MK通过EPCR/PAR1通路促进乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成

目的探讨中期因子(midkine,MK)在人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成中的作用及其机制。方法采用shRNA干扰技术降低MDA-MB-231细胞MK表达,应用Western blot技术检测肿瘤细胞中内皮蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)的表达;干扰MK和EPCR表达或通过抗体阻断活化蛋白酶激活受体1(protease-activated receptor 1,PAR1)作用后,制备肿瘤条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过CCK-8试剂盒检测HUVECs增殖、Transwell小室检测迁移以及Matrigel表面培养检测脉管形成能力。结果干扰MK表达后,EPCR表达随之降低。干扰MK和EPCR低表达后,HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力均低于对照组(P<0.05),EPCR干扰组低于MK干扰组(P<0.05)。应用抗PAR1作用后,HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力低于对照组和EPCR干扰组(P<0.05)。结论 MK可通过EPCR/PAR1通路促进乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成。

乳腺癌中EPCR的表达及其预后意义

目的观察EPCR在乳腺癌中的表达,并分析其预后意义。方法采用免疫组化Eli Vision法检测99例非特殊型浸润性乳腺癌组织中EPCR蛋白的表达,并复习相关文献。结果 EPCR在乳腺癌组织中的阳性率为36.4%,其表达与组织学分级、淋巴结转移、HER-2及Ki-67表达呈正相关,与ER、PR表达呈负相关,并在管腔A型中呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier单因素生存分析显示,EPCR阳性组的无瘤生存期(disease free survival,DFS)明显低于EPCR阴性组(P=0.011,Log-rank test=6.391),多因素Cox回归分析结果显示,EPCR在pN>1组的乳腺癌中是独立的预后因素(hazard ratio=6.063,P=0.032)。结论 EPCR在乳腺癌中的表达与组织学高分级、淋巴结转移、HER-2阳性、高Ki-67、低ER/PR及更短的DFS相关,提示乳腺癌的不良预后。

干扰人乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响

目的 :通过观察干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞内皮蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)表达对内皮细胞的增殖、迁移、脉管形成能力的变化,分析EPCR在肿瘤血管形成中的作用。方法:采用si RNA方法降低人乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达,通过RT-PCR及Western blot技术检测EPCR干扰效果,实验分为EPCR干扰组、无关序列组及未处理组。制备肿瘤条件培养基模拟肿瘤微环境培养HUVECs细胞,通过CCK-8法检测各组内皮细胞增殖能力,Transwell小室检测内皮细胞迁移能力,Matrigel检测内皮细胞脉管形成能力。结果:与未处理组及无关列序组相比,EPCR干扰组细胞的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低(P<0.05)。结论:干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达能够抑制内皮细胞增殖、迁移及脉管形成能力,提示EPCR可能在肿瘤血管形成中起重要作用。

EPCR基因mRNA在人胃癌细胞系中的表达及其shRNA干扰载体内源性筛靶研究

目的检测人胃癌细胞株中内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein creceptor,EPCR)基因的mRNA表达水平,构建EPCR基因特异的短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并通过内源性筛靶实验检测EPCR mRNA表达,筛选出最佳的干扰靶序列。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、HGC27、AGS)中EPCR mRNA和蛋白的表达,筛选出EPCR高表达的细胞株;设计5对EPCR基因特异性短发夹RNA(shRNA)干扰片段pGPH1/GFP/Neo-EPCR,用Lipofectamine 2000将pGPH1/GFP/Neo-EPCR转染入EPCR高表达的人胃癌细胞,以pGPH1/GFP/Neo空载体作对照;转染后通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率,选出最优质粒/脂质体比;转染后收集样本,采用RT-PCR及Western blot进行检测,筛选出有效的干扰片段。结果 EPCR在MGC803细胞中表达量最高;最佳质粒:脂质体比值为1μg︰1μL;pGPH1/GFP/Neo-EPCR-homo-555为最有效的干扰质粒。结论成功筛选出针对EPCR基因特异的shRNA干扰载体,转染细胞后可下调EPCR的表达,为进一步研究EPCR的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础。

