湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者创面愈合及PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的分析湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者创面愈合及PI3K/Akt/eNOS通路的影响。方法分析2022年3月到2023年7月在宜宾市第二人民医院就诊的116例老年烧伤整形术后患者,按照随机数字法分为干预组(n=58)和对照组(n=58),两组患者均采用生理盐水进行创面清洗,对照组在生理盐水清创的基础上给予凡士林油纱治疗,干预组在对照组的基础上加用湿润烧伤膏治疗。采用酶联免疫吸附法检测EGF、bFGF水平,并采用免疫印迹法检测PI3K、Akt、eNOS蛋白表达水平,比较两组患者临床疗效、创面愈合(创面愈合时间、创面愈合率、肉芽生长面积),并比较两组治疗前后疼痛指数(VAS评分)、肉芽组织PI3K/Akt/eNOS通路(PI3K、Akt、eNOS)蛋白水平表达和EGF、bFGF水平。结果干预组的临床疗效、创面愈合率、肉芽生长面积均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而创面愈合时间少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者肉芽组织PI3K、Akt、eNOS蛋白、EGF、bFGF的水平均比治疗前升高,且干预组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的VAS评分均低于治疗前,且干预组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者的创面愈合效果较好,且能有效缓解疼痛,提高EGF、bFGF水平,可能是与调节PI3K/Akt/eNOS通路有关。

基于CRISPR/Cas9技术建立Lepr与eNos双基因敲除的糖尿病肾病小鼠模型

目的基于CRISPR/Cas9基因编辑技术建立瘦素受体基因(leptin receptor,Lepr)与血管内皮一氧化氮合酶基因(endothelial nitric oxide synthase,eNos)双基因敲除(double-knockout,DKO)小鼠模型,构建晚期糖尿病肾病小鼠模型。方法根据eNos基因制备对应的gRNA,将CRISPR-Cas9体系显微注射于C57BL/Ks(BKS)背景小鼠的受精卵内。将受精卵转移至有假孕状态雌性小鼠的输卵管内部。幼鼠出生后经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定及测序分析分选出为eNos^(+/-)基因型的F0代阳性小鼠,获得BKS背景下的Lepr基因杂合小鼠,即基因型为Lepr^(db/m)的Lepr-F0代杂合子小鼠。将eNos-F0与Lepr-F0代小鼠杂交,获得eNos^(+/-)/Lepr^(db/m)双杂合F1代小鼠,将双杂合F1代小鼠进一步交配,筛选得到Lepr与eNos双基因敲除小鼠。采用PCR法鉴定小鼠基因型,按基因鉴定结果分为野生型(wild-type,WT)组与DKO组小鼠。监测各组小鼠体质量、血糖与饮水进食量;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠尿白蛋白与尿肌酐水平,并计算尿白蛋白排泄率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)与过碘酸六胺银(periodic acid-silver metheramine,PASM)染色检查各组小鼠肾组织病理改变。结果PCR检测结果显示,成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠。与同窝对照组相比,DKO小鼠的体质量、血糖水平与饮水进食量均显著高于同窝对照小鼠。DKO小鼠的尿白蛋白与尿白蛋白排泄率显著高于WT小鼠。病理学结果显示,DKO小鼠的肾小球体积明显增大,系膜基质增生明显。结论基于CRISPR/Cas9基因编辑技术可成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠,DKO小鼠可反映糖尿病肾病的典型表现,为深入研究糖尿病肾病的作用机制提供动物模型。

