透明细胞肾细胞癌组织及四种不同肾细胞癌细胞株中EIF3B的表达及意义

目的 探讨透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)组织及4种不同肾细胞癌细胞株中EIF3B的表达及意义。方法 利用UALCAN在线网站分析TCGA数据库、CPTAC数据库中正常肾组织和原发性ccRCC中EIF3B mRNA和蛋白的表达差异及与ccRCC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier Plotter分析EIF3B mRNA表达与ccRCC患者预后的关系;单因素和多因素Cox回归分析EIF3B表达水平、临床病理特征与ccRCC患者预后的相关性;应用HPA数据库观察EIF3B蛋白在ccRCC中的表达;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测EIF3B mRNA和蛋白在正常肾小管上皮细胞和4种不同肾细胞癌细胞株中的表达。结果 与正常肾组织相比,EIF3B mRNA和蛋白在ccRCC组织中的表达增高(P<0.001),且在患者性别、年龄、AJCC分期、ISUP分级、淋巴结转移及mTOR通路分子改变亚组中的表达差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter分析结果显示,EIF3B mRNA高表达组ccRCC患者的总体生存率低于低表达组(P<0.001);多因素Cox回归分析显示,AJCC分期、ISUP分级、远处转移及EIF3B表达是影响ccRCC患者预后的独立危险因素(P<0.05);HPA数据库证实EIF3B蛋白在ccRCC组织中高表达;实时灾光定量PCR和Western blot检测结果显示:EIF3B mRNA和蛋白在4种不同肾细胞癌细胞株中均高表达,尤其在ccRCC细胞(Caki-2和786-O)中表达水平更高(P<0.001)。结论 EIF3B在ccRCC组织及细胞株中均高表达,且与ccRCC患者预后相关,可能成为ccRCC新的预后指标及治疗靶点。

siRNA介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siRNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组(转染eIF3b-siRNA组)。应用qRT-PCR和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白表达水平;运用Matrigel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组(1.09±0.19)、II组(1.05±0.17)相比,III组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P<0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P<0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。

沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法合成eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA),转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:Con-trol组(空白对照组)、Scramble组(转染非特异性对照组)和eIF3b-siRNA组(转染eIF3b-siRNA组).转染实验过程严格按操作说明书进行转染,其中eIF3b-siRNA组加入20 nmol/L转染eIF3b-siRNA,而Scramble组加入20 nmol/L Scramble RNA,Control组不作任何处理,转染24 h后收集细胞.应用qRT-PCR和Western blot免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白以及钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平;CCK-8法检测转染前后细胞增殖抑制率;运用Matri-gel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测转染前后MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化.结果RT-PCR结果显示eIF3b-siRNA组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于Control组(1.08±0.18)和Scramble组(1.12±0.16),差异有统计学意义(P<0.05).Western印迹法结果显示:与Control组(1.09±0.19)、Scram-ble组(1.05±0.17)相比,eIF3b-siRNA组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).在不同培养时间点上比较,eIF3b-siRNA组细胞增殖抑制率均明显高于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05).细胞迁移和侵袭实验中,eIF3b-siRNA组迁移和侵袭的细胞数均明显少于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05),而Control组与Scramble组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05).与Control组和Scramble组比较,eIF3b-siRNA组vimentin(0.26±0.02)、MMP-2(0.23±0.02)和MMP-9(0.46±0.03)表达水平明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05),而E-cadherin(1.32±0.19)表达水平明显增强.结论下调eIF3b表达可有效地减弱乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力,可能与阻碍乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程和促进MMP-2和MMP-9的分泌有关.

eIF3b在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的:探讨真核细胞翻译起始因子3的亚基b(eIF3b)基因在三阴性乳腺癌(TNBC)增殖和侵袭中的作用。方法:采用免疫组化法检测50例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒8(CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹(Western blot)法分别检测RNA干扰(RNAi)前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果:50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01),与Ki-67表达、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关(P>0.05)。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:eIF3b在TNBC组织中高表达;eIF3b基因沉默可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与阻断Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞周期有关。

非小细胞肺癌组织驱动蛋白超家族成员2A、真核起始因子3b的mRNA表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中驱动蛋白超家族成员2A(KIF2A)、真核起始因子3b(eIF3b)mRNA表达与病人临床病理特征及预后的关系。方法收集NSCLC病人组织样本,检测KIF2A、eIF3b mRNA表达并分析其与病人临床病理特征的关系,Pearson法分析癌组织KIF2A与eIF3b mRNA表达的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析KIF2A、eIF3b mRNA表达与病人预后的关系,Cox回归模型分析病人的预后影响因素。结果NSCLC癌组织中,KIF2A mRNA、eIF3b mRNA相对表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05);KIF2A mRNA表达与分化程度、淋巴结转移及临床分期相关,eIF3b mRNA表达与肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期相关(P<0.05)。Pearson法分析结果显示,NSCLC癌组织KIF2A mRNA与eIF3b mRNA表达呈正相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,KIF2A高表达组、eIF3b高表达组的预后较差(P<0.05)。Cox回归模型分析结果显示,临床分期为Ⅲ期、KIF2A mRNA高表达、eIF3b mRNA高表达是病人预后的独立危险因素(P<0.05)。结论NSCLC癌组织中KIF2A mRNA、eIF3b mRNA高表达,两者均参与NSCLC发生发展,有望成为疾病进展及预后评估的新的生物学靶点。

Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B的表达促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B(EIF3B)的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖的作用。方法:用荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NSCLC细胞中Circ-WHSC1表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测敲低Circ-WHSC1对NSCLC细胞增殖的影响。通过生物信息学预测、双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验研究miR-95-3p与Circ-WHSC1,EIF3B之间的靶向关系。结果:Circ-WHSC1在NSCLC细胞系中的表达显著高于正常肺上皮细胞;敲低Circ-WHSC1显著降低了NSCLC细胞的增殖活力,而转染miR-95-3p过度表达可逆转此作用;miR-95-3p是Circ-WHSC1的下游靶点,可以被Circ-WHSC1吸附;EIF3B是miR-95-3p的靶基因,可以被Circ-WHSC1间接正向调控。结论:Circ-WHSC1通过靶向调控miR-95-3p/EIF3B轴促进NSCLC细胞的增殖。

结肠癌组织中真核细胞起始因子3b的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中真核细胞起始因子3b(eIF3b)的表达及其临床意义。方法选择2016年11月~2018年11月东莞市石碣医院和暨南大学附属一院的手术切除结肠癌组织标本45例为研究组,正常结肠黏膜组织标本40例为对照组,采用免疫组织化学Envision二步法检测两组eIF3b蛋白的表达情况,并分析其与结肠癌恶性分子生物学行为的关系。结果研究组中eIF3b蛋白阳性表达率为84.44%(38/45),对照组中仅有6例出现弱阳性表达,阳性表达率为15.00%(6/40),研究组eIF3b蛋白阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(χ^2=40.901,P<0.05);eIF3b蛋白在结肠癌组织中的表达均与淋巴结转移、TNM分期及浸润深度密切相关(χ^2=8.101、6.430、10.361,P<0.05),而与其他指标年龄、性别、肿瘤大小及组织学分化程度无关。结论eIF3b表达异常增高可能调控了结肠癌发生作用机制,在结肠癌转移和侵袭过程中起重要的促进作用。

未折叠蛋白反应通路持续过度激活在白质消融性白质脑病发病中的作用

目的 探讨EIF2B3突变的少突胶质细胞是否存在对内质网应激（ERS）的不耐受,检测未折叠蛋白反应（UPR）通路的变化,为了解白质消融性白质脑病（VWM）的发病机制提供线索.方法 本研究利用转染EIF2B3野生型或突变型c.1037T＞C全长cDNA慢病毒载体的人类少突胶质细胞系,Thapsigargin对其进行ERS诱导后,通过细胞增殖-毒性检测试剂盒实验反映细胞增殖活力,检测凋亡相关分子Caspase-3剪切体的表达反映细胞凋亡水平,来验证野生与突变细胞对ERS的耐受性,并比较二者在基础状态及ERS诱导后不同时间点UPR激酶样内质网激酶（UPR-PERK）通路各分子指标的变化.结果 1.EIF2B3突变型少突胶质细胞对ERS不耐受,表现为ERS刺激后凋亡的增加和活力的显著下降.2.EIF2B3突变型少突胶质细胞存在UPR通路的过度激活.3.基础状态下UPR-PERK通路分子磷酸化α亚基的真核翻译起始因子2（P-eIF2α）、激活转录因子4、CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）和生长抑制DNA损伤基因34（GADD34）的水平不同程度高于野生组.4.ERS刺激24h后,凋亡相关的UPR分子（CHOP和GADD34）和抑制蛋白翻译的P-eIF2α在野生型细胞中表达下降,而在突变细胞中持续高表达.结论 EIF2B3突变的人少突胶质细胞对ERS不耐受,这种不耐受与突变细胞存在UPR-PERK通路的过度持续激活,引起凋亡性的细胞死亡相关.减轻突变细胞的内质网负荷或稳定UPR的过度激活有望对疾病进展起到干预作用.

真核翻译起始因子2B3在肝细胞癌组织的表达及其临床意义

目的探讨真核翻译起始因子2B3(EIF2B3)基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测30例新鲜HCC标本中EIF2B3 mRNA相对表达含量。采用免疫组织化学过氧化物酶标记的链酶卵白素(SP)法检测76例石蜡HCC标本EIF2B3表达,探讨其与HCC临床病理学资料及预后的关系。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织比较,在肝癌组织EIF2B3 mRNA表达下调。76例HCC中,EIF2B3在癌组织的阳性表达率和癌旁组织中的阳性表达率分别为25.0%和82.0%(t=6.530,P<0.05)。EIF2B3蛋白与肿瘤结节数目等临床病理特征密切相关。EIF2B3蛋白低表达组的HCC患者总体生存率与无瘤生存率明显低于EIF2B3高表达组的患者(Log-rankχ^(2)=10.325,P<0.001)。结论EIF2B3在HCC中发挥抑癌基因的作用,且对抑制HCC的复发转移有重要作用。