APC-EPCR-PAR1通路在类风湿关节炎中的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种慢性、系统性自身免疫性疾病。活化蛋白C(APC)是由其前体蛋白C(PC)转化而来的一种天然抗凝血剂,在凝血调控中起着关键的作用。APC可与内皮蛋白C受体(EPCR)结合,激活内皮细胞上的蛋白激酶受体1(PAR1),从而启动细胞的保护和抗炎反应。现就APC-EPCR-PAR1活化通路上各靶点在RA中的研究进展进行综述,探讨APC-EPCR-PAR1通路在RA疾病中的潜在治疗价值,为RA的治疗提供更多的选择。

肝脏疾病患者PTM和EPCR水平的检测及其临床意义

目的探讨血浆凝血酶调节蛋白(PTM)和血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)在肝脏疾病患者病变过程中的表达变化及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测慢性乙型肝炎患者56例、肝硬化患者43例、原发性肝癌患者28例和正常对照组30例的PTM和EPCR水平。结果慢性乙型肝炎轻度组PTM和EPCR水平有升高趋势,但与正常对照组比较,差异无统计学意义(t分别=1.09、1.17,P均>0.05),而中重度组均明显高于轻度组和正常对照组,差异均有统计学意义(t分别=4.81、2.61、4.27、3.14,P均<0.05)。肝硬化代偿期组、失代偿期组和原发性肝癌组PTM和EPCR水平均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(t分别=5.74、5.35、15.11、8.67、5.07、5.55,P均<0.05),其中失代偿期明显高于代偿期,差异均有统计学意义(t分别=7.78、3.02,P均<0.05)。结论PTM和EPCR与肝脏疾病的病变过程密切相关,联合动态检测PTM和EPCR水平可作为肝脏疾病血管内皮细胞损伤和疾病严重程度的重要观察指标。

EPCR通过活化PAR-1促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移

目的探讨内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)对乳腺癌增殖、迁移的影响及机制研究。方法采用siRNA技术降低人乳腺癌MCF-7细胞中EPCR的表达;添加抗PAR-1抗体阻断PAR-1作用,然后采用CCK-8检测细胞的增殖能力、Transwell检测迁移能力、Cell-ELISA检测EPCR对PAR-1活性的影响。结果 EPCR干扰后,与空白对照组及无关序列组相比,EPCR干扰组MCF-7细胞的增殖及迁移能力均明显降低(P<0.05)。抗PAR-1抗体处理后,与空白对照组相比,PAR-1抗体处理组细胞的增殖迁移能力均明显降低(P<0.05)。并且Cell-ELISA结果显示EPCR干扰组未裂解活化的PAR-1抗体结合率明显升高(P<0.05)。结论 EPCR可以通过活化PAR-1促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖迁移。

干扰人胃癌MGC803细胞EPCR表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响

目的：探讨内皮细胞蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肿瘤血管形成中的作用。方法采用RNA干扰方法降低人胃癌MGC803细胞中EPCR的表达，利用Western blot 技术检测干扰EPCR效果。EPCR小干扰RNA（ siRNA）片段、无关序列片段分别转染胃癌MGC803细胞，以未转染的MGC803细胞为对照；收集培养液上清，制备相应肿瘤条件培养基。人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）经不同肿瘤条件培养基作用后， CCK－8法检测HUVECs增殖能力，Transwell小室检测HUVECs迁移能力，Matrigel检测HUVECs脉管形成能力。结果与对照组及无关序列组相比，EPCR干扰组HUVECs的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低（ P＜0．05）。结论干扰胃癌MGC803细胞EPCR的表达能够抑制HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力，提示EPCR可能在胃癌血管形成中起重要作用。

高特异性心肌肌钙蛋白Ⅰ适配体的ePCR技术筛选及其表征

目的筛选出与心肌肌钙蛋白I(cTnI)具有高亲和力和高特异性的核酸适配体,为诊断急性心肌梗死(AMI)提供实验基础。方法采用基于乳液PCR(ePCR)的SELEX技术筛选出能与cTnI特异性结合的3个适配体,并对ePCR条件进行优化,对适配体进行亲和力(Kd值)测定并与市售cTnI抗体进行比较,选出Kd值最小的适配体,进行特异性鉴定。结果SELEX过程中通过优化得到ePCR最佳条件,筛选得到的3个适配体均对cTnI具有较强的亲和力,其Kd值范围为2.04~16.85 nmol/L,其中适配体Apt-1的亲和力最强[Kd为(2.04±0.11)nmol/L]且优于市售抗体,特异性高,敏感性强,不与其他相关蛋白有非特异性结合。结论筛选出的适配体Apt-1能与cTnI产生高亲和力的特异性结合,可进一步用于临床样本中cTnI的检测。