替格瑞洛通过akt/AMPK/eNOS信号通路调节AMI后小鼠血管新生及其机制研究

目的 探究替格瑞洛通过akt/AMPK/eNOS通路调节腺苷浓度,进而促进急性心肌梗死(AMI)后血管新生的作用,并探讨其潜在机制。方法 采用冠脉结扎法建立AMI的小鼠模型,使用替格瑞洛灌胃处理建立实验组,通过akt抑制剂Perifosine、AMPK抑制剂Dorsomorphin和腺苷受体抑制剂MRS1523建立对应蛋白抑制的模型,采用HE染色、Masson染色评估心肌损害情况,采用免疫组化、rt-PCR、Western blot检测VEGF蛋白水平和mRNA水平表达情况,采用酶标法检测AMI小鼠体内腺苷表达情况,随后采用Western blot检测akt/AMPK/eNOS通路蛋白及其磷酸化形式的表达情况。结果 替格瑞洛可明显上调p-akt/akt和p-eNOS/eNOS比值,下降p-AMPK/AMPK比值,并增加AMI后小鼠体内腺苷水平,进而促进心肌梗死后局部心肌细胞内VEGF蛋白水平和mRNA水平表达。结论 替格瑞洛可通过活化akt/AMPK/eNOS系统来调节AMI后小鼠体内腺苷浓度,进而促进局部心肌细胞内VEGF蛋白水平和mRNA水平表达。

健胃消胀片通过调节PI3K-Akt-eNOS通路改善大鼠胃癌前病变

【目的】探讨健胃消胀片对大鼠胃癌前病变的治疗作用及机制。【方法】将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、叶酸组和健胃消胀片组,每组10只。除正常组,其他3组大鼠采用雷尼替丁水溶液灌胃联合N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液饮用法制备胃癌前病变模型。成功造模后,相应给药治疗7周。记录造模及给药期间大鼠体质量变化,观察胃部大体观并进行病理评分,测定脾脏、肝脏系数,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胃组织病理形态变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、胰高血糖素(GC)含量,阿利新蓝-过碘酸雪夫氏(AB-PAS)染色法观察胃组织黏膜层厚度,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胃组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,免疫荧光染色法检测胃组织血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)蛋白的表达。【结果】与正常组比较,模型组大鼠实验期间体质量增长慢,胃部大体观病理评分显著升高(P<0.01),脾脏系数和肝脏系数显著降低(P<0.01),胃组织出现杯状细胞增生、肠化生现象,胃组织炎症评分显著升高(P<0.01),血清GAS含量显著升高(P<0.01),MTL、GC含量显著降低(P<0.05),胃组织黏膜层厚度显著减小(P<0.05),PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS蛋白表达水平降低(P<0.01),VEGFA蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,健胃消胀片组和叶酸组上述指标均得到明显改善(P<0.05或P<0.01),其中,在胃组织杯状细胞增生、肠化生现象,血清GAS含量,胃组织黏膜层厚度方面,健胃消胀片组改善效果更优。【结论】健胃消胀片可改善大鼠胃癌前病变,其机制可能与激活PI3K-Akt-eNOS通路进而促进胃损伤组织的血管生成和修复能力有关。

慢性氟中毒环境对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织VEGF和eNOS表达的影响

目的:通过观察慢性氟中毒大鼠牙移动过程中牙周组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达变化,初步探究机体慢性氟中毒状态对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织血管生成的影响。方法:选取3周龄SPF级SD大鼠120只,体重(60±5)g,随机分为空白组(C)、染氟组(F)、正畸组(O)、染氟正畸组(FO),每组雌雄各15只,根据正畸加力时间分为0、3、7、14、28 d组,共5个时间亚组。分别相应时间点处死各组大鼠,苏木精-伊红染色观察牙周组织血管情况,免疫组织化学染色观察大鼠牙周组织VEGF及eNOS蛋白表达情况。结果:(1)慢性氟中毒大鼠及正畸牙移动大鼠模型复制成功;(2)O组牙周纤维排列较C组紊乱,牙周血管数量增多,管腔不规则。FO组血管新生分布不及O组突出。(3)各组雌雄大鼠间VEGF、eNOS表达无明显性别差异,O组、FO组张力侧VEGF、eNOS表达与压力侧相比无明显统计学差异。(4)FO组VEGF、eNOS的蛋白平均表达水平高于F组,但低于O组,且差异有统计学意义。(5)O组、FO组VEGF、eNOS蛋白表达随时间延长呈先升高后降低趋势,第3天表现为峰值。结论:慢性氟中毒会抑制大鼠牙移动过程中牙周组织VEGF、eNOS的表达。

