松果菊苷对尿毒症大鼠肾损伤的影响及机制

目的研究松果菊苷(ECH)对尿毒症(URE)大鼠肾损伤的影响及机制。方法采用5/6肾切除法建立URE大鼠模型。建模成功的大鼠分为尿毒症(URE)组、ECH低剂量[10 mg/(kg·d)]组、ECH中剂量组[20 mg/(kg·d)]、ECH高剂量组[40 mg/(kg·d)]和ECH高剂量+茴香霉素[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路激活剂]组[ECH-H+Ani组,40 mg/(kg·d)ECH+2 mg/(kg·d)茴香霉素],另设假手术组,每组12只。各药物组灌胃相应的ECH,ECH-H+Ani组再尾静脉注射茴香霉素,每天1次,连续给药8周。检测大鼠血清中肿瘤细胞因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、血尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(Scr)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、胱抑素C(Cys-C)水平,24 h尿蛋白(24 h UP)和肾组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性;观察肾组织病理学变化;检测大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-上皮钙黏素(E-cadherin)阳性表达率和p38 MAPK、核因子κB(NF-κB)p65的磷酸化水平。结果与URE组相比,ECH各剂量组大鼠肾小球肿胀及上皮细胞损伤坏死明显减轻,炎症细胞浸润明显减少;肾损伤评分和TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Scr、β2-MG、24 h UP、NGAL、KIM-1、Cys-C、MDA水平及α-SMA阳性表达率、p38 MAPK和NF-κB p65的磷酸化水平均呈剂量依赖性降低而SOD活性和E-cadherin阳性表达率均呈剂量依赖性升高(P<0.05)。茴香霉素可显著逆转高剂量ECH对URE大鼠肾损伤及相关指标的改善作用(P<0.05)。结论ECH可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路激活来抑制URE大鼠的炎症反应和氧化应激反应,增强肾功能,改善肾损伤。

松果菊苷调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的探讨松果菊苷调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将肺癌HCC827细胞分为对照组、松果菊苷低、高剂量组、松果菊苷高剂量+LiC1(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)组、FH535组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)。克隆形成实验检测细胞克隆能力;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Ki-67、MMP-9、Caspase-3、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达。结果与对照组比较,松果菊苷低、高剂量组和FH535组HCC827细胞克隆形成率、划痕愈合率与侵袭个数、N-cadherin、vimentin、Ki-67、MMP-9、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、E-cadherin、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);LiC1可部分逆转松果菊苷对HCC827细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05);FH535组HCC827细胞各项检测指标与松果菊苷高剂量组处于同一水平(P>0.05)。结论松果菊苷可抑制HCC827细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并促进细胞凋亡,进而抑制肺癌细胞的恶性生物学行为,可能是通过阻断Wnt/β-catenin信号通路实现的。

松果菊苷对细胞外组蛋白介导的细胞损伤及红细胞和血小板聚集的保护作用

目的:探讨松果菊苷(ECH)对细胞外组蛋白介导的细胞损伤以及红细胞和血小板聚集的保护作用。方法:采用Calcein-AM和PI双染色法考察ECH与组蛋白共同使用时对组蛋白介导人微血管内皮细胞(HMEC)毒性作用影响以及ECH介导的HMEC损伤的逆转作用;考察ECH对组蛋白诱导的小鼠红细胞聚集作用的影响;进一步考察了ECH对组蛋白介导小鼠体内生物标志物(ALT、LDH、Crea)以及血液学参数(白细胞、血小板、红细胞、血红蛋白)变化的影响。结果:ECH对组蛋白介导的HMEC损伤作用呈剂量依赖性保护作用,并且ECH(100μg/mL)处理10min后可部分逆转组蛋白介导的HMEC细胞毒性作用;组蛋白可以加速未经处理的红细胞的自然聚集率,而加入200μg/mL的ECH溶液对红细胞聚集具有明显的抑制作用;ECH可以剂量依赖性的抑制血清中生物标记物循环丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酐(Crea)表达,并显著增加小鼠体内的循环血小板、白细胞、红细胞和血红蛋白数量。结论:ECH可减轻组蛋白介导的细胞毒性,并抑制组蛋白介导的红细胞凝集以及血液学参数变化,ECH体外实验加上相关的体内模型,证实其可通过与细胞外组蛋白作用从而降低脓毒症患者器官损伤和死亡率的治疗潜力。

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只:分别为模型组,松果菊苷(ECH)12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片(Sta)组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白(β-catenin)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型组小鼠主动脉β-cateninmRNA表达水平高于对照组,ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组β-cateninmRNA表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠模型组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平高于对照组,ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠主动脉LRP5蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组LRP5蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论ECH可以有效改善小鼠动脉粥样硬化血管钙化的发生与发展,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