百草枯中毒鼠肺组织中TM-EPCR mRNA与IL-1β的表达

目的探讨IL-1β与TM、EPCR基因在百草枯中毒鼠所致急性肺损伤中的表达.方法 90只SD雄性大鼠分为正常对照组(C组30只)、百草枯中毒组(PQ组60只).PQ组一次性灌胃PQ25 mg/kg染毒,C组予等体积生理盐水灌胃.观察各组大鼠在中毒后6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d肺组织病理改变,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测鼠肺组织TM、EPCR mRNA的表达;采用ELISA方法检测血清的IL-1β表达.结果 C组肺组织结构完整,无炎症细胞渗出.PQ组肺组织炎性细胞浸润明显增多,且随时间推移肺损伤加重.C组TM和EPCR mRNA有一定水平表达;与C组相比PQ组鼠肺组织TM和EPCR mRNA的表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);PQ组TM和EPCR mRNA的表达在1 d达高峰之后下降,第3天基本恢复到C组水平.PQ组IL-1β与TM表达呈正相关(P<0.01);IL-1β与EPCR表达呈正相关(P<0.01).结论 IL-1β与TM、EPCR基因介导的炎症反应参与百草枯中毒所致肺损伤.

TNF-α、曲格列酮对人脐静脉内皮细胞EPCR表达的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及曲格列酮对人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）上内皮细胞蛋白C受体（EPCR）表达的影响.方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ECV304细胞中EPCR mRNA的表达,并用流式细胞仪检测ECV304细胞中EPCR的表达量;采用实时定量PCR（Real-Time PCR）检测TNF-α及曲格列酮对ECV304细胞上EPCR mRNA表达的影响.结果 EPCR在ECV304细胞中高表达,TNF-α会下调ECV304细胞中EPCR mRNA的表达量,并呈剂量依赖性,而曲格列酮可以明显改善TNF-α对EPCR的抑制作用.结论 ECV304细胞EPCR的高表达可被TNF-α抑制,曲格列酮对TNF-α引起的抑制效应具有拮抗作用,提示曲格列酮可能对内皮细胞的损伤具有保护功能.

TM和EPCR基因在百草枯中毒鼠肺组织中的表达及三七总皂甙保护作用

目的探讨急性百草枯(PQ)中毒鼠肺组织病理损伤变化和肺组织中血栓调节蛋白(TM)和内皮细胞蛋白C受体(EPCR)的表达及三七总皂甙(PNS)的保护作用。方法 150只SD雄性鼠分为正常对照组(C 30只)、百草枯染毒组(PQ 60只)及三七总皂甙干预组(PNS 60只)。PQ组和PNS组鼠一次性灌胃PQ25mg/kg染毒,C组予等体积生理盐水灌胃。其中PNS组鼠于染毒前15min以PNS50mg/kg阴茎静脉注射保护,以后每日1次给药直至处死前;PQ组、C组分别在同时间点予与等体积生理盐水。观察各组大鼠在中毒后6、12h、1、3、5、7天肺组织病理改变,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定鼠肺组织TM和EPCR mRNA的表达。结果 C组TM和EPCR mRNA有一定水平表达;与C组相比PQ组及PNS组鼠肺组织TM和EPCRmRNA的表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);PQ组TM和EPCR mRNA的表达在1天达高峰之后下降,第3天基本恢复到C组水平;PNS组TM和EPCR mRNA的表达在6、12h及1天低于PQ组,至第3和5天显著高于PQ组,之后下降至正常水平,差异有统计学意义(P<0.05)。PQ组肺病理损伤评分在6、12h,1、3、5及7天各亚组均高于PNS相应组,差异有统计学意义(P<0.05),C组肺组织病理大致正常,与PQ组及PNS组相比,差异有统计学意义(P<0.00)。结论 TM和EPCR mRNA基因参与PQ中毒所致肺损伤,PNS对百草枯中毒所致肺损伤有保护作用。

