for isoniazid, rifampicin, streptomycin and ethambutol, respectively. NRA is easier, inexpensive and reliable method for susceptibility testing of Mycobacterum tuberculosis for isoniazid and rifampicin, the two most im- portant drugs for the treatment of tuberculosis. The reduction in susceptibility testing time, and higher sensitivity and specificity of NRA method is of fundamental importance in detecting MDR-TB.

肉汤微量稀释法对耐多药结核分枝杆菌敏感性检测的评价

目的评价肉汤微量稀释(BMD)法在耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)敏感性检测中的应用效果。方法采用罗氏比例法和BMD法对海南省108株MDR-MTB及11株非MDR-MTB菌株进行药敏试验,并对两种药敏方法检测结果不一致菌株进行全基因组测序(WGS)。结果罗氏比例法和BMD法药敏结果平均判读时间分别为28.0、8.5 d。罗氏比例法检测异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率高于BMD法(均P<0.001);BMD法检测丙硫异烟胺和对氨基水杨酸的耐药率高于罗氏比例法(均P<0.001)。以罗氏比例法药敏结果为金标准,BMD法检测耐药性的灵敏度和特异度分别为50.00%~100%、95.69%~100%,除EMB(87.39%)、INH(94.96%)外,BMD法检测其他药物的耐药性符合率均≥95%。罗氏比例法药敏结果与WGS总符合率为76.19%(32/42),BMD法药敏结果与WGS总符合率为23.81%(10/42),差异具有统计学意义(χ^(2)=23.048,P<0.001)。两种药敏方法检测结果不一致的MTB共34株,罗氏比例法耐药+BMD法敏感的26株MTB中,22株(84.62%)相关耐药基因发生突变;罗氏比例法敏感+BMD法耐药的11株MTB中,5株(45.45%)相关耐药基因发生突变。结论BMD法是一种准确、快速的MDR-MTB敏感性检测方法,但仍需要进一步改进和优化,耐药性与相关耐药基因的突变密切相关。

贵州省某专科医院非结核分枝杆菌的菌种鉴定及耐药检测分析

目的探讨非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定分布及耐药性,为临床诊治提供参考依据。方法搜集2017―2020年贵州某专科医院微量肉汤稀释法药敏试验对-硝基苯甲酸(PNB)培养基阳性的疑似NTM菌株,经聚合酶链式反应(PCR)-荧光探针法初步鉴定为NTM后,用基因芯片法进行菌种鉴定,采用微量肉汤稀释法进行15种药物测试。结果贵州地区流行的100例NTM菌株经鉴定分为10种菌型类别。其中,占比最高者为龟/脓肿分枝杆菌48%(48/100),其后依次为鸟分枝杆菌16%(16/100),堪萨斯分枝杆菌12%(12/100),胞内分枝杆菌11%(11/100)。药敏结果显示100株NTM总耐药率61.8%,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高76.4%,其后依次为微黄分枝杆菌73.3%、偶然分枝杆菌55.6%、鸟分枝杆菌53.8%和戈登分枝杆菌53.3%。男女病人比例为63∶37,男性耐药率56.1%;女性耐药率71.5%。结论贵州地区有10种NTM菌种流行,龟/脓肿分枝杆菌是该地区NTM优势菌种。不同菌种间耐药率差异较大,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高。男性病人多于女性,女性耐药率高于男性。应用快速NTM菌种鉴定和药敏试验,可为NTM防控项目的决策者提供参考依据,有助于促进医务人员对抗NTM药物的科学选择。

比例法测定结核菌药敏试验中菌液浓度的研究

为了探讨比例法测定结核菌药敏试验中结核菌悬液的最佳实验浓度 ,采用国际推行的比例法 ,用 10 -2 mg ml、10 -3 mg ml、10 -4 mg ml、10 -5mg ml、10 -6mg ml,5个浓度进行试验 ,并与国际推行的比例法进行比较。结果用 10 -2 mg ml、10 -4 mg ml、接种培养基 ,其药敏试验结果成功率高 ;基础培养基上结核菌生长良好 ,便于结果判断 ;结果报告及时 ;与国际推行的比例法进行相比较 ,药敏试验结果差异性不显著 (P >0 0 5)。试验结果表明 ,比例法测定结核菌药敏试验时 ,最佳菌液浓度是10 -2 mg ml、10 -4 mg ml。

