老年人载脂蛋白E基因型与认知功能关系的研究

目的 研究老年人中载脂蛋白E(ApolipoproteinE ,ApoE)基因型的分布情况 ,分析ApoE基因型与认知功能的关系。 方法 用简易智能量表 (Mini MentalStateExamination ,MMSE)对 31 6例 60岁以上老龄人进行认知功能检查 ,根据MMSE得分将研究对象分为认知功能正常组和认知功能障碍组 ,分离其白血细胞基因组DNA ,用聚合酶链反应 (ploymerasechainreaction ,PCR)技术扩增ApoE带有多态性位点的第四外显子片段 ,根据限制性酶切片段长度多态性分析 (restrictionfragmentlengthpolymorphism ,RFLP)方法检测其基因型。结果 两组人群中ApoEε3/ 3基因型分布的百分比最大 ,其次为ApoEε3/ 4基因型 ,而ApoEε2 / 2基因型最小 ;ε2、ε3、ε4等位基因频率在认知功能障碍组和认知功能正常组分别为 :0 .0 95、0 .560、0 .345 ;0 .1 4 6、0 .699、0 .1 55。认知功能障碍组ε4携带者百分比大于对照组 (P <0 .0 1 ) ,ApoEε3/ 4基因型百分比也较认知功能正常组大 (P <0 .0 1 )。结论 老年人群中 ,ApoEε3/ 3为最常见的基因型 ,而ε2 / 2最少见 ;

118例老年人的认知功能改变与载脂蛋白E基因型的关系

目的了解认知功能正常的老年人认知功能变化与不同载脂蛋白E(APOE)基因型及血管性风险因子的关系。方法对118例认知功能正常的老年人进行随访,观察简易智能状态检查(MMSE)评分的改变和痴呆发生率与APOE基因型以及血管性风险因子的关系。结果有APOE4基因型的老人与没有APOE4基因型的老人相比,每年的MMSE评分降低速度快、冠心病的患病率高、痴呆发病率高。结论APOE4基因型不仅是痴呆的独立风险因子,也与多种血管性风险因子的作用相关。

多重引物等位特异PCR法快速检测ApoE基因型的研究

目的建立多重引物等位特异PCR方法结合内参照基因对ApoE基因型进行分析,并与PCR-RFLP法和直接测序结果进行比较.方法以基因组DNA为模板,用多重引物等位特异PCR法、PCR-RFLP检测了158例体检者的APOE基因型,典型基因型用直接测序法检测并通过GeneBank对比.结果共检测出5种常见的基因型:ε2/2(0%),ε3/3(77.2%),ε4/4(0.6%),ε3/2(13.3%),ε4/3(7.0%),ε4/2(1.9%),两种方法结果一致,测序结果与GeneBank对比一致.结论多重ASP-PCR检测ApoE基因型具有快速简便、准确可靠和经济、适用的特点,有一定的推广价值.

河南汉族人群载脂蛋白E基因型与血脂水平的关系

目的 :研究河南汉族人群中载脂蛋白E(ApoE)基因型和等位基因频率以及ApoE表型与血脂水平之间的关系。方法 :运用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法检测了 317例健康人的ApoE基因型 ,按标准酶法和免疫学方法测定血脂和载脂蛋白。结果 :研究对象的ε2 ,ε3 和ε4 等位基因频率分别为 0 0 6 8、0 86 9和0 0 6 3,与中国其他地区汉族人群比较差异无显著性。携带ε4 等位基因的个体具有较高的TC及LDL C水平。通过人种间比较发现ε4 等位基因频率在白种人群中较高。结论 :黄种人群ε4 等位基因频率较白种人低 ;