人胚胎干细胞衍生的神经干细胞微囊泡通过调节AKT/eNOS信号通路促进坐骨神经损伤大鼠坐骨神经再生和修复

目的探讨人胚胎干细胞衍生的神经干细胞微囊泡(hESC-NSC-MVs)通过调节蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路促进坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经再生和修复的作用。方法取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、hESC-NSC组、hESC-NSC-MVs组、hESC-NSC-MVs+CCT128930(AKT抑制剂)组,每组10只,模型组和实验干预组大鼠建立SNI模型,以hESC-NSC、hESC-NSC-MVs和CCT128930分组干预后,以坐骨神经功能指数(SFI)评测各组大鼠坐骨神经功能;检测各组大鼠坐骨神经传导速度、支配的腓肠肌恢复情况(以腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积评测);透射电子显微镜(TEM)检测各组大鼠坐骨神经超微结构;试剂盒测定各组大鼠血清与坐骨神经eNOS和一氧化氮(NO)水平;免疫印迹实验检测各组大鼠坐骨神经AKT/eNOS信号通路相关蛋白表达。结果假手术组相比,模型组大鼠坐骨神经超微结构发生显著损伤,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,hESC-NSC组、hESC-NSC-MVs组大鼠坐骨神经超微结构损伤均减轻,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达均升高,且hESC-NSC-MVs对SNI大鼠上述各指标的作用更强(P<0.05);与hESC-NSC-MVs组相比,hESC-NSC-MVs+CCT128930组大鼠坐骨神经超微结构损伤加重,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达降低(P<0.05)。结论hESC-NSC-MVs可通过激活AKT/eNOS信号通路而减轻SNI大鼠坐骨神经超微结构及功能损伤,促使坐骨神经再生和修复,并改善其坐骨神经功能。

小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。

枸杞多糖通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路对去卵巢大鼠心肌产生抗氧化作用

目的:观察枸杞多糖对去卵巢大鼠心肌PI3K/Akt/e NOS信号通路的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组,ELISA法比较各组血清雌激素、LDH及CK水平,检测心肌H_2S含量及氧化应激损伤相关指标,HE染色观察各组心肌的形态变化,Western blot法检测各组大鼠心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果:与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清雌二醇水平降低,心肌H_2S含量和GSH-Px活性下降,心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达均有所降低,心肌ROS活性和MDA含量升高(P<0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增大,血清LDH和CK活性均增多;与去卵巢组比较,枸杞多糖高剂量组大鼠血清雌二醇含量增加(P<0.05),心肌H_2S含量、GSH-Px活性、e NOS蛋白及Akt磷酸化水平均提高,心肌ROS活性和MDA含量下降(P<0.05),血清LDH和CK活性均降低,并且改善大鼠心肌形态的变化。结论:枸杞多糖可以通过调控PI3K/Akt/e NOS通路改善去卵巢大鼠心脏变化防治绝经后心血管病变。

eNOS:糖尿病内皮祖细胞功能失调的一个关键因素

糖尿病是由多种病因引起的,以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合征。糖尿病患者内皮祖细胞(EPCs)数目减少,动员、迁移、归巢、分化能力明显降低,这可能是引起糖尿病大血管并发症的主要原因之一。内皮型NO合酶(eNOS)是调节内皮祖细胞功能的关键酶。该文就eNOS与糖尿病内皮祖细胞功能失调的相关性进行综述,为糖尿病治疗提供新的思路。

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响

目的探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响。方法采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。缺血2 h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7 d 3个时间点。取双侧"合谷"穴(LI 4)为电针刺激穴位。免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;反转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS、MMP-9蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,电针组各时间点eNOS蛋白及mRNA明显增加(P<0.01)。eNOS蛋白表达于再灌注3 d达高峰,假手术组表达为0.4291±0.0173,模型组再灌注3 d表达为0.7374±0.0252,电针组表达为0.8536±0.0212,各组比较有显著差异(P<0.01)。与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1 d显著低于模型组(P<0.01),再灌注3、7 d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组(P<0.01)。结论电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达。