MGIT 960和比例法对结核分枝杆菌药物敏感性试验的对比研究

目的评价BACTEC MGIT960检测8种抗结核药物耐药性的效果。方法用MGIT960对结核杆分枝杆菌临床分离菌株进行抗结核药物异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析。结果用MGIT960法与L-J比例法对118株结核分枝杆菌临床分离株进行异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺的耐药性检测,两种方法的符合率分别为97.5%(115/118)、92.4%(109/118)、96.6%(114/118)、84.7%(100/118)、94.9%(112/118)、94.1%(111/118)、97.5%(115/118)、85.6%(101/118)。MGIT960完成一线/二线药物药敏试验的时间平均为8.9和8.3天,L-J法则分别为26.7天和26.1天,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MGIT960所得的药敏结果与传统比例法有较高的一致性,但检测时间较短,有利于耐药结核病人的早期诊断和治疗。

尿路感染的病原菌分布特征及耐药性检测分析

目的了解川北地区尿路感染的病原菌分布及对抗菌药物的耐药情况。方法分离自川北医学院附属医院泌尿系统感染患者尿液标本的细菌,采用法国生物梅里埃(API)公司生产的Bio-Merieux VITEK-32全自动细菌鉴定系统对细菌进行鉴定,用琼脂稀释法进行药物敏感试验,双纸片表型确证试验检测产ESBLs菌株,结果用美国临床实验室标准化协会(CSLI)2006公布的标准判定。结果检出的442株尿路感染的细菌中,革兰阴性菌占71.9%,以大肠埃希菌为主,占42.1%。大肠埃希菌除对亚胺培南全部敏感外,对其它抗菌药均表现出不同程度耐药。186株大肠埃希菌中,产ESBLs 85株,检出率为45.8%。结论川北地区尿路感染的主要致病菌为肠杆菌科细菌,不同病原对抗菌药物的敏感性不同。尿路感染的治疗中,医师应根据病原鉴定和药敏试验结果选择恰当的抗菌药。

猪源大肠杆菌耐药性的检测与分析

为了对福建省龙岩地区猪源大肠杆菌进行分离培养,开展大肠杆菌耐药性调查,试验采用纸片扩散法测定了各分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果表明:大肠杆菌分离菌株对四环素、多西环素高度耐药,耐药率为100%;对氨苄西林、氟苯尼考、氯霉素、复方新诺明、磺胺异恶唑的耐药率也均在90%以上;对美罗培南、阿米卡星敏感率在80%以上。说明福建省龙岩地区猪源大肠杆菌分离菌株对各抗生素的敏感性不同。

结核分枝杆菌不同药物敏感性检测方法的比较

采用比例法和绝对浓度法检测了56株结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的敏感性,探讨了比例法和绝对浓度法检测结核分枝杆菌耐药性的一致性和可比性。检测结果显示:2种方法检出的耐药率差异无显著性;用2种方法进行结核分枝杆菌耐药性测定的一致性较高,采用国际通用的比例法,依然具有与我国传统采用绝对浓度法获得的资料数据的可比性。

结核菌药敏试验方法(比例法)改进的研究

目的 为了使比例法推广应用 ,在不影响药敏试验结果的前提下 ,对比例法进行改良。方法 用比例法进行结核菌药敏试验时 ,将用接种环接种改成用 0 5毫升无菌玻璃刻度吸管 ;将菌悬液浓度由 10 -3 mg/ml、10 -5mg/ml改用 10 -2 mg/ml、 10 -4 mg/ml。同时与比例法作对比。 结果 改良法的敏感性、特异性、正确率、重复性与比例法无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而改良法结核菌生长情况、接种需要时间及药敏试验结果的成功率 ,都明显优于比例法。结论 用改良法测定结核菌耐药性 ,方法简便 ,肉眼观察方便 ,结果准确 ,重复性好 。