Alzheimer患者ApoE基因型与脑脊液和血浆胰岛素分析

目的 :探讨血浆和脑脊液胰岛素水平与Alzheimer病 (AD)的病情程度及载脂蛋白E(ApoE)ε4基因型之间的关系。方法 :运用聚合酶链反应 限制性长度片段多态性 (PCR RFLP)方法检测了 48例AD患者和 31例年龄相匹配的正常成人ApoE基因型 ,用放免法测定空腹血浆和脑脊液胰岛素水平。结果 :AD患者血浆胰岛素水平显著升高 ,脑脊液胰岛素水平显著下降 ,这种差别随AD的严重程度增加而加大。非ε4基因较ε4基因的AD患者血浆胰岛素水平显著升高 ,脑脊液胰岛素水平显著降低。结论 :AD患者血浆和脑脊液胰岛素水平异常 ;

自发性脑出血患者的血肿扩大CT预测征象与载脂蛋白E基因型的相关性探讨

目的 探讨自发性脑出血(ICH)患者的血肿扩大预测中载脂蛋白E(ApoE)基因型与CT征象的相关性。方法 回顾性选取2019年2月至2021年5月西安西电集团医院收治的ICH患者300例,均在发病1 d内完成CT检查,均具有完整的ApoE基因型资料。分析300例患者的CT征象与ApoE基因型,单因素、多因素Logistic回归分析CT征象与ApoE基因型的相关性。结果 300例ICH患者中,在CT征象方面,旋涡征175例,血肿不规则形状154例,血肿不均质密度123例,卫星征60例,岛征58例,混杂征35例,黑洞征33例,液平7例。在ApoE基因型方面,ε3ε3 200例,ε3ε4 50例,ε2ε3 40例,ε4ε4 5例,ε2ε4 3例,ε2ε2 2例,换算为等位基因,ε2 20例,ε3 250例,ε4 30例。发病12、18 h内CT征象黑洞征与ApoE基因型ε2+相关(P<0.05),但CT征象旋涡征、血肿不规则形状、血肿不均质密度、卫星征、岛征、混杂征、液平与ApoE基因型ε2+无关(P>0.05);CT征象旋涡征、血肿不规则形状、血肿不均质密度、卫星征、岛征、混杂征、黑洞征、液平与ApoE基因型ε4+无关(P>0.05)。发病24 h内CT征象旋涡征、血肿不规则形状、血肿不均质密度、卫星征、岛征、混杂征、黑洞征、液平与ApoE基因型ε2+无关(P>0.05);CT征象血肿不均质密度与ApoE基因型ε4+相关(P<0.05),但CT征象旋涡征、血肿不规则形状、卫星征、岛征、混杂征、黑洞征、液平与ApoE基因型ε4+无关(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,发病12、18 h内CT征象黑洞征的独立预测因素为ApoE基因型ε2(P<0.05),发病24 h内CT征象血肿不均质密度的独立预测因素为ApoE基因型ε3(P<0.05)。结论 ICH患者的血肿扩大预测中ApoE基因型ε2、ε3与CT征象相关,能够将有效依据提供给临床的诊断与治疗工作,从而有效改善患者预后。

载脂蛋白E基因型可增加儿童发生脑瘫的风险

芝加哥儿童纪念医院的Mark S.Wainwright博士及其同事于2月的《小儿科》（Pediatrics,2007；119：306-313.）杂志报告新研究结果提示，携带载脂蛋白E（APOE）e4或e2基因型的儿童发生脑瘫的风险增加。还有，携带e4等住基因似乎可增加疾病的严重性和产生小头畸形的可能。

