Preliminary Analysis of Advantages of EB2B Model Compared with Traditional B2B Model

From a business model perspective,both traditional B2B model and eB2B model are made up of the same elements while they have differentiating features separately.

社交网络技术在科研教学环境中的应用研究

随着互联网产业的发展、用户规模的扩张和用户行为的变化,以Web2.0为特征的相关需求应运而生。SNS,Social Networking Services,专指旨在帮助人们建立社会性网络的互联网应用服务。依赖其开放性,即时性,互动性,不受时间地点约束等特点获得青睐,很多社交网站如twitter,Facebook,人人网,微博在流量、用户数和市值都有引人瞩目的成绩。社交网络的特性适用于知识的共享,将SNS和E-learning结合产生的面向知识管理的社交网络KMOS系统既使学生在社交网络服务中获取到知识,又打破传统教学受时间、地点的束缚,开放共享知识,一对多的高效传播模式。设计和实现的面向知识管理的社交网络服务拥有的上述优点。使用列表和群组控制多媒体资源的传播范围。分层和插件式设计使系统灵活应对需求改变。使用社交网络技术提高教学质量。

网络信息资源建设创新模式探析

从web2.0概念入手,在简介web2.0的特点基础上,分别从信息内容、信息传播方式、信息传播速度、信息用户获取方式、信息成本等角度阐述了web2.0下网络信息来源与传递的情报学解析,由此提出了在web2.0环境下数字信息资源建设的新模式:机构知识库建设成为完善Web2.0环境下网络信息资源建设的重要内容;搜集整理网络免费的学术期刊是WEB2.0环境下网络信息资源建设不可缺少的部分;个人网络出版资源搜集整理将成为WEB2.0环境下资源建设的新宠。

基于WPF的工厂物流管理系统界面设计

为解决传统工厂物流管理系统设计所存在的问题,如:界面不够美观并难以满足一些特殊需求等,介绍了应用微软新一代界面开发技术WPF对工厂物流管理系统进行界面设计。系统采用适用于WPF编程模式的架构MVVM,并通过此项技术实现了工厂物流管理系统界面新颖设计。和传统界面设计技术相比,通过WPF设计的界面,不但可以使用户得到更好的视觉享受,而且更节省CPU资源,系统运行更加流畅。

肌肉免疫DC-EBV-LMP2诱导免疫应答的研究

目的探讨肌肉免疫DC-EBV-LMP2诱导的免疫效果。方法从BALB/C小鼠分离骨髓细胞,诱导培养获得小鼠DC,以100 MOI的rAd-LMP2感染获得DC-EBV-LMP2,继续培养48h,诱导DC-EBV-LMP2成熟。用免疫酶法确定LMP2在DC中表达。0,2,4周,以2×105个DC-EBV-LMP2/只免疫BALB/C小鼠,于第5,8周分别LMP2特异性水平和T细胞亚群的变化。结果结果显示,肌肉免疫DC-EBV-LMP2可诱导BALB/C鼠LMP2特异性免疫应答,且第5周强于第8周。CD8+T/CD3+T细胞亚群的比值在第5周高于对照组,而第8周低于对照组。结论 DC-EBV-LMP2肌肉免疫BALB/C鼠可诱导LMP2特异性CTL。

EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果及分布研究

背景与目的 EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2是预防和治疗EBV相关肿瘤的良好靶抗原,本研究以食蟹猴为研究系统,观察携带EBV潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)在动物体内引起的细胞免疫应答及病毒载体分布。方法分别使用低、中、高不同剂量的Ad-LMP2,于0周、4周以肌内多点注射的方式免疫食蟹猴,应用流式细胞仪检测动物外周血CD3、CD4、CD8阳性T细胞的比值;γ干扰素酶联免疫斑点法(IFN-γ-ELISPOT法)检测Ad-LMP2诱导的LMP2特异性CTL;RT-PCR方法检测首次和末次注射后,不同时间点外周血中重组病毒的载量,以及8周后,脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢和注射局部肌肉的基因分布情况。结果与同期对照组或免疫前比较,Ad-LMP2免疫的动物外周血T淋巴细胞亚群未见差异(P>0.05);低、中、高不同剂量都能够诱导产生LMP2特异性CTL,其中,中、高剂量组反应水平较高;Ad-LMP2肌内注射后15min～1h在血中浓度最高,2～8h后分布到其他脏器。1d后,病毒主要分布在注射局部的肌肉组织中,而在脑、心、肺、肝、脾、肾、卵巢或睾丸等组织内,未检测到重组病毒。结论 Ad-LMP2在食蟹猴体内能够诱导产生LMP2特异性CTL,对T淋巴细胞亚群不产生影响,重组病毒只分布在注射局部肌肉,没有潜在危险。