两种检测超广谱β-内酰胺酶表型方法的比较

目的了解某医院临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的耐药性与基因型,比较两种方法对ESBLs表型检测的效果。方法随机收集100株ESBLs阳性菌株(初筛试验阳性)为实验组,30株ESBLs阴性菌株(初筛试验阴性)为对照组。经Vitek2Compact自动化系统鉴定细菌,纸片扩散法进行药敏试验;采用改良Hodge试验检测耐碳青霉烯类药物菌株;美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的ESBLs表型确证试验和利用3-氨基苯酚硼酸改良的ESBLs表型确证试验进行表型检测;同时用聚合酶链反应(PCR)检测全部菌株的ESBLs基因。结果 ESBLs初筛试验阳性菌株均耐头孢噻肟,但对碳青霉烯类药物仍敏感;2株耐碳青霉烯类药物的菌株,改良Hodge试验阳性。ESBLs基因检出率为84.00%,基因型以SHV和CTX-M型为主。以PCR检测ESBLs基因结果为金标准,ESBLs表型确证试验和改良ESBLs表型确证试验的灵敏度、特异性、阴性预期值、阳性预期值分别为72.61%、100.00%、100.00%、66.67%和98.81%、100.00%、100.00%、97.87%,两种方法比较,差异有统计学意义(χ2=7.53,P=0.006)。结论 ESBLs初筛试验阳性菌株对碳青霉烯类药物具有较高的敏感性。利用3-氨基苯酚硼酸改良的ESBLs表型确证试验检测ESBLs表型,效果更好。

Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌的药敏试验

目的探讨Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌对抗真菌药物的敏感性。方法临床标本分离出酵母样真菌92株,采用VITEK-60YBC卡结合科码嘉念珠菌显色培养基(CHROMager)进行鉴定分型,用Rosco纸片扩散法进行药敏试验。结果92株酵母样真菌中以白色念珠菌为主,占69.6%。分离菌株对氟康唑(FCZ)、酮康唑(KTC)、伊曲康唑(ITC)、两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感率分别为95.7%、96.7%、100%、100%、93.5%。结论广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用,增加了酵母菌感染和耐药菌株出现的机会,加强真菌的检测和耐药性监测已具有越来越重要的意义。

BACTEC-MGIT 960快速药敏与罗氏比例法药敏检测方法对比

目的：比较BACTEC-MGIT960全自动分枝杆菌快速药敏与罗氏比例法药敏检测方法的一致性。方法：平行检测住院患者分枝杆菌临床分离株245株的利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）的药物敏感性。结果：经对比检测,BACT-MGIT960全自动分枝杆菌药敏测定可在4-13 d内检测RFP,INH,SM,EMB的药物敏感性,平均7.8d。与罗氏比例法药敏的符合率分别达到98.78%,97.55%,96.73%,96.73%。平均符合率为97.45%。结论：BACTEC-MGIT 960分枝杆菌液体药敏系统,可快速准确获得药敏检测结果,尤其适用于临床分离株的快速药敏筛检。

广州地区生殖系统念珠菌病的菌型及其体外药敏结果分析

目的监测2013年至2019年广州地区生殖系统念珠菌分离菌株情况,及其7种抗真菌药物的敏感性趋势。方法选取2013年1月至2019年12月期间在广州市皮肤病防治所性传播疾病门诊就诊的生殖系统念珠菌病患者共649例,其中男116例,女533例,年龄15~84岁。采用法国梅里埃公司的ATB ID32C酵母菌鉴定反应板鉴定菌种和Rosco纸片扩散法进行体外药敏检测,比较不同菌型念珠菌的药敏趋势。统计学方法采用χ^(2)检验。结果临床649株生殖系统念珠菌感染患者中白念珠菌517株(79.66%)、光滑念珠菌72株(11.09%)、近平滑念珠菌33株(5.09%)和其他念珠菌27株(4.16%);7年间的年分离率:白念珠菌平缓无变化(χ^(2)=11.56,P>0.05),光滑念珠菌波动性升高、近平滑念珠菌和其他念珠菌均波动性降低(χ^(2)=13.72、19.28、14.76,均P<0.05)。念珠菌对7种药物敏感性为:制霉菌素99.69%(647/649)、酮康唑85.20%(553/649)和氟康唑72.57%(471/649),敏感性较高,而伊曲康唑52.23%(339/649)、咪康唑34.36%(223/649)、嗌康唑34.98%(227/649)和特比奈酚8.32%(54/649)的敏感性低。结论生殖系统念珠菌病以白念珠菌为主,念珠菌对多烯类药物敏感性高,唑类药物存在交叉耐药,不同菌型的药敏有差异。