载脂蛋白E基因型对遗忘型轻度认知障碍和阿尔茨海默病患者磁共振波谱的影响

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因型对遗忘型轻度认知障碍(aMCI)和阿尔茨海默病(AD)患者氢质子磁共振波谱(1H-MRS)的影响。方法选取2016年1月至2018年1月就诊于安徽医科大学第一附属医院神经内科的35例AD患者(AD组),35例aMCI患者(aMCI组)和36名性别和年龄相匹配的认知正常者(对照组,NC组)为研究对象,采用简易智能状态量表(MMSE)、剑桥老年认知检查表中国修订版(CAMCOG-C)等多种神经心理学量表对所有受试对象进行认知功能评价;采用高分辨率熔解曲线法分析ApoE基因型;利用1H-MRS技术,计算左侧海马和左侧额叶的N-乙酰天冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)、胆碱/肌酸(Cho/Cr)、肌醇/肌酸(MI/Cr)的比值。结果AD组和aMCI组MMSE评分[NC组29.00(2.00)分、aMCI组26.00(2.00)分、AD组13.00(9.50)分]、CAMCOG-C总分[NC组94.00 (8.50)分、aMCI组86.00(8.00)分、AD组61.00(18.0)分]及其亚分包括定向、语言、记忆、执行、计算、思维、知觉等子项目评分均显著低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AD和aMCI组中ε4等位基因携带率均显著高于对照组,且AD组中ApoE ε4等位基因携带率较aMCI组更高(均P<0.05)。ApoE ε4等位基因携带者MMSE评分[ApoE ε4等位基因携带者23.00(16.00)分、非携带者27.00 (6.00)分]及CAMCOG-C评分[ApoE ε4等位基因携带者76.00(28.00)分、非携带者89.00(17.00)分]均显著低于非携带者(均P<0.05)。MRS结果中,AD组和aMCI组左侧海马NAA/Cr比值均显著低于对照组,且AD组左侧海马NAA/Cr比值显著低于aMCI组;AD组和aMCI组左侧额叶Cho/Cr比值和MI/Cr比值显著高于对照组,且以AD组升高较aMCI更为明显(均P<0.05);ApoE ε4等位基因携带者左侧海马NAA/Cr和Cho/Cr比值均显著低于非携带者组,左侧额叶MI/Cr比值显著高于非携带者组(均P<0.05)。结论ApoE等位基因影响aMCI和AD患者MRS改变,联合ApoE基因型和MRS检测对AD及aMCI早期诊断及评估具有一定的临床价值。

ApoE基因multi-ARMS快速分型法

建立一种简单快速的ApoE基因分型法。以外周血白细胞DNA为模板，设计了4个等位基因特异性寡核苷酸引物和一个公共引物，采用等位基因特异性多重PCR技术（Multiplex Amplification Refractory Mutation System PCR, multi-ARMS PCR），检测了85例个体的6种常见ApoE基因型。6种常见ApoE基因型的频率为: ε2/2(0.012), ε3/3(0.705), ε4/4(0.012), ε3/2(0.118),ε4/3(0.141)和ε4/2(0.012).本方法简便、可靠，很有推广应用价值。

广东省2020年首次报道E基因型柯萨奇病毒B组3型的鉴定及基因特征分析

柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)是肠道病毒中流行较为广泛的血清型之一,在全球多个国家和地区曾报道儿童急性心肌炎、无菌性脑膜炎、手足口病等的暴发流行,严重威胁儿童健康和公共卫生安全。本研究对广东省2020年手足口病患者标本中分离到的8株CVB3进行基因特征和进化分析,结果显示分离到的8株CVB3 VP1区核苷酸序列相似性为98.2%~99.5%,与原型株Nancy的核苷酸序列相似性在77.9%~78.5%之间,与其他CVB3中国大陆流行株的核苷酸序列相似性为79.6%~82.2%。8株CVB3均为E基因型,为广东省首次报道。8株CVB3分离株在进化树上聚集,提示病毒发生了局部传播。全基因组序列分析提示2株广东CVB3分离株在非结构蛋白区有重组现象的发生。本研究为E基因型CVB3在我国的流行传播和疾病防控提供基础资料。

载脂蛋白Eε4基因型预测老年缺血性脑血管病复发的意义

目的探讨载脂蛋白(APO)Eε4基因型预测老年缺血性脑血管病(ICVD)复发的意义。方法收集215例ICVD患者血液标本,提取基因组DNA,采用PCR-RFLP法分析APOE基因型,并以APOEε4基因型进行分组,对比两组间的临床资料、ICVD累积复发率及脑卒中亚型,同时采用COX危险比分析法分析多种常见因素对ICVD复发的影响。结果 215例ICVD存活者中有APOEε4基因阳性者38例,占17.7%。APOEε4基因阳性组患者出现卒中前兆的比例(78.9%)明显高于阴性组患者(35.0%,P<0.01),3年随访期内的ICVD累积复发率在APOEε4基因阳性组患者中也明显高于阴性组患者(P<0.001)。COX危险比回归模型分析结果表明,APOEε4基因是ICVD复发风险的一个重要的预测因子(危险比为4.11,95%可信区间:1.49~11.32)。结论 APOEε4基因型与ICVD的复发有明显的相关性,可以作为一个评估ICVD患者预后尤其是复发风险的一个预测因素。