EBV-LMP2A肽诱导的特异性CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用

目的:探讨HLA限制性EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)表位肽EBV-潜伏膜蛋白2A(EBV-latent membrane protein2A,EBV-LMP2A)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用。方法:选用南京大学医学院附属肿瘤医院肿瘤中心HLA-A2阳性胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)、人胃腺癌细胞株(AGS)和人EBV阳性胃腺癌细胞株(AGSEBV),通过改良的体外细胞培养技术用HLA-A2限制性的EBV-LMP2A抗原肽从人PBMC中诱导扩增出特异性CTL,采用四聚体技术和流式细胞术检测抗原肽诱导产生的特异性CTL的含量,通过FITC-PI标记流式术检测EBV-CTL对EBV阳性和EBV阴性的胃癌细胞的体外杀伤作用。结果:经改良的细胞培养技术和抗原肽双重刺激后EBV-LMP2A抗原肽可以诱导产生出高比例的抗原特异性CTL[EBV-LMP2A-356特异性T细胞占CD8+T细胞的(47.1±5.2)%];EBV-CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用较EBV阴性的胃癌细胞明显增强[(45.1±9.3)%vs(19.4±2.5)%,P<0.05]。结论:通过改良的细胞培养技术使用EBV-LMP2A抗原肽能诱导产生高比例的EBV特异性CTL,其对EBV阳性胃癌细胞有较强的特异性杀伤作用。

龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响，揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制。方法：采用AO／EB双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变；TMRE单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变；Fluo-3／AM单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca^2＋]i的改变；TMRE和Fluo-3／AM双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca^2＋]i的改变。结果：形态学实验表明0．0032μg／mL、0．016μg／mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变，0．08、0．4、2μg／mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态，即龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡；TMRE单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够降低HepG2细胞膜电位；Fluo-3／AM单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够升高肿瘤细胞内[Ca^2＋]。浓度；TMRE和Fluo-3／AM双染激光共聚焦观察表明龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca^2＋]i浓度。结论：龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡，其机制为降低HepG2细胞膜电位，开放细胞膜PT通道，使细胞内Ca^2＋顺浓度梯度转运，从而升高细胞内Ca^2＋浓度启动细胞凋亡机制。

不同时间EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果研究

目的观察携带EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)免疫Balb/C小鼠后,不同时间点的免疫反应。方法每只小鼠通过肌内注射的方式免疫2×109VP的Ad-LMP2重组病毒颗粒,使用γ干扰素酶联免疫斑点检测方法(IFN-γELISPOT),分别于免疫后1、2、3、4、5周检测小鼠脾淋巴细胞中,LMP2特异性释放IFN-γ的细胞数。观察不同时间点特异性CTL反应强度的变化。结果 Ad-LMP2免疫小鼠1周时,就已经产生明显针对LMP2的特异性CTL,1×106个小鼠脾淋巴细胞中,可以检测到约800个特异性释放IFN-γ的细胞。随着时间的延长,与1周时的结果相比CTL水平2、3、4周均没有明显改变,5周时稍有下降(P<0.05)。结论 Ad-LMP2免疫Balb/C小鼠,1周内就能够诱导出LMP2特异性CTL,产生的CTL能够稳定存在。

埃泼斯坦-巴尔病毒潜伏膜蛋白2A特异性细胞毒性T淋巴细胞的体外诱导研究

目的:利用含埃泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus,EBV)潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒(rVV-LMP2A)感染的人树突状细胞(DC)体外诱导EBV-LMP2A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法:rVV-LMP2A感染的DC分别在培养第1、8天刺激相同MHC背景的人外周血单个核细胞(PBMC),在IL-2作用下体外诱导EBV特异性CTL。培养第15天乳酸脱氢酶法检测CTL的特异性杀伤活性。结果:诱导的CTL对rVV-LMP2A感染的靶细胞在效靶比为5:1、10:1和15:1时,特异性杀伤率分别为63.5％、65.5％和67.9％。结论:rVV-LMP2A感染的DC刺激相同MHC背景的PBMC可诱导出较高杀伤活性的EBV特异性CTL。