抗菌药物体外联合药物敏感性试验方法

近年来,多重耐药菌(MDR)日益流行,但相关治疗方法有限,抗菌药物相互作用相关研究成为热点。体外联合药物敏感性试验可以判断2种及以上抗菌药物是否有协同作用,为临床联合使用抗菌药物提供参考。目前,临床常用体外联合药物敏感性试验方法有时间-杀菌曲线(TKA)、棋盘稀释法(CB)、E试验和纸片法。文章就上述方法进行综述,为临床应用提供参考。

BACTEC MIGT960在结核分枝杆菌药物敏感性试验中的临床研究

目的评价BACTEC MIGT960快速检测8种抗结核药物敏感性效果。方法收集住院结核病人痰标本分离的结核分枝杆菌菌株,分别采用L-J比例法和MGIT960法进行药物敏感性检测,在完成一线4种药物的药敏检测后,选取对任何一种一线药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)耐药的菌株进行二线药物(卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺)敏感性检测。从结果报告时间和符合率等方面进行评价。统计学分析采用kappa检验和t检验,P值为0.05。结果对212株结核分枝杆菌临床分离株进行了4种一线药物的药物敏感性检测,随后,对耐任何一种一线药物的90株菌进行了4种二线药物的药物敏感性检测,以L-J比例法为金标准,MGIT 960法的准确度和Kappa值分别为:异烟肼96.0%和0.92,利福平99.0%和0.98,链霉素99.0%和0.97,乙胺丁醇96.0%和0.81,卷曲霉素100.0%和1.00,卡那霉素99.0%和0.85,氧氟沙星96.0%和0.88,乙硫异烟胺94.0%和0.73;完成一线/二线药物药敏试验的平均时间,MGIT 960为8.10和10d,L-J法则均为30d,两种方法培养时间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MGIT 960法与传统的L-J比例法药敏试验比较,具有符合率较好、检测时间明显缩短的特点,有利于临床及时有效合理化用药。

嗜麦芽窄食单胞菌体外药敏试验方法评价及耐药性分析

目的:评价纸片扩散法和仪器法检测嗜麦芽窄食单胞菌的药敏试验的可靠性,并分析嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用抗菌药物的敏感性。方法:采用琼脂稀释法、VITEK-AMS和纸片扩散法检测嗜麦芽窄食单胞菌对11种抗菌药物的敏感性。结果:纸片法和琼脂稀释法检测嗜麦芽窄食单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦的药敏结果有差异,对其余抗生素无显著性差异;VITEK-AMS和琼脂稀释法检测嗜麦芽窄食单胞菌对阿莫西林/棒酸、哌拉西林/他唑巴坦、头抱他啶、复方新诺明的药敏结果有显著性差异,对其余抗生素无显著性差异; 嗜麦芽窄食单胞菌除对左旋氧氟沙星、复方磺胺甲唑有较高的敏感性外,对其余多种抗菌药物的耐药性菌较高。结论:纸片法不宜用于嗜麦芽窄食单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦的敏感性检测;VITEK-AMS不宜用于嗜麦芽窄食单胞菌对阿莫西林/棒酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、复方新诺明的敏感性检测;左旋氧氟沙星、复方新诺明可做为治疗嗜麦芽窄食单胞菌引起的感染的有效药物。

两种检测方法对MRSA阳性病例检测临床效能评价

目的:探讨深圳市第二人民医院通过聚合酶链式反应(PCR)检测技术和微生物细菌鉴定仪法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测的阳性情况和两种检测方法的相符性,以及此两种方法检测对确诊MRSA阳性患者治疗过程监测的临床价值。方法:收集2016年1月至2016年12月深圳市第二人民医院临床科室送检标本中测得金黄色葡萄球菌阳性标本,对同时进行了PCR检测和细菌鉴定仪检测的病例进行数据的整理、统计和分析。结果:在同时进行了两种方法检测的98例标本中,PCR检测技术与细菌鉴定仪法的符合率为64.29%;以PCR法为标准,微生物鉴定法检测结果的灵敏度为33.33%,特异度为84.75%,符合率为64.29%,阳性预测值为59.09%,阴性预测值为65.79%。PCR检测技术在患者治疗过程中多次检测的阳性率为66.67%,细菌鉴定仪法为33.33%。结论:微生物细菌鉴定仪法特异性高,可以和PCR检测技术联合使用,从而降低临床检测过程中出现的假阳性率,正确地指导临床用药;PCR检测技术的灵敏度高,提高了阳性检出率,对于治疗过程的监测效果PCR检测技术更加优于细菌鉴定仪法。

