近红外光谱结合化学计量学快速测定阿里红饮片中齿孔酸含量

传统的阿里红中齿孔酸含量测定采用高效液相色谱法(HPLC),但该方法前处理复杂,操作繁琐。为了实现对中药阿里红饮片中齿孔酸含量的快速无损监测,尝试建立基于近红外光谱(NIR)的偏最小二乘(PLS)回归模型。用来预测阿里红中齿孔酸的含量,采用传统的HPLC方法对阿里红中的齿孔酸含量进行测定,其结果作为指标值。采集近红外数据后使用五种光谱变换方法对光谱数据进行预处理,即多元散射校正(MSC)、标准正态变化(SNV)、Savitzky-Golay平滑(7点)、一阶导数变换(FD)和二阶导数变换(SD)。通过竞争自适应重加权法(CARS)进行波长选择并对PLS模型进行优化,大大减少了光谱变量的数量,并显著提高了PLS模型的性能,尤其是SNV-CARS-PLS模型,仅占总光谱波长的5.53%,预测集的R2值为0.9823,预测均方根误差(RMSEP)值为0.1037%,残差预测偏差(RPD)值为5.34。通过t检验表明:该最优模型与传统HPLC法在预测阿里红中齿孔酸含量上没有显著差异。研究结果表明:近红外光谱结合竞争性自适应重加权算法对波长筛选后建立偏最小二乘回归模型对阿里红饮片中齿孔酸含量的无损检测可行。

齿孔酸对高尿酸血症黄嘌呤氧化酶活性的影响

采用紫外分光光度法检测齿孔酸在体外对黄嘌呤氧化酶的作用,并进行动力学研究探讨其作用机制;采用酵母联合氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠模型,观察齿孔酸对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平、血清黄嘌呤氧化酶活性、肝脏黄嘌呤氧化酶活性及血糖血脂的影响。研究发现,齿孔酸体在外能抑制黄嘌呤氧化酶活性,降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平、血清黄嘌呤氧化酶活性、肝脏黄嘌呤氧化酶活性,同时明显降低空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平,提高口服糖耐受量。结果表明,齿孔酸是黄嘌呤氧化酶竞争性抑制剂,还能缓解高尿酸血症小鼠糖脂代谢紊乱,对高尿酸血症及痛风的防治具有潜在意义。

长毛囊孔菌发酵液化学成分研究

目的研究长毛囊孔菌(Trametes versatillis. Berk)液体深层发酵产生次生代谢产物。方法利用常规色谱分离技术对长毛囊孔菌发酵液和菌丝体的提取物进行分离。结果分离鉴定了7个化合物,经波谱分析分别鉴定为D-阿洛醇(1)、3β-羟基-麦角甾-5,7,22-三烯(2)、3β-羟基-5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯(3)、eburicoic acid(4)、3β-羟基-5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯(5)、tumulosic acid(6)和软脂酸-α-甘油酯(7)。结论以上化合物都为长毛囊孔菌中首次报道,且三萜化合物在长毛囊孔菌发酵液及发酵菌丝中含量较大,具有一定的深入研究价值。

阿里红中齿孔酸和总三萜酸的含量测定

目的建立阿里红中齿孔酸及其总三萜酸的含量测定方法。方法采用紫外-可见分光光度法测定总三萜酸含量;采用HPLC测定齿孔酸含量。色谱柱为RP-C18柱(4.6 mm×250 mm,5?m);流动相为乙腈-0.4%磷酸(68∶32),检测波长210 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃。结果 3批阿里红药材中齿孔酸含量分别为2.3%,2.6%,3.1%;总三萜酸含量分别为27.2%,32.1%,35.9%。结论所建立的分析方法准确、简便,可为定量评价阿里红药材的质量提供依据。

齿孔酸对大鼠佐剂型关节炎的影响

目的:研究齿孔酸对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:从硫磺菌中提取分离齿孔酸;大鼠右后足跖注射弗氏佐剂造模,齿孔酸(16、32mg/kg))和齐墩果酸(50mg/kg)灌胃给药,足容积法测量致炎侧足肿胀、进行关节评分;光学显微镜观察关节滑膜病理变化;ELISA法检测大鼠关节组织中的白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blotting检测关节组织中磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)和核转录因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白表达水平。结果:大鼠致炎后14天关节肿胀度达峰值,可见模型组关节滑膜组织炎症反应,如滑膜组织增生、炎细胞浸润、关节组织中IL-6、TNF-α水平明显上升,关节组织中p-PI3K、p-Akt和NF-κBp65蛋白表达水平明显升高;用齿孔酸(16、32mg/kg))和齐墩果酸(50mg/kg)治疗后,能显著抑制AA大鼠足爪肿胀、降低多发性关节评分及改善关节滑膜组织病理变化,降低了滑膜组织病理评分,降低AA大鼠关节组织中IL-6和TNF-α水平及关节组织中p-PI3K、pAkt和NF-κBp65蛋白表达水平。结论:齿孔酸具有显著的抗炎作用,其抗炎作用可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活来实现。