SLE患者血清EB病毒诱导基因2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平变化及临床意义

目的探讨EB病毒诱导基因2(EBI2)和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法选取SLE患者20例(观察组),体检健康者20例(对照组),采用ELISA法检测两组血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分,比较观察组SLEDAI<10分者和≥10分者血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。结果观察组血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(2.82±0.60)×10^(-1)、(158.8±22.62)×10^(-1)ng/m L,均高于对照组的(1.89±0.68)×10^(-1)、(89.92±23.78)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。观察组SLEDAI≥10分13例,SLEDAI<10分7例;SLEDAI≥10分者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(3.26±0.35)×10^(-1)、(183.78±17.41)×10^(-1)ng/m L,均高于SLEDAI<10分者的(2.20±0.25)×10^(-1)、(130.57±16.19)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。结论 SLE患者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平均升高,二者可能共同参与了SLE的发生、发展。

系统性红斑狼疮患者抗Sm抗体与EB病毒核抗原-2表达的相关分析

目的探讨EB病毒(EBV)阳性系统性红斑狼疮(SLE)患者EBV核抗原-2(EBNA2)表达与抗Sm抗体的相关性。方法SLE患者44例,正常人43名作为对照。①采用PCR-Southern杂交技术检测两组外周血单个核细胞中EBV特异性DNA片段,EBV阳性患者进行RT-PCR和Southern杂交检测EBNA2的表达。②ELISA法检测EBV特异性IgM抗体。③免疫印迹法检测血清可提取核抗原(ENA)抗体。结果①SLE组32例EBV阳性,其中EBNA2mRNA阳性20例(活动期9例,稳定期11例),EBNA2mRNA阳性率在活动期和稳定期患者差异无显著性(P>0.05)。②SLE组EBV特异性IgM抗体阳性率为18.18%(8/44),对照组均为阴性,两组有显著性差异(P<0.05)。③SLE抗Sm抗体检出率与EBNA2 mRNA检出率呈正相关(r=0.4107,P<0.05)。结论EBNA2 mRNA表达可能在一定程度上参与SLE的发病和病情进展。

QAD向华南理工大学捐赠软件

2005年3月18日，QAD公司宣布，向华南理工大学电子商务学院捐赠其价值不菲的旗舰产品——MFG／PROeB2管理软件，以便该院学生能更加实际地接触、操作和熟悉这款世界领先的管理软件，为日后的职业生涯增加宝贵的经验。同时，双方经过协商，将共同成立“企业信息化应用研究中心”，研究企业信息化在华南地区的发展之路。一同完善真正适合华南地区制造企业的信息化解决方案。

EBNA2在恶性淋巴瘤中的表达及意义

目的检测EB病毒核抗原-2(EBNA2)在恶性淋巴瘤标本中的表达,分析EBNA2在EB病毒(EBV)相关淋巴瘤发生中的意义。方法收集淋巴瘤组织蜡块50例和癌旁正常组织蜡块20例,采用免疫组织化学法检测组织中EBNA2的表达情况。结果 EBNA2在50例恶性淋巴瘤标本中的表达率为40. 0%(20/50),EBNA2在20例癌旁正常组织蜡块的表达率为0(0/50)。EBNA2在恶性淋巴瘤标本和癌旁正常组织中的阳性表达率的差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 EBNA2在恶性淋巴瘤标本中的表达上调,EBNA2的阳性表达率与肿瘤的组织类型及临床分期密切相关,而与淋巴瘤患者的性别和年龄无明显关系。

EBNA2基因在霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨EB病毒核心抗原2(EBNA2)基因在EB病毒(EBV)阳性霍奇金淋巴瘤(HL)患者的表达及临床意义。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测36例EBV阳性HL患者的全血及蜡块标本中EBNA2基因的表达,分析其在EBV阳性HL中的临床意义。结果全血和蜡块样本中各检出EBNA2基因12例(33.3%)和3例(8.3%)。在全部HL患者全血标本中,EBNA2基因在男性和女性患者中各检出5例和7例;在Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ和Ⅲ~Ⅳ期患者中各检出4例和8例;在早期患者无和有不良预后因素组中各检出1例和3例;在晚期患者低危、中危和高危组中各检出3例、5例和0例;在结节硬化型、富于淋巴细胞型、混合细胞型、结节性淋巴细胞为主型和淋巴细胞减少型中各检出5例、3例、3例、1例和0例;在有和无巨大肿块患者中各检出0例和12例。结论EBV阳性HL患者全血标本中EBNA2基因的检测可能优于蜡块标本;EBNA2基因的表达与EBV阳性HL患者的性别、Ann Arbor分期、病理组织学类型、有无巨大肿块和风险评分差异均无统计学意义。