2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究

目的评价荧光定量PCR探针熔解曲线法(简称Melt PCR法)和Gene Xpert MTB/RIF技术(简称Xpert法),用于临床涂阳标本诊断利福平耐药结核病(Rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)的检测效能及应用价值。方法随机收集2016年2月至2018年6月在河北省胸科医院就诊肺结核患者结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)涂阳标本278例,应用传统的结核菌比例法药敏试验(对照检测方法)、Melt PCR法和Xpert法同时进行RR-TB情况的检测,分析Melt PCR法和Xpert法检测RR-TB的效能。结果3种方法同时对278例MTB阳性标本的利福平耐药进行检测,耐药检出结果差异无统计学意义(P>0.05)。与传统药敏试验结果相比,Melt PCR法和Xpert法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度和约登指数分别为97.96%、98.25%、92.31%、99.56%、98.20%、96.21%和95.92%、97.38%、88.68%、99.11%、97.12%、93.30%,Kappa值分别为0.940和0.904(P<0.05),均为高度一致。3种方法在痰液中的利福平耐药均显著高于支气管肺泡灌洗液,且差异具有统计学意义(P<0.05)。不同带菌量样本的利福平耐药检出结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论Melt PCR法和Xpert法用于临床涂阳标本中检测RR-TB具有相似的高灵敏度和特异度等检测性能,可结合实际需求在耐多药结核病防治中推广和应用。

基因芯片技术在检测痰涂阳肺结核患者结核分枝杆菌耐药性的应用效果

目的探讨基因芯片技术在结核病耐多药快速检测中的应用效果。方法收集重庆市五个区县1 030例涂阳肺结核患者的痰标本,同时进行罗氏培养和基因芯片检测异烟肼、利福平耐药性,培养后的菌株用比例法药敏试验检测异烟肼、利福平的耐药性。以比例法药敏试验为判断标准,对基因芯片的检测效果进行分析。结果对同时有两种耐药性检测结果的958例患者进行了统计学分析,基因芯片对异烟肼检测结果和比例法药敏试验比较差异无统计学意义(P>0.05),符合率94.1%,灵敏度80.2%,特异度95.9%,阳性预测值71.8%,阴性预测值97.4%,Kappa值为0.724。基因芯片对利福平检测结果和比例法药敏试验比较差异无统计学意义(P>0.05),符合率96.3%,灵敏度86.4%,特异度97.5%,阳性预测值80.9%,阴性预测值98.3%,Kappa值为0.815。此外,基因芯片对异烟肼和利福平耐药结核病检测结果和比例法药敏试验比较差异无统计学意义(P>0.05),符合率96.9%,灵敏度78.3%,特异度98.3%,阳性预测值78.3%,阴性预测值98.3%,Kappa值为0.766。结论基因芯片技术可用于耐多药结核病早期快速筛查和诊断,以弥补传统药敏试验的不足,但该方法对检测环境要求较高,需对操作人员严格培训。

一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌临床菌株药物敏感性的效果评价

目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取188株,采用一种最小抑菌浓度检测试剂盒(MYCOTB)检测其对11种一、二线抗结核药物的耐药性,以常规微孔板微量肉汤稀释法为对照方法,结合全基因组测序技术,评估MYCOTB法检测药物耐药性的灵敏度、特异度及两种表型药敏方法的一致性。结果以常规微孔板微量肉汤稀释法为标准,MYCOTB检测RFP、ETH、RFB、SM、INH、PAS、OFX、AMK、MFX、EMB和KM等11种药物耐药性的灵敏度分别为92.0%、88.6%、86.7%、84.6%、84.3%、75.0%、67.7%、57.4%、56.7%、56.5%和40.0%,特异度分别为97.1%、96.7%、96.2%、97.3%、90.0%、95.6%、96.1%、99.5%、91.1%、96.4%和100.0%,符合率分别为95.7%、95.2%、94.7%、94.7%、87.2%、94.7%、91.0%、97.9%、85.6%、91.5%和96.8%,Kappa值分别为0.89、0.84、0.81、0.84、0.75、0.52、0.68、0.66、0.47、0.57和0.87。对于两种表型药敏方法结果不一致的菌株,基因测序结果更支持MYCOTB的检测结果。结论MYCOTB检测MTB对11种一、二线抗结核药物耐药性具有良好的灵敏度和特异度,可用于MTB菌株耐药性的检测。