鸭短喙与侏儒综合征病毒分离与鉴定

山东某樱桃谷鸭场出现以患鸭短喙、长舌、生长不良为主要特征的疾病,疑似感染鸭短喙与侏儒综合征病毒(duckling short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并检测其对樱桃谷鸭的致病性。首先,通过临床症状、病理变化、病料PCR检测,确定感染鸭短喙侏儒综合征病毒。其次,用SPF鸭胚分离培养病毒后,对病毒进行电镜观察和同源性与系统发育树分析,再检测病毒尿囊液EID_(50)。最后,动物回归试验中,给2日龄樱桃谷鸭口服病毒感染鸭胚尿囊液,观察致病特点,以及用PCR和间接免疫荧光试验检测病毒分布。结果显示:SPF鸭胚接毒后96~120 h鸭胚死亡,电镜观察病毒粒子大小为20~50 nm,尿囊液EID_(50)为10^(-4.85)·0.2 mL^(-1)。尿囊液PCR检测SBDSV为阳性,证明从鸭胚中成功分离培养SBDSV。该病例主要临床表现短喙和体重降低,感染后2周内持续排毒,VP 2片段与鸭短喙侏儒综合征病毒序列的相似性为99.8%,表明是由鸭短喙与侏儒综合征病毒感染引起,命名为SBDS-SD株。动物回归试验中,出现短喙、腹泻、体重显著降低等与自然病例相似的临床症状。本试验成功分离到一株鸭短喙与侏儒综合征病毒,并验证其对樱桃谷鸭具有致病性,为该病的进一步研究提供基础。

新型鹅细小病毒研究进展

新型鹅细小病毒主要引起发病鸭临床表现为短喙、舌外伸、生长发育受阻的疾病,根据该病临床特征又称为“鸭短喙侏儒综合症”。本文综合了目前最新的新型鹅细小病毒研究,并与经典鹅细小病毒在流行病学、临床症状、生物学特性、检测方法方面进行对比,突出了新型鹅细小病毒在发病宿主、临床和剖检症状、核苷酸序列方面发生的改变,以期为新型鹅细小病毒病的诊断、检测、及流行病学调查提供依据。

新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响

为了探究新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响,试验将180只健康非免疫半番鸭随机分为3组,分别为对照组、3日龄攻毒组和7日龄攻毒组,每组60只,对照组于3日龄时皮下注射灭菌生理盐水0.2 mL,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组分别于3日龄和7日龄时皮下注射NGPV XZ-01株病毒液(第7代,效价为5.7 lgELD_(50)/mL)0.2 mL,攻毒后观察并记录各组的生长发育情况、临床症状、发病和死亡情况,并对喙长和体重进行测定,于25日龄时全部扑杀,进行剖检、病理切片观察和X光检查。结果表明:攻毒后,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组均生长发育迟缓或成僵鸭;24日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体型明显小于对照组,3日龄攻毒组体型明显小于7日龄攻毒组。试验期间,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组表现为精神萎靡不振、喜卧、打堆、排白色或黄白色粪便,部分患鸭出现运动障碍、瘫痪等症状;随着日龄的增长,上下喙变短及舌头外露的症状逐渐明显。其中3日龄攻毒组发病率为90.0%、死亡率为11.7%;7日龄攻毒组发病率为76.7%、死亡率为6.7%;对照组无发病和死亡情况。10~22日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体重和喙长均显著低于对照组(P<0.05),3日龄攻毒组的体重和喙长均显著低于7日龄攻毒组(P<0.05)。3日龄攻毒组和7日龄攻毒组剖检可见泄殖腔膨大,肠道内容物稀薄,肝脏均出现水肿、质脆等病变;病理切片观察可见十二指肠肠绒毛顶端上皮细胞坏死,十二指肠绒毛不同程度脱落,部分肠腺坏死;部分肝细胞出现坏死,肝窦淤血,有炎性细胞浸润;其他脏器未见明显病变。对照组未见明显异常。X光检查可见3日龄攻毒组和7日龄攻毒组下喙、翅、腿等部位明显小于对照组,且胫骨长度远低于对照组。说明NGPV XZ-01株可使半番鸭的生长发育明显受阻,具有很强的致病性,且对半番鸭的影响随感染日龄的增加而减小。

鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定及VP2蛋白的原核表达

为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白,试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本,首先通过鸭胚传代培养分离病毒,然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验,最后对VP2蛋白进行诱导表达、可溶性分析、纯化及Western-blot鉴定。结果表明:从临床病料样本中分离到1株病毒,将该毒株接种鸭胚,鸭胚的死亡时间均集中在接种后的第48~72小时之间,死亡鸭胚出现绒毛尿囊膜增厚、胚体有大量出血点、鸭喙短小等短喙侏儒综合征的典型病变特征,将分离毒株命名为SCNC01株。SCNC01株不能凝集1%鸡红细胞,在其基因组DNA中可扩增出NGPV NS1基因序列,该序列与GenBank中的NGPV NS1基因序列相似性在90.6%~98.3%之间,SCNC01株与MK000549、MN415966、JF333590、KC996729、KT598506、MW929338等NGPV毒株处于同一分支,确定该毒株为NGPV。SCNC01株的ELD_(50)为1×10^(-4.5)/0.2 mL,可引起雏鸭出现运动障碍、食欲下降、精神萎靡、喙萎缩、舌头外翻、排白色稀便等临床症状甚至死亡。经IPTG诱导NGPV VP2蛋白获得了表达,且表达形式为包涵体,经His-Tag蛋白纯化柱纯化后,出现与目的蛋白大小一致的单一条带,该蛋白能与NGPV阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。说明试验成功分离到1株鸭源NGPV,并获得了具有良好反应原性的VP2蛋白。

“短喙侏儒综合征”半番鸭病原学检测及病理组织学特征

旨在明确福建省漳州地区3个“短喙侏儒综合征”半番鸭群的病原及病理组织学特征。对患病半番鸭体质量、喙长、喙宽进行测定及统计分析，采集患病半番鸭肝、脾、胰腺组织进行病原学检测、病毒分离鉴定和基因序列测定与分析，同时采集心、肝、脾、肺、肾等10种组织进行病毒分布及病理组织学研究。结果表明，患病半番鸭喙长，体质量与同场正常未感染半番鸭相比，发病鸭体质量减少达49．00％，喙长缩短达32．00％，喙宽缩短达22．00％；经PCR或RT—PCR检测显示，所采样品禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、坦布苏病毒、鸭甲肝病毒、呼肠孤病毒、鸭圆环病毒、鸭疫里默氏菌、鸭大肠杆菌、鸭沙门菌均为阴性，均为水禽细小病毒阳性；对组织匀浆液致死的鸭胚尿囊液检测表明，分离毒株均为水禽细小病毒，经进一步基因序列分析显示所分离3株病毒与番鸭细小病毒病（MDPV）各代表株核苷酸同源性达97．7％以上，与新型MDPVSAAS—SHNH株核苷酸同源性高达98．9％。组织病毒分布检测结果显示，患病半番鸭心、肝、脾、肺、肾等10种组织均不同程度带毒，其中以胸腺、法氏囊、心、脾和胰腺病毒含量最高，肝、肺、脑、小肠次之，肾脏最低；病理组织学研究可见心肌颗粒变性，肝脏水泡变性，胸腺出血，骨骼肌出血、坏死。以上结果表明，福建省漳州地区的3个半番鸭群发生的“短喙侏儒综合征”由新型MDPV所致，且与经典的MDPV在感染宿主、临床症状、病变特征等方面存在较大差异，为新型MDPV病的诊断提供了科学依据和借鉴。

短嘴型小鹅瘟病毒的传播途径

以短嘴型小鹅瘟病毒(SB-GPV M15株)分别经消化道(口服),直接接触(同居)和呼吸道(空气传播)等途径人工感染2日龄半番鸭,测定感染后不同时间的试验鸭体质量,喙长宽值,血清LPAI抗体水平和发病死亡程度,探讨短嘴型小鹅瘟病毒不同感染途径对半番鸭致病力的影响。结果显示,口服和同居感染途径均能复制出与野外自然发病一致的症状,感染鸭的体质量和喙长宽值等指标均不同程度低于健康对照组组,且口服感染组的发病程度与感染剂量呈正相关,而呼吸道感染组的体质量和喙长宽值与健康对照组则无明显差异;试验鸭血清抗体测定显示口服和同居感染组的抗GPV LPAI抗体产生期早于空气感染组,且PI 14d抗体全部阳转而空气感染组抗体阳转率仅20%。结果表明,短嘴型小鹅瘟病毒的主要传播途径是消化道和直接接触感染,而空气传播能力则较弱。