eNOS与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在蛛网膜下腔出血(sub-arachnoid hemorrhage,SAH)后不同时间点基底动脉表达情况及其与脑血管痉挛的关系。方法新西兰大白兔72只,随机分成两组:(1)对照组(12只);(2)SAH组(60只)。SAH组进一步按时间随机分为术后1d、3d、5d、7d、10d5个亚组,每组12只。采用枕大池二次注血法建立兔SAH模型。二次注血后在各个时间点采用灌流固定法处死动物,测定基底动脉横截面积判断有无脑血管痉挛。应用Western blotting分别观察eNOS在基底动脉中的表达情况。结果枕大池二次注血法成功制作SAH模型,基底动脉发生了不同程度的血管痉挛。Western blotting观察到eNOS在对照组大量表达,实验组第1天表达开始减少,第5天表达水平最低,之后表达逐渐增加。结论 SAH后eNOS表达水平的变化与脑血管痉挛发展的时相性具有一定的一致性,eNOS蛋白减少可能参与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的发展。

宁夏汉族人群eNOS基因3个SNP位点与原发性高血压相关性的研究

目的:探讨在宁夏地区汉族人群中eNOS基因3个SNP位点与原发性高血压(EH)的相关性。方法:采用PCR-RFLP方法对204例EH患者及219例健康个体eNOS基因rs2070744(T>C)、rs1800780(A>G)和rs3918181(A>G)共3个SNP位点检测。用χ2检验比较病例组-对照组间基因型频率、等位基因频率的差异,用SHEsis在线分析软件分析单倍型。结果:EH组和对照组间,rs1800780位点基因型频率的分布存在显著性差异(P<0.05)。rs2070744位点及rs3918181位点基因型频率及等位基因频率的分布均无显著性差异(P>0.05)。3个SNP位点共检出8种单倍型,其中单倍型TGA在对照组及EH患者中有统计学差异(P<0.05),且OR(95%CI)为1.549(1.116～2.150)。结论:单倍型TGA的出现可能会增加汉族EH的患病风险。

益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号途径作用机制研究

目的:观察益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路的影响,探讨其治疗慢传输型便秘的作用机制。方法:共纳入60只SPF级8周龄wister大鼠,将50只大鼠运用“复方地芬诺酯灌胃法”造成慢传输型便秘模型后,随机分成模型组、莫沙必利组、益气健脾通便方低、中、高剂量组,每组各10只,其余10只大鼠设成正常对照组。各组大鼠连续给药4周,以大鼠一般情况、首粒黑便排出时间、粪便含水率、结肠组织一氧化氮(NO)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量、磷酸化蛋白激酶B(P—Akt)阳性细胞面积及蛋白水平表达为观察指标。结果:益气健脾通便方各组均能明显提高大鼠粪便含水率(P<0.05),缩短首粒黑便排出时间(P<0.05),减少结肠组织NO及eNOS含量(P<0.05),提高结肠组织P—Akt阳性细胞面积及蛋白表达量(P<0.05),从而改善模型大鼠便秘症状,以中、高剂量疗效最为显著。结论:益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与其调控PI3K/Akt/eNOS信号途径有关。

胸腺素β4通过提高Akt磷酸化促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质eNOS和CD31表达

目的探讨胸腺素β4(Tβ4)对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质血管再生影响及其机制。方法用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(IR组)、Tβ4组(IRT组)、Tβ4+LY294002组(IRTL组)、0.9%氯化钠注射液组(IRN组),缺血2 h后把IR、IRN和IRT组分为3和7 d两亚组。Western blot检测Akt磷酸化水平和eNOS蛋白表达;免疫组化检测Tβ4和CD31蛋白表达;荧光定量PCR检测eNOS、SDF-1及CXCR4 mRNA表达;Longa法检测神经功能。结果与IRN组相比,IRT 3 d Tβ4蛋白表达显著增多(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d Akt磷酸化水平和eNOS蛋白显著增高(P<0.05),但IRTL组与其比较p-Akt和eNOS蛋白表达显著减少(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d eNOS、SDF-1和CXCR4 mRNA表达显著升高(P<0.05);与IRN组比较,IRT 3和7 d组微血管密度显著增高(P<0.05),大鼠神经功能缺损在第7天改善最明显(P<0.05)。结论 Tβ4可能通过提高局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质Akt磷酸化水平、eNOS基因和蛋白的表达,促进大鼠大脑皮质缺血半暗带血管再生和神经功能恢复。