CD44和EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤干细胞标记物CD44和EPCR在乳腺癌组织中的相关性及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法选取2015年1月至4月在北京大学深圳医院行乳腺癌切除术的46例女性患者,用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测非特殊型浸润性乳腺癌及其配对癌旁正常乳腺组织中CD44及EPCR的mRNA表达水平,分析其与临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。结果 (1)荧光定量RT-PCR结果显示CD44 mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(t=2.486,P=0.017),在ER阳性乳腺癌明显低于ER阴性组、在正常乳腺样型的三阴型乳腺癌明显高于非正常乳腺样型的三阴型组,差异具有统计学意义(t=-2.332,P=0.024;t=-4.209,P <0.01),但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关(P> 0.05);(2)EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(t=4.028,P <0.01),与乳腺癌的肿瘤大小(t=2.998,P <0.01)、组织学分级(t=4.082,P <0.01)、淋巴结转移(t=2.152,P=0.037)、临床分期(t=-2.378,P=0.022)、ER(t=-5.585,P <0.01),PR(t=-3.896,P <0.01)及增殖指数Ki67(t=2.197,P=0.033)相关,差异具有统计学意义。但与患者的年龄及HER2无关(P> 0.05),在三阴型(尤其是基底样型)乳腺癌及Luminal B型乳腺癌中的相对表达水平也明显高于非三阴型组及非Luminal B型组,差异具有统计学意义(t=9.163,P <0.01;t=3.653,P=0.003);(3)在乳腺癌中,CD44及EPCR mRNA的表达呈显著正相关(rs=0.540,P <0.01)。结论乳腺癌干细胞标志物CD44及EPCR在乳腺癌组织中均明显表达上调,2者具有正相关,但EPCR与更多的临床病理特征相关,提示EPCR可更好地预测乳腺癌的淋巴结转移及较高临床分期等不良预后,并推测CD44及EPCR可能所标记为2种不同表型的乳腺癌干细胞。

三位一体护理模式在老年胆总管结石患者ERCP术中的应用

目的 研究分析三位一体护理模式在经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)治疗老年胆总管结石患者中的护理效果.方法 选取需经EPCR治疗的老年胆总管结石患者83例,随机分为常规组(41例)和研究组(42例);常规组给予常规护理,研究组在常规组护理的基础上开展三位一体护理;对比分析两组患者的心理状态、并发症发生率、护理满意度、生活质量评分(GIQLI).结果 护理干预后研究组患者SAS、SDS评分均低于常规组(P<0.01),并发症发生率低于常规组(P<0.05),护理满意度高于常规组(P<0.05);护理干预后,两组GIQLI评分均明显升高,且研究组护理后1个月、2个月GIQLI评分均明显高于常规组(P<0.01).结论 经EPCR术治疗的老年胆总管结石患者行三位一体护理,可提升改善患者心理状态及术后生活质量、降低并发症情况,提升护理满意度.

内皮蛋白C受体对类风湿关节炎疾病进展的影响

目的:研究分析可溶性内皮细胞蛋白C受体(Endothelial cell protein C receptor,sEPCR)与膜型EPCR(mEPCR)在参与类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)疾病进展中的作用。方法:在DBA1/J小鼠尾部注射II型胶原蛋白诱导关节炎小鼠(CIA小鼠),并在两次胶原免疫期间给予实验组小鼠腹腔内注射sEPCR重组蛋白或EPCR腺病毒小干扰载体进行发病前干预;二次加强免疫后的第7 d,对CIA小鼠的关节红肿程度进行连续评分;第28 d处死小鼠,进一步行关节的组织病理学、放射学评估,评价sEPCR和mEPCR对RA疾病进展的作用。结果:(1)与对照组相比,给予sEPCR干预的CIA小鼠关节评分显著降低,组织学和放射学结果显示骨侵蚀程度也较轻;(2)与sEPCR重组蛋白干预相反,mEPCR组CIA小鼠由于EPCR表达下调,CIA小鼠表现为更严重的关节破坏和炎症。结论:EPCR的表达异常与RA的疾病进展密切相关;给予sEPCR治疗可延缓骨破坏,缓解RA的疾病进展;而mEPCR的表达水平降低会介导RA疾病的发生和发展。

内皮细胞蛋白C受体在肾癌组织中表达的意义

目的探讨内皮细胞蛋白C受体（EPCR）在肾癌组织中的表达及其临床意义。方法利用组织免疫荧光的方法，检测EPCR在肾癌组织、癌旁组织和正常肾组织中的表达，并比较它们的差异，其中肾癌组织标本30例，以15例外伤性损伤肾为正常组织对照组。结果免疫荧光的结果显示EPCR在肾癌组织中呈现高表达，癌旁组织较低表达而在正常肾组织中表达很低或者不表达。结论EPCR的表达是肾癌的重要特征，并可能与肾癌的发生发展有关。