霍奇金淋巴瘤患者血液中HLA-DPB1的表达与不同EBV状态关系的研究

目的研究不同EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)状态下霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma,HL)患者的血液标本中人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen,HLA)II类抗原DPB1的表达。方法取100例霍奇金淋巴瘤患者石蜡标本,用EBV编码的小RNA(Epstein-Barr virus encoded small RNA,EBER)原位杂交方法判定EBV表达状态(阳性/阴性),判定EBV阳性患者36例,取该36例患者血标本,用DNA直接测序分型法对血标本进行HLA-DBP1基因分型,用直接计数法计算基因频率,运用卡方检验分析EBV阳性与EBV阴性、EB病毒核抗原-2(Epstein-Barr virus nuclear protein 2,EBNA2)阳性与EBNA2阴性HL患者中HLA-DBP1基因表达情况。结果100例HL患者中EBER阳性患者36例,EBER阴性患者64例,EBV阳性与EBV阴性的HL患者在性别、年龄、组织学分型的分布差异均无统计学意义(P>0.05);在HL患者血液标本中,共检出16种HLA-DBP1等位基因,在EBV阳性HL中表达的有1种,在EBV阴性HL患者表达的有4种,两组患者共同表达的有12种,其中HLA-DPB1*050101(19.4%,25%)、HLA-DPB1*040101(29.2%,19.5%)、HLA-DPB1*020102(19.4%,14.1%)、HLA-DPB1*030101(6.9%,10.2%)表达频率较高(前者为EBV阳性基因频率)。HLA-DPB1*04:02:01基因频率在EBV阴性患者(13.3%)中高于阳性患者(4.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。余基因位点在两组患者中差异均无统计学意义(P>0.05)。HLA-DPB1*04:01:01基因频率在EBNA2阳性患者(45.8%)中高于EBNA2阴性患者(20.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLA-DPB1*04:02:01的表达可能增加罹患EBV阴性HL风险;HLA-DPB1*04:01:01可能为EBNA2阳性HL患者的易感因素。

传染性单核细胞增多症5例中EBNA2表达研究

目的:探讨EBNA2在传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis, IM)的诊断价值和表达模式。方法:收集陕西省人民医院2017年3月至2022年8月诊断的IM 5例,另选择2例EB病毒相关淋巴组织增殖性疾病(EBV-associated lymphoproliferative diseases, EBV + LPD)作为对照,回顾性分析其临床表现,组织形态,免疫表型,EBNA2表达情况及治疗和预后的情况。结果:患者男性1例,女性4例,中位年龄16岁,临床表现多以病毒感染相关的发热,扁桃体肿大,淋巴结肿大为主要症状。5例均有扁桃体肿大,颈部淋巴结肿大,1例伴有脾大。5例均符合IM的临床诊断标准,2例EBV + LPD病例符合系统性慢性活动性EBV感染(Chronic Active Epstein-Barr Virus Disease, CAEBV)同时合并嗜血细胞性淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH)的诊断标准。组织形态表现:在4例IM中淋巴结或者扁桃体中淋巴组织结构基本存在,滤泡散在分布,间区淋巴细胞显著增生,免疫母细胞样大细胞增多,并见较多胞浆丰富中等大小细胞以及浆细胞,形成谱系。在1例IM和2例CAEBV中淋巴结结构破坏,未见明显滤泡,免疫母细胞样大细胞呈片分布。原位杂交5例均EBER阳性。EBNA2在4例IM中阳性。在1例脾大和凝血功能异常的IM中阴性,在2例CAEBV合并HLH中阴性。EBNA2的表达模式分为2种:第一种是部分表达,阳性指数较高,以生发中心为主,第二种是散在表达在淋巴组织中,阳性率较低,与生发中心没有明确关系。治疗多采用休息,抗病毒治疗,抗生素的使用,糖皮质激素等综合治疗。本组病例随访时间:7~72个月,IM患者,均未复发,预后良好。结论:EBNA2在大部分IM中阳性,同时在CAEBV中阴性表达。IM中EBNA2阳性提示EBV初次感染,EBNA2阳性可以用来鉴别IM与EBV + LPD。