SIRT1/eNOS/NO通路在人参皂苷Rb1抗内皮细胞复制性衰老中的作用

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨SIRT1/e NOS/NO通路在其中的作用机制。方法:建立原代HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老情况;采用real-time PCR方法和Western blot法检测沉默SIRT1前后衰老细胞中e NOS和PAI-1的mRNA和蛋白表达,并检测细胞上清NO的含量。结果:累积细胞群体倍增水平(CPDL)为16的HUVECs可作为复制性衰老模型; 80μmol/L人参皂苷Rb1处理后衰老细胞内SIRT1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平增加,NO含量增加(P <0. 05),而PAI-1的mRNA和蛋白表达水平下降(P <0. 05);沉默SIRT1后,衰老细胞内e NOS的mRNA及蛋白表达减少,PAI-1的mRNA及蛋白表达增加,NO含量减少(P <0. 05);与SIRT1沉默组比较,在沉默SIRT1基础上加用人参皂苷Rb1后,e NOS和PAI-1表达水平及NO的含量未见明显变化。结论:人参皂苷Rb1可通过调控SIRT1/e NOS/NO通路延缓HUVECs复制性衰老。

基于PI3K/AKT/eNOS信号通路探讨健脾利湿化瘀方抑制前列腺癌血管生成的实验研究

[目的]在健脾利湿化瘀方临床疗效和前期实验的基础上,继续探讨健脾利湿化瘀方及其拆方在抑制人前列腺癌PC-3细胞荷瘤小鼠血管生成方面的作用,及其对PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响。[方法]选取6~8周雄性裸鼠36只建立人前列腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、西药组、全方组、君药组、臣药组和佐药组。实验各组干预14 d后处死取血称瘤质量,计算抑瘤率;使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS);免疫组化法观察各组瘤组织中VEGF、ANG1的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织中磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、eNOS蛋白表达水平。[结果]各给药组瘤体积、瘤质量均低于空白对照组(P<0.01),西药组、全方组、君药组、臣药组、佐药组的抑瘤率分别为53.95%、41.05%、19.21%、27.37%、31.32%,拆方组间比较,佐药组抑瘤效果较好,但无统计学差异(P>0.05);ELISA检测显示:各组VEGF、eNOS含量均低于空白对照组,其中西药组、全方组显著降低(P<0.05或P<0.01);Western Blot结果显示:各组PI3K、eNOS的蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),AKT蛋白表达无显著变化(P>0.05),p-AKT呈降低趋势(P<0.05),其中西药组、全方组、佐药组呈显著下降(P<0.01)。[结论]尽管与西药对比抑瘤作用较弱,但中药健脾利湿化瘀方对前列腺癌在血管生成方面具有确切的抑制作用,尤其是具有化瘀消癥散结作用的佐药组,可能与姜黄、王不留行中某些有效成分能够下调PI3K、eNOS蛋白,影响AKT磷酸化,阻断PI3K/AKT/eNOS信号通路相关。

宁夏回族人群eNOS基因多态性与原发性高血压关联性分析

目的探讨在宁夏地区回族人群中eNOS基因4个SNP位点与原发性高血压(EH)的关联性。方法采用PCR-RFLP方法对134例EH患者及115例健康个体eNOS基因rs2070744(T>C)、rs1799983(G>T)、rs1800780(A>G)和rs3918181(A>G)共4个SNP位点进行检测。EH组与对照组间基因型频率、等位基因频率的差异比较采用χ2检验,并采用SHEsis在线分析软件对单倍型进行分析。结果 EH组和健康对照组间,rs1800780位点和rs1799983位点基因型频率的分布差异有统计学意义(P<0.05)。rs1799983位点等位基因频率的分布差异有统计学意义(P<0.05),其等位基因G的频率在EH组低于健康对照组,且OR值为3.851(95%CI:2.236～6.631)。4个SNP位点共检出15种单倍型,其中单倍型CGAG、TTAG、TGGG、TTGG、TTGA在宁夏回族健康人群及EH患者中差异有统计学意义(P<0.05)。单倍型CGAG、TGGG的OR值为0.352、0.600,95%CI小于1;单倍型TTAG的OR为2.689,95%CI大于1。结论 rs1799983位点等位基因G为宁夏回族人群易患EH的危险因子,单倍型CGAG与TGGG可降低回族EH的患病风险,而单倍型TTAG可增加回族EH的患病风险。