急诊ERCP治疗老年人急性化脓性胆管炎110例临床分析

目的:通过观察急诊ERCP方法治疗老年急性化脓性胆管炎的临床疗效,旨在为临床合理治疗老年急性化脓性胆管炎提供理论依据。方法选择2011年1月~2014年1月在我院接受治疗的老年人急性化脓性胆管炎患者110例,平均分成内镜组和手术组,每组55例患者,内镜组用内窥镜逆行胰胆管造影术(EPCR)并根据患者情况适当选择十二指肠乳头括约肌切开进行取石,手术组对患者采取开腹手术的治疗方式。观察两组患者术后腹痛消失时间、胆红素水平、住院时间、并发症的发生率和治疗的总有效率。结果内镜组患者治疗后,腹痛消失时间、住院时间显著缩短、胆红素水平等临床症状恢复良好,并发症的发生率显著降低,总有效率高,与手术组比较P<0.05差异显著且有统计学意义。结论内窥镜逆行胰胆管造影术治疗老年急性化脓性胆管炎能显著改善病情,缩短住院时间,提高总有效率,临床疗效显著可以再临床广泛使用。

蛋白C抗凝系统功能及分子缺陷的研究进展

机体内存在多个系统之间相互协调,共同参与维持体内环境的稳定状态。蛋白C系统是抗凝系统的重要组成部分,是维持机体凝血与抗凝相对稳态的重要成分,其发挥抗凝活性主要依靠活化的蛋白C。探讨蛋白C抗凝系统各组分的生理功能及分子缺陷有利于揭示其在机体抗凝、抗炎以及免疫应答中的具体作用。文章从蛋白C抗凝系统各组分的生理结构、生物学功能以及分子缺陷进行综述。

基于全基因组重测序信息开发玉米H99自交系特异分子标记

随着基因组测序技术和计算生物学的发展,利用生物信息学的方法大规模挖掘基因组特异分子标记已成为可能。玉米自交系H99具有较强的可再生能力,是玉米转基因研究的主要供体材料,但是目前对H99基因组信息了解甚少。本研究利用高通量Illumina测序技术,对H99全基因组进行重测序,利用生物信息学手段大规模挖掘并开发了4043个H99特异性的SSR分子标记。随后利用模拟PCR策略,对开发的SSR分子标记进行电子多态性筛选,针对B73×H99、Mo17×H99和B73×Mo17三个群体亲本组合共开发2699候选的特异多态性SSR分子标记。随机挑选20对SSR分子标记对群体亲本B73、H99和Mo17进行多态性筛选,进一步证实候选的多态性具有95%的准确率。此外,基于B73参考序列对开发的多态性SSR分子标记进行全基因组染色体定位及基因注释,揭示了候选多态性SSR分子标记在全基因组及基因内的分布特征。为玉米自交系H99开发了大量的分子标记资源,同时也为快速开发品种间多态性分子标记提供了一套高效可行的分析方法。

桃核承气汤对脓毒症大鼠凝血-炎症水平的调控作用研究

目的:观察血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)对脓毒症大鼠凝血相关因子血清凝血因子XIV(FXIV)活性及炎症相关因子血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响以及桃核承气汤对凝血-炎症系统的调控作用。方法:将大鼠分为正常组、模型组(脓毒症)、中药组(造脓毒症模型后用桃核承气汤治疗),采用二次打击法建立脓毒症模型,ELISA法检测造模后休克开始及复苏后第72h血清EPCR的表达以及FXIV、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,第120h各组IL-6、TNF-α的含量。结果:脓毒症大鼠的EPCR水平,中药组与正常组、模型组之间差异有统计学意义(P<0.05);而凝血因子FXIV、IL-1β含量中药组与正常组、模型组之间未见差异(P>0.05)。脓毒症大鼠造模后TNF-α水平,在第72h时中药组(2.14±0.55)和正常组(2.04±0.52)与模型组(2.75±0.83)含量有明显差异(P<0.05),第120h时中药组(3.13±0.52)和正常组(2.77±0.3)低于模型组(3.56±0.56)水平(P<0.05),且三组TNF-α含量均高于第72h时。结论:桃核承气汤可能通过调节脓毒症大鼠EPCR水平的表达,抑制TNF-α水平,从而调控脓毒症的炎症反应。在脓毒症的凝血-炎症网络中桃核承气汤的调节凝血作用或弱于调节炎症作用。