棉花腺体形成时均一化cDNA文库的构建

为克隆筛选棉花腺体形成相关的基因,运用SMART技术构建cDNA文库.首先抽提棉花腺体形成时期的mRNA,mRNA逆转录后合成cDNA,经均一化处理后,SfiⅠ酶切,连接质粒载体,电转化,成功构建了棉花腺体形成时期的cDNA文库.经鉴定原始文库滴度为5.8×105cfu/mL,其重组率高达94%,插入片段的平均长度约为1.4 kb.

应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库

目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选 ,随机挑取 10 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果 :扩增消减cDNA文库获得 3 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取10 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,90 %的克隆中均有 2 0 0～ 60 0bp的插入片段 ,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论 :用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选。

SEREX方法筛选人胎盘抗原

目的筛选并获得来自人胎盘有潜在应用价值的抗原。方法基于血清学筛选重组cDNA表达文库(serological analysis of recombinant cDNA expression library,SEREX)技术,制备人绒毛组织免疫的兔血清,利用该免疫血清筛选人胎盘组织cDNA表达文库,通过两轮筛选得到免疫反应阳性的单克隆重组噬菌体并测序,并对所得到的序列进行生物信息学分析。结果经过两轮筛选共得到69个阳性反应克隆,序列分析发现它们代表12种不同的基因序列,其中功能已知基因9个,功能未知基因3个,进一步分析发现绒毛膜生长催乳激素基因(CSH1和CSH2)有57个阳性反应克隆,占总数的82.6%,可能是一个具有重要功能的抗原基因,所筛选到的其他基因与胚胎生长发育相关。结论SEREX技术筛选胎盘抗原是行之有效的,本实验筛选出的抗原基因对研究胚胎生长发育具有一定的意义。