兔股动脉结扎诱导动脉生成过程中iNOS和eNOS的表达

目的:研究兔后肢动脉生成过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达特征。方法:将兔一侧股动脉结扎,另一侧设为对照组。1周后动物被处死。应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管中iNOS及eNOS的表达。用Leica激光共聚焦显微镜观察并拍照,图片用silicon graphicsoctane进行处理。结果:在正常小动脉血管中iNOS的表达很低,在生长的侧支血管iNOS的表达显著上调,是正常小动脉血管的2.8倍。其表达在血管壁的各层可见。正常小动脉血管eNOS的表达呈现一定基础水平,在生长的侧支血管中eNOS的表达呈强阳性,集中在内皮细胞,是正常小动脉血管的2.2倍。结论:侧支血管发育过程中iNOS的表达上调,上调的iNOS和eNOS可能通过生成NO,调节内皮细胞的增殖、移动及炎症的形成,从而对侧支血管的生长发挥重要作用。

麻元通便止痛汤调控AMPK/eNOS信号通路改善大鼠慢传输型便秘的作用机制

目的研究麻元通便止痛汤调控AMP活化蛋白激酶(AMPK)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路改善大鼠慢传输型便秘(STC)的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组和麻元通便止痛汤低、中、高剂量组(6、12、18 mg/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠灌胃复方地芬诺酯混悬液复制STC模型。造模成功后,空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水,麻元通便止痛汤各剂量组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续2周。观察大鼠治疗前后的粪便数量及含水率;计算大鼠的炭末推进率;观察大鼠结肠组织的病理学变化;检测大鼠结肠组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平及AMPK、eNOS、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、结节性硬化复合物1(Tsc-1)、Tsc-2、真核启动因子4E结合蛋白(4ebp)的表达水平;筛选麻元通便止痛汤君药火麻仁、枳壳、生地的活性成分,选择Degree值最高的活性成分与AMPK、eNOS进行分子对接,以验证相互作用。结果与治疗前比较,麻元通便止痛汤各剂量组大鼠粪便数量及含水率均显著增加(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠炭末推进率显著降低(P<0.05);结肠组织结构紊乱,黏膜下层见大量炎症细胞浸润;结肠组织中NO、NOS水平和AMPK、eNOS、mTOR、Tsc-1、Tsc-2、4ebp蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,麻元通便止痛汤各剂量组上述指标(低剂量组NOS除外)均显著逆转(P<0.05)。分子对接结果显示,火麻仁、枳壳、生地中Degree值最高的活性成分分别为(Z)-3-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-N-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]acrylamide、nobiletin、stigmasterol,这3种成分与AMPK的结合能分别为-5.15、-4.61、-4.83 kJ/mol,与eNOS的结合能分别为-6.11、-5.40、-5.91 kJ/mol,且结合构象稳定、结合活性较高。结论麻元通便止痛汤可改善STC模型大鼠的便秘症状和肠道功能,其作用机制可能与抑制AMPK/eNOS信号通路有关。

NO调控剂(S,S)-ZX-5及其对映体对血管内皮细胞NO释放及eNOS酶活性影响研究

目的:考察(S,S)-ZX-5及其对映体对血管内皮细胞一氧化氮(NO)释放和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响,为开发通过增加NO释放而选择性改善脉络膜血流的药物提供理论依据。方法:采用细胞培养技术和硝酸还原酶法在体外测定NO的释放量,用同位素方法测定[H3]L-Arg催化生成[H3]L-Cit量的变化来反映eNOS活性。结果:(S,S)-ZX-5使NO生成显著增加,并与(S,S)-ZX-5的浓度相关,(R,R)-ZX-5对NO生成增加影响不显著;(S,S)-ZX-5显著提高了eNOS酶活性,(R,R)-ZX-5对eNOS酶活性影响不显著。结论:(S,S)-ZX-5改善脉络膜血流的机制可能是通过增强eNOS酶活性,促进细胞内NO释放增加而完成的。