松果菊苷调节HIF-1α/BNIP3信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬的影响

目的 探讨松果菊苷调节低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)/BCL2相互作用蛋白3(BCL2 interacting protein 3,BNIP3)信号通路对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)大鼠线粒体自噬的影响。方法 采用大脑中动脉闭塞术(Middle cerebralartery occlusion, MCAO)建立大鼠CIRI模型,将造模成功大鼠分为模型组、松果菊苷组、2-ME2(HIF-1α抑制剂)组、松果菊苷+2-ME2组,每组各15只;另取15只大鼠设置为假手术组;药物干预7 d后用改良大鼠神经功能损伤评分(Modified neurological severity score, mNSS)评价各组大鼠神经功能损伤程度;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测脑梗死体积;干湿重法检测脑含水量;电镜观察大鼠梗死侧海马组织神经细胞(Hippocampal neuron cells, PPNCs)微观结构;流式细胞仪检测线粒体膜电位;Western blot检测大鼠梗死侧海马组织HIF-1α,BNIP3表达水平及微管相关蛋白1A/1B-轻链3(MAP1LC3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量均显著升高,PPNCs水肿,线粒体肿胀、线粒体膜电位、HIF-1α,BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著降低(P<0.05);与模型组比较,松果菊苷组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量均显著降低,PPNCs状态良好,存在线粒体自噬小体,线粒体膜电位、HIF-1α,BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著升高(P<0.05);2-ME2组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量均显著升高,PPNCs水肿,线粒体肿胀,线粒体膜电位、HIF-1α,BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著降低(P<0.05)。与松果菊苷组比较,松果菊苷+2-ME2组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量均显著升高,PPNCs水肿,线粒体肿胀,线粒体膜电位、HIF-1α,BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著降低(P<0.05);与2-ME2组比较,松果菊苷+2-ME2组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量均显著降低,PPNCs水肿及线粒体肿胀减轻,线粒体膜电位、HIF-1α,BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著升高(P<0.05)。结论 松果菊苷可能通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路来促进CIRI大鼠线粒体自噬,从而减轻大鼠CIRI。

松果菊苷调节CXCL12/CXCR4信号通路对牙髓干细胞增殖、迁移和分化的影响

目的:探讨松果菊苷(ECH)调节CXC趋化因子配体12(CXCL12)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对牙髓干细胞(DPSCs)增殖、迁移和分化的影响。方法:以DPSCs为研究对象,分别经不同浓度(0.01 mg·mL^(-1)、0.1 mg·mL^(-1)、1 mg·mL^(-1))的ECH处理,记为ECH低浓度(ECH-L)组、ECH中浓度(ECH-M)组、ECH高浓度(ECH-H)组;以1 mg·mL^(-1)ECH、100 nmol·L-1AMD3100同时处理DPSCs,记为ECH-H+AMD3100组,并以未经处理的DPSCs为空白对照组;MTT法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移;Western blot检测CXCL12、CXCR4蛋白表达;成骨诱导21 d后,茜素红S染色评估矿化结节形成;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒分析ALP活性;qRT-PCR检测牙本质基质蛋白1(DMP1)、骨钙素(OCN)、ALP mRNA表达水平。结果:与空白对照组相比,ECH-L组、ECH-M组、ECH-H组CXCL12、CXCR4蛋白表达、迁移数、ALP含量、矿化结节含量、A_(450)值、DMP1、OCN、ALP mRNA表达水平显著增加,不同浓度ECH间均具有统计学差异(P<0.05);与ECH-H组相比,ECH-H+AMD3100组CXCL12、CXCR4蛋白表达、迁移数、ALP含量、矿化结节含量、A_(450)值、DMP1、OCN、ALP mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:ECH通过上调CXCL12/CXCR4信号通路促进DPSCs增殖、迁移和分化。