EB病毒潜伏膜蛋白2B表位特异性兔血清抗体的制备和鉴定

目的制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)串联B表位特异的兔血清多克隆抗体。方法利用分子克隆技术,将已鉴定的EBV LMP2蛋白的3个B细胞表位,即RIEDPPFNSLL,TLNLT和KSLSSTEFIPN,以柔性肽(GS)加以串联连接,经原核密码子优化后全基因合成,并经BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆至pET32a(+)载体,测序鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基硫代-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化表达产物,与佐剂乳化后皮下多点注射日本大耳白兔,隔周免疫1次,共3次。分别于免疫的0、2、4、6、8周取血,采用ELISA方法检测IgG抗体水平,采用Western blot和细胞免疫荧光法检测兔血清抗体的免疫反应性和结合特异性。结果 EBV LMP2B表位重组蛋白可通过原核表达系统进行表达,纯化的表达蛋白免疫兔可产生特异性IgG抗体,效价达1∶30 000。经Western blot法和细胞免疫荧光法鉴定,制备的兔血清抗体可识别LMP2重组蛋白和LMP2天然蛋白。结论成功获得了EBV LMP2串联B表位重组蛋白,制备的兔多克隆血清抗体效价高,特异性强,为LMP2的生物学和免疫学研究奠定了基础。

表达EBV LMP2的小鼠骨髓间充质干细胞免疫原性初讨

目的贴壁法分离小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察表达EBV LMP2蛋白的小鼠MSCs(MSCs-LMP2)体内诱导特异性CTL应答效果。方法贴壁培养法分离BALB/c小鼠MSCs,流式细胞术鉴定MSCs纯度。利用携带EBV LMP2基因的非复制重组5型腺病毒(Ad5-LMP2)感染已鉴定小鼠MSCs,制备表达EBV LMP2蛋白的MSCs-LMP2。使用MSCs-LMP2肌内注射的方式免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量6×105个细胞,免疫间隔为1周,连续免疫5次。末次免疫后1周分离小鼠脾淋巴细胞,Elispot方法检测EBV LMP2特异性CTL应答。结果贴壁培养法分离、纯化的小鼠骨髓MSCs纯度可达91.8%;Ad5-LMP2感染的MSCs能很好表达LMP2蛋白,形成MSCs-LMP2,MSCs-LMP2免疫同种小鼠后,在1×106个小鼠脾淋巴细胞中,诱导产生的LMP2特异性CTL能达到323个。结论贴壁培养法能够获得纯度较高的小鼠骨髓MSCs;LMP2修饰的MSCs(MSCs-LMP2)能诱导同种小鼠产生特异性CTL应答。

表达EB病毒潜伏膜蛋白2的C3-GFP-LMP2肿瘤细胞模型构建及免疫效果初探

目的构建表达EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)与绿色荧光蛋白(GFP)的C3-GFP-LMP2肿瘤细胞模型,观察肿瘤形成及LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)杀伤肿瘤细胞的效果。方法利用Lenti-X HTX慢病毒包装系统,构建携带LMP2及GFP基因的C3-GFP-LMP2肿瘤细胞。用Western blot及流式细胞术鉴定EBV LMP2蛋白表达及细胞纯度。用iCELLigence系统实时监测LMP2特异性小鼠脾脏淋巴细胞杀伤肿瘤细胞效果。4×107个肿瘤细胞皮下接种C57BL/6小鼠,免疫组化及荧光显微镜观察肿瘤组织中EBV LMP2及GFP蛋白表达。结果 C3-GFP-LMP2肿瘤细胞可以很好地表达LMP2和GFP蛋白,连续传代30次,细胞纯度仍可达94.8%;且LMP2特异性小鼠脾脏淋巴细胞杀伤C3-GFP-LMP2后细胞指数明显下降;此外,接种肿瘤细胞的小鼠均可形成肿瘤,很好地表达LMP2和GFP蛋白。结论 C3-GFP-LMP2肿瘤细胞模型可以稳定地表达EBV LMP2和GFP蛋白,有效地被LMP2特异性CTL杀伤,接种小鼠可以很好地形成肿瘤组织。该研究为EBV LMP2相关疫苗的抗肿瘤效果评价提供了候选肿瘤细胞。