硫磺菌液体培养条件的优化研究

以齿孔酸含量为评价指标,进行硫磺菌液体培养的培养基条件优化和硫磺菌菌丝体中齿孔酸含量检测方法研究.以葡萄糖、黄豆粉、KH2PO4、干木瓜为液体培养基成分,采用正交试验法设计确定培养基中上述各组分的最佳配比.用此条件进行硫磺菌液体培养15d后,收集硫磺菌菌丝体,采用反相高效液相色谱法,色谱柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈10%~100%,超纯水90%~0%,为流动相进行梯度洗脱;柱温25℃;检测波长：203nm;流速1.00mL/min,运行时间40min,以齿孔酸为对照测定硫磺菌菌丝体中齿孔酸含量.结果表明硫磺菌液的最佳配比为：葡萄糖15g/L、黄豆粉1.5g/L、KH2PO42.0g/L、木瓜煎液（相当于干木瓜）100g/L;硫磺菌菌丝体总干重为3.35g,其齿孔酸总含量为23.98mg.研究所建立的硫磺菌液体培养的培养基条件简单可行;硫磺菌菌丝体中齿孔酸检测方法稳定性、精密度、重复性良好,适用于硫磺菌中齿孔酸的含量测定.

茯苓抑制小肠收缩的作用机制

目的:研究茯苓抑制小肠收缩的作用及其机制。方法:采用离体小肠灌流技术,以平均肌张力为指标评价小肠收缩活性。小鼠离体小肠恢复自发收缩后,累积加入茯苓提取液,观察茯苓对离体小肠自发性收缩的影响;分别以乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、氯化钡(BaCl2)和氯化钙(CaCl2)致离体小肠痉挛性收缩,累积加入茯苓提取液,观察茯苓对不同工具药导致的小肠痉挛性收缩的影响;以阿托品(atropine)预孵育离体小肠,观察阻断M受体对茯苓抑制小肠收缩作用的影响;利用分子对接技术将茯苓中的33个化学成分与M胆碱能受体(ID:3UON)进行分子对接,计算结合自由能,进一步从分子层面揭示其作用机制。结果:茯苓能够明显抑制离体小肠自发收缩,抑制Ach、BaCl2、CaCl2所致离体小肠痉挛性收缩;阻断M受体后,茯苓对Ach所致小肠收缩的抑制作用明显减弱;分子对接结果表明,茯苓中齿孔酸、松苓酸A、3-氢化松苓酸等多种成分能够与M受体结合。结论:茯苓抑制离体肠收缩的机制可能与阻断M受体有关,其中齿孔酸、松苓酸A、3-氢化松苓酸可能是茯苓抑制小肠收缩的主要活性成分。

粗毛纤孔菌子实体化学成分

采用多种层析分离手段从粗毛纤孔菌子实体甲醇提取物中分离得到麦角甾醇、7(8),22(23)-二烯-3-酮-麦角甾烷、(22E,24R)-5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、齿孔酸、Hispidin、Hispolon、次黄嘌呤核苷、InoscavinC和原儿茶酸10个单体化合物;通过气质联机分析,黄色油状物鉴定为12个脂肪酸衍生物、2,6,10,15,19,23-六甲基菠菜烯和二十二烷。

高山绚孔菌化学成分研究

目的：研究高山绚孔菌子实体化学成分。方法：采用柱色谱手段，结合波谱方法（MS，NMR）分离鉴定高山绚孑L菌子实体的化学成分。结果：从高山绚孔菌的氯仿提取物和醋酸乙酯提取物中分离得到11个单体化合物，分别为麦角甾醇过氧化物（1），麦角甾．7，22-二烯-3β-醇（2），啤酒甾醇（3），麦角甾醇（4），麦角甾-7，22-二烯-3-酮（5），阿里红酸A（6），硫色多孔菌酸（7）（4E，8E）-N-D-2’-羟基棕榈酰-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-9-甲基-4，8-sphingadienine（8），N-（2＇-羟基二十四碳酰基）-1，3，4-三羟基-2-氨基-十八烷（9），烟酸（10）和齿孔酸（11）。结论：化合物3，5，6，8—10首次从该真菌中分离得到。