小麦蛋白翻译起始因子5A基因(eIF5A)的克隆与分析

真核生物的翻译起始因子5A（eIF5A）是调控生物生长发育、衰老及环境适应等的重要因子。利用设计的小麦蛋白翻译起始因子5A基因的引物对小麦“中国春”基因组DNA和cDNA进行PCR扩增，并将扩增的特异片段回收、克隆和测序，从基因组DNA中得到长度分别为1679bp、1910bp两条带，从cDNA扩增得到1条636bp带，分别命名为eIF5a1（基因登录号：DQ167202）、eIF5a2（基因登录号：DQ167201）和eIF5a3。利用GeneRace方法得到eIF5a3（基因登录号：DQ167203）的全长为768bp。序列分析表明，eIF5a1、eIF5a2．具82．3％相似性，都形成636bp的转录产物，转录产物仅6个核苷酸差异。将eIF5a1、eIF5a2．和eIF5a3这3个序列的预测氨基酸序列进行比对，发现仅有1—2个氨基酸的差异，证实它们为eIF5A基因家族的成员。进化分析表明它们与报道的玉米、水稻、西红柿、烟草的eIF5A基因序列的遗传关系最近。进一步研究表明eIF5a2位于2B染色体上，并用半定量RT-PCR研究了小麦eIF5A基因的表达情况。

pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达

目的:摸索真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A)编码基因的合成、pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达。方法:用PCR合成eIF5A基因,将基因分别接在克隆载体pMD 18-T的EcoRⅤ多克隆位点上和真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ的多克隆位点之间,构建eIF5A基因的克隆载体和真核表达载体,分别在大肠杆菌E.coliDH5α中转化并提取质粒,将真核表达载体pcDNA3.1/eIF5A的质粒提取后,用脂质体包合并转染真核细胞CCRF-CEM,用流式细胞仪对eIF5A的表达水平进行检测。结果:eIF5A在CCRF-CEM细胞中的表达水平为107.03,eIF5A在转染细胞CCRF-CEM/trans中的表达水平为114.27,表达升高。结论:本实验构建了pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体,发现其在CCRF-CEM细胞中高表达。本实验结果将有助于探讨肿瘤治疗过程中的新靶标。

白花柽柳微小染色体维系蛋白3(TaMCM3)特异性识别W-box元件

真核生物翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)是一个普遍存在于真核生物中高度保守的蛋白,参与多种生命活动。通过对已克隆得到的一个柽柳eIF5A基因(TaeIF5A1)启动子分析发现,其-622～-627 bp区域存在W-box"CTGACT"元件,利用酵母单杂交技术筛选柽柳cDNA文库获得一个能够识别W-box的微小染色体维系蛋白3(minichromosome maintenance 3,MCM3),命名为TaMCM3。进一步利用酵母单杂交验证发现,将W-box的核心序列"TGAC"中的"A"突变成"G"或者将"G"突变成"A",TaMCM则不能识别这些序列,说明TaMCM3对W-box的识别具有特异性。TaMCM能够结合含有W-box元件的TaeIF5A1启动子片段,但当W-box序列突变后则不能识别,说明TaMCM是通过与W-box相结合来与TaeIF5A1启动子相互作用的。研究表明,TaMCM能够特异性地识别W-box,并可能具有转录因子的功能。

真核生物翻译起始因子5A的结构与功能研究进展

真核生物翻译起始因子5A(eIF5A)是公认的维持细胞活性必不可少的翻译起始因子,其序列从古细菌到哺乳动物都是高度保守的。eIF5A是唯一的发生依赖多胺精胺翻译后修饰[生物学上称为羟腐胺赖氨酸作用(hy-pusination)过程]的真核生物细胞内蛋白质。本文主要着眼于eIF5A的结构特征和生物学功能,综述了eIF5A和hypusination在各种组织中控制细胞循环和凋亡的过程及eIF5A最新的研究结果。