纳他卡林激活内皮细胞ATP敏感性钾通道SUR2B/Kir6.1亚型对eNOS磷酸化的调节作用

目的 纳他卡林可选择性激活ATP敏感性钾通道（Katp）SUR2B／Kir6．1亚型，引起胞内ca2＋’浓度升高，一氧化氮合酶（eNOS）活性增强，NO释放增加。eNOS活性与eNOS磷酸化密切相关，研究表明eNOS-Serll77、eNOS-Ser635、eNOS-Set615磷酸化增强eNOS活性，eNOS-Thr495、eNOS-Serl16磷酸化抑制eNOS活性。本文研究纳他卡林激活Km对eNOS各磷酸化位点的影响，以此认识纳他卡林增强eNOS活性的作用特点。方法在培养的内皮细胞上给予（1）10^-9-10^-9mol·L^-1不同浓度的纳他卡林孵育5min，（2）预孵育0．01-1μmol·L。格列苯脲30min，给予1肛mol·L^-1纳他卡林孵育5rain，提取细胞总蛋白，用Western blot法检测eNOS-Serl177、eNOS-Ser635、eNOS-Set615、eNOS-Thr495、eNOS．Serll6磷酸化的变化。结果纳他卡林可浓度依赖性的升高eNOS．Serll77、eNOS，Ser635的磷酸化及eNOS．Thr495的去磷酸化，而对eNOS-Ser615和eNOS-Serl16磷酸化无影响。此作用可被K。特异性阻断剂格列苯脲拮抗。结论纳他卡林通过激活内皮细胞Katp，调节eNOS-Serll77、eNOS．Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化，但不影响eNOS-Ser615和eNOS-Serl16磷酸化，从而增强eNOS活性。

甲基亚砷酸对内皮型一氧化氮合酶磷酸化影响

目的观察无机砷的活性中间产物-甲基亚砷酸（MMA^Ⅲ）对牛主动脉血管内皮细胞（BAEC）的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化以及活性氧自由基（ROS）产生的影响。方法培养的BAEC分别暴露于MMA^Ⅲ（0．75／μmol／L，0-15min）；亚砷酸钠（iAs^Ⅲ，100／μmol／L，0～60min）；或N-乙酰半胱氨酸（NAC，1mmol／L）预处理2h后，再暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L，0-15min）。收获细胞悬液进行eNOS磷酸化蛋白的westem blot分析；应用二氰二乙酰荧光素法（H2DCFDA）观测细胞内的ROS产生。结果BAEC暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）15min后，eNOSser1179磷酸化显著增加（P〈0．05），NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象；MM^Ⅲ暴露也能够诱导eNOSser1179磷酸化（P〈0．05），但是需要高浓度和更长的暴露时间（100μmol／L，30min）；MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）暴露能够诱导BAEC产生ROS，NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象。结论MMA^ Ⅲ暴露能够诱导细胞内产生ROS以及ROS依赖性eNOS磷酸化。