应用分子伴侣探索e23sFv/His融合蛋白的可溶性表达

目的探讨利用分子伴侣实现e23sFv/His融合蛋白可溶性表达的可行性。方法将分子伴侣质粒pGro7、pKJE7与e23sFv原核表达载体共转化BL21(DE3)感受态细胞。16℃诱导融合蛋白可溶性表达,比较可溶性表达产物相对于常规包涵体不溶形式表达产物在产量和抗原结合活性方面的差异。结果可溶性表达的e23sFv/His产量较小,纯化得率低,其抗原结合活性没有明显优于包涵体表达纯化产物。结论应用pGro7、pKJE7有助于e23sFv/His融合蛋白的可溶性表达,但其表达和纯化得率较低。

免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性杀伤HER2阳性SGC-7901胃癌细胞

目的构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性。方法把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉毒素弗林蛋白酶识别位点(fdt)、caspase-6以及免疫球蛋白Ig G Fc段基因重组,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,命名为pc DNA3.1(+)-AFC。瞬时转染CHO-S细胞,Western blot法检测上清中目的蛋白的表达;收集培养上清并利用蛋白A纯化柱对目的蛋白进行纯化;流式细胞术验证目的蛋白对HER2阳性SGC-7901细胞的杀伤作用。结果成功构建pc DNA3.1(+)-AFR真核表达载体;瞬时转染悬浮CHO-S细胞后,Western blot法证实目的蛋白可分泌性表达于细胞培养上清中,流式细胞术结果显示纯化后的目的蛋白可以显著促进HER2阳性SGC-7901细胞凋亡。结论真核细胞表达的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性高效杀伤HER2阳性SGC-7901细胞。