载脂蛋白E基因型对不同类型卒中转归的影响

急性缺血性卒中和啮齿动物脑外伤模型实验提示,载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE）基因型能影响脑损伤后神经元修复、于生和存活。临床研究证实，ApoE ε4等位基因与脑外伤后转归不良有关。因此，ApoE基因型也可能会影响人类急性卒中后的临床转归。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

载脂蛋白E基因型与铜代谢异常相关的帕金森病研究进展

帕金森病（Parkinson＇s disease，PD）是一种以运动障碍为主要表现的中枢神经系统退行性疾病，病理损害机制不明，可能与环境因素和基因变异共同作用有关。由于基底节铁代谢异常和沉积与PD发病有关，而铜蓝蛋白具有将二价铁离子氧化成三价铁离子的铁氧化酶活性，与脑内铁代谢密切相关。

细胞色素P450 2E1 RsaⅠ基因型、生活习惯因素及其相互作用与胃癌

[目的]研究CYP2E1RsaⅠ基因型、生活习惯因素相互作用与胃癌易感性的关系。[方法]在消化道癌高发区淮安市进行了病例对照研究(胃癌145例,人群对照229例),调查研究对象的烟酒茶嗜好及饮食习惯,以PCR扩增、RsaⅠ内切酶消化,分析研究对象的CYP2E1的基因型。[结果]胃癌组与对照组的CYP2E1RsaⅠc1/c2或c2/c2基因型频率无显著差异(41.4%∶38.9%)。吸烟和常吃腌菜与CYP2E1c1/c2或c2/c2基因型在增加胃癌发生的危险性中有相乘效应。饮酒和不饮茶的习惯增加胃癌发生的危险性,但饮酒或不饮茶的这种作用不受CYP2E1基因型的影响。[结论]CYP2E1RsaⅠ基因多态与吸烟及常吃腌菜之间的基因—环境交互作用影响个体对胃癌的易感性。

抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响

目的研究抗HPV16E6核酶(Ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R和CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达;细胞生长曲线检测细胞生长的改变;TRAP-Elisa法检测端粒酶活性。结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P和CaSKi明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P和CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi,CaSKi-P和CaSKi-R三种细胞的端粒酶活性分别为0.89±0.14,0.90±0.11,0.36±0.06,转染了抗HPV16E6核酶的CaSKi-R的端粒酶活性的抑制率为59.55%。经统计学处理,CaSKi-R的端粒酶活性较CaSKi和CaSKi-P细胞明显下降(P<0.01)。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,端粒酶活性较前明显下降。

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的DNA改组

目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮普通PCR扩增。结果电泳切胶回收获得与原片段大小相当的基因片段,改组结果较为成功。结论DNA改组在HPV16E7改组中的应用并成功,有利于从HPV16E7基因突变题库中筛选出高免疫原性的基因型别,并为进一步构建HPV治疗性疫苗奠定基础。

转染人乳头瘤病毒16型E6E7重组基因及感染模型细胞建立

To investigate the functions of HPV-16 E6E7 protein in the development of cervical cancer,a recombinant plasmid pEGFP-HPV16E6E7,containing green fluorescent protein and HPV-16 E6E7 proteins was constructed and was transfected into HPV-negative cell line C33A mediated by liposome.The efficiency of tranfection was determined by inverted fluorescent microscope and the expression of E6E7 was detected by Western blot.It showed that transfection of C33A cell and Caski cell by HPV-16 E6E7 gene established a pair of transfected cell types to study the carcinogenesis of E6 and E7 proteins.