烟草种质资源抗马铃薯Y病毒病基因型鉴定

【背景和目的】从作物种质资源中进行等位基因鉴定,特别是优异等位基因的发掘和应用,是使种质资源加速转变为基因资源的关键所在。【方法】采用苗期汁液摩擦接种的方法,对烟草种质资源的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)抗病性进行鉴定;通过烟草隐性抗PVY基因eIF4E1(又称为感PVY基因eIF4E1)等位性测验、等位基因分子标记检测和RT-PCR扩增测序,对PVY抗病资源进行基因型分析。【结果】(1)从收集到的900多份来自国内外的烟草种质资源中筛选出19份高抗PVY资源。(2)根据等位性测验结果推断19份抗源所具有的PVY抗性均由eIF4E1基因所控制。(3)等位基因分子标记检测和RT-PCR扩增测序结果将19份抗源的eIF4E1基因区分为4种突变类型。【结论】本研究结果丰富了我国对抗PVY烟草种质资源的筛选和利用的内容,为后续烟草PVY抗性优异等位基因的发掘和育种利用提供了基础材料和信息支撑。

鼻咽癌组织p-eIF4E和p-4EBP1高表达与预后不良正相关

目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达与NPC临床病理特征及预后的相关性。结果 NPC组织中存在p-eIF4E和p-4EBP1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为74.2%(233/314)、72.9%(229/314);p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达在淋巴结转移NPC组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移NPC组织,但与性别、年龄、临床分期和组织类型无关;NPC组织中p-eIF4E与p-4EBP1蛋白表达呈正相关,且p-eIF4E和p-4EBP1蛋白阳性的NPC患者生存时间明显短于p-eIF4E和p-4EBP1阴性患者,是NPC判断预后的独立因素。结论 p-eIF4E和p-4EBP1蛋白过表达可能与NPC的发生、发展及不良预后密切相关,p-eIF4E和p-4EBP1有望成为NPC临床诊治和判断预后的分子标志物。

双向等位基因特异性PCR技术在烟草SNP分型中的应用

为提高抗PVY烟草品种的分子育种效率,本研究针对抗病种质资源半坤村晒烟中隐性抗病基因eIF4E1的SNP位点G149C建立一种简单快速的双向等位基因特异性PCR(Bi-directional PCR amplification of specific alleles,Bi-PASA)检测方法,并对该检测方法的特异性、准确度及实际应用效果进行验证。结果表明,建立的Bi-PASA检测方法能够在一个PCR反应中有效区分eIF4E1基因G149C位点3种基因型:野生型GG、杂合突变型GC、纯合突变型CC。利用Bi-PASA检测方法可以对K326×半坤村晒烟F2分离群体的基因型进行有效鉴别,且鉴定结果与普通的等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)以及直接测序法的鉴定结果一致。综上所述,本研究建立的Bi-PASA检测方法特异性强、准确度高、操作简便,可更好地应用于eIF4E1基因的分子标记辅助育种。

PP242通过下调Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路与柔红霉素存在协同抗急性白血病作用

目的通过研究PP242单药及与柔红霉素(DNR)联合抗急性白血病的效应及作用机制,探寻急性白血病治疗的新方法。方法以NB4、THP-1、SUP-B15三种急性白血病细胞株为研究模型,采用MTT药物敏感试验检测PP242、DNR单药及两药联合的抗细胞增殖作用;Western Blot方法分析药物对Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路关键点蛋白磷酸化的表达水平的影响;7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法分析药物对eIF4F翻译起始复合物中4EBP1、eIF4E、eIF4G表达的影响;流式细胞学检测PP242的促凋亡作用。结果 (1)MTT显示PP242、DNR单药对急性白血病细胞株均有显著的抗细胞增殖作用,而100 nmol/L的PP242与DNR联合使IC_(50)下降明显,计算协同指数均小于1,表明两药存在协同作用。(2)Western Blot显示PP242可有效下调Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E轴的关键磷酸化蛋白及Mcl-1表达,而DNR却反馈上调这个通路的蛋白表达,PP242可协同DNR下调这条通路表达。(3)7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法显示PP242可增加eIF4E与4EBP1的结合,减少与eIF4G的结合,从而抑制eIF4F的形成,而DNR单药并没有这个作用。(4)流式细胞学显示PP242可促进细胞凋亡发生。结论 PP242单药可抑制三种急性白血病细胞株的增殖,具有明显的抗急性白血病作用,分析其可能作用机制为:通过抑制Akt/mTOR/4EBP1/e IF4E信号通路活性,抑制eIF4F翻译起始复合物形成以及促进细胞凋亡的发生。PP242与DNR联合有协同抗急性白血病作用。

病毒唑对白血病的治疗机制研究

为了探索治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的新方法,研究了病毒唑单药及与伊马替尼联合治疗CML的效果及机制。结果显示,病毒唑、伊马替尼单药均可以抑制K562细胞株增殖,2种药对K562细胞株的IC50值分别为92.2、0.145μmol/L,与20μmol/L的病毒唑联合使伊马替尼的IC50值下降至0.077μmol/L;病毒唑单药可以下调K562细胞株和CML患者原代细胞mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路关键蛋白mTOR、4EBP1、eIF4E的磷酸化水平,与伊马替尼联合,上述信号通路关键蛋白的磷酸化水平下调更明显;病毒唑单药可增加K562细胞株中eIF4E与4EBP1的结合,减少与eIF4G的结合,抑制eIF4F翻译起始复合物的形成,与伊马替尼联合后上述作用更强,表现出协同抑制eIF4F组装的作用。这些体外实验提示病毒唑单药具有抗白血病作用,而且能增强伊马替尼的抗CML作用。