松果菊苷对便秘小鼠的通便作用及其机制

目的 探讨松果菊苷对便秘小鼠的通便作用及其机制。方法 KM小鼠分为对照组、模型组和松果菊苷低、高剂量组(30、70 mg/kg),每组8只,除对照组外,其余各组小鼠用洛哌丁胺灌胃法构建便秘模型。记录小鼠排便次数、粪便粒数和粪便含水量,钡餐推进法评估小肠转运率,HE染色观察结肠组织形态,试剂盒检测结肠组织SOD、GSH-Px活性及IL-1β、TNF-α水平,免疫荧光法检测结肠组织AQP3蛋白表达,Western blot法检测结肠组织SR4、SP、VIP、AQP3、CFTR、PKA蛋白表达。结果 与模型组比较,松果菊苷各剂量组小鼠排便频率、粪便颗粒数、粪便含水量、肠道转运率,以及结肠组织SOD、GSH-Px活性和SR4、SP、AQP3、CFTR、PKA蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织病理损伤得到改善,IL-1β、TNF-α水平和VIP蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 松果菊苷对便秘小鼠具有通便作用,可能与减轻肠道氧化应激及炎症反应、改善肠神经递质异常和增加结肠组织AQP3表达有关。

基于降解动力学模型的二至丸的活性成分松果菊苷稳定性研究

目的 建立苯乙醇苷类成分-松果菊苷单体及其在二至丸中的降解动力学模型,研究制剂对活性成分的影响。方法 使用超高效液相色谱法(UPLC)测定不同环境干扰下的松果菊苷(单体、二至丸)含量变化,并建立其降解动力学模型。结果 松果菊苷(单体、二至丸)在多种条件下可发生降解,在不同环境干扰下降解规律可归为(伪)一级反应;制剂形式下的松果菊苷降解速度较松果菊苷单体慢。结论 松果菊苷更适合储存在干燥、低温、避光条件下,尽量避免与碱性溶液、铁器接触;二至丸制剂能够延缓松果菊苷单体在多种条件下的降解。

松果菊苷药理作用及机制的研究进展

松果菊苷(echinacoside,ECH)为苯乙醇苷类化合物,存在于多种植物中,为极具潜力的中药成分,应用前景广阔。现代药理研究表明ECH具有许多的生物学效应,如神经保护作用、心肌保护作用、肝脏保护作用、抗肿瘤、抗氧化抗衰老,同时还有免疫调节、降糖降脂、促进生殖和骨形成、保护肺血管以及预防动脉粥样硬化等药理作用,可用于多个系统疾病的治疗,对其进行药效机制的进一步探究和开发具有重要意义。因此,该文就近几年来对ECH的药理作用及作用机制研究进行了归纳总结,并对其研究现状及未来方向提出了建议,以期为其进一步深入研究及开发利用提供一定的参考价值。

HPLC法测定便通凝胶贴膏中松果菊苷含量

目的:建立便通凝胶贴膏中松果菊苷的测定方法,以便控制便通凝胶贴膏的质量。方法:根据《中国药典》一部中肉苁蓉高效液相色谱法测定;以甲醇为流动相A、1%的醋酸溶液为流动相B、进行梯度洗脱,以DikmaDiamonsil(钻石C185μm,250×4.6mm)为色谱柱,流速为1mL·min^(-1),柱温30℃,进样量20μL,检测波长为332nm。结果:松果菊苷浓度在0.6μg·mL^(-1)~45.0μg·mL^(-1)的范围内线性关系良好,回归方程为:y=11594x-516.3,R^(2)=0.9990;回收率为100.96~98.96,RSD=1.0%。结论:本方法符合测定要求,可用于便通凝胶贴膏中松果菊苷的含量测定。

松果菊苷下调Skp2的表达抑制胶质母细胞瘤上皮间质转化及胶质瘤干细胞干性

目的研究松果菊苷(ECH)对胶质母细胞瘤(GBM)的上皮间质转化(EMT)及其对GBM干细胞的影响,并探讨其分子机制。方法①体外实验:将GBM U87和U251细胞以0、5、10和20μmol·L^(-1) ECH浓度处理24 h。采用CCK-8法评估细胞活性;进行克隆形成实验以测定克隆能力;通过Transwell实验评估迁移和侵袭能力;利用球形成实验评价GBM干细胞的成球能力;通过细胞免疫荧光检测干细胞标志物;使用Western blot分析EMT和干细胞相关蛋白表达。②体内实验:在裸鼠皮下注射U87细胞,每组5只。实验组腹腔注射ECH,对照组注射等体积溶剂。最后测定肿瘤体积、重量和体重,并用Western blot分析肿瘤中的Skp2、EMT和干细胞相关蛋白表达。结果①体外实验显示,相较于0μmol·L^(-1) ECH组,10、20μmol·L^(-1) ECH处理显著降低了细胞活性(P<0.05);在5、10和20μmol·L^(-1) ECH组中克隆形成数量显著减少(P<0.05);迁移和侵袭能力在5、10μmol·L^(-1) ECH组中随浓度升高而降低(P<0.05);成球能力和干细胞标志物表达及Skp2、EMT和干细胞特性相关蛋白表达在5、10μmol·L^(-1) ECH组中均显著降低(P<0.05)。②体内实验显示,ECH处理小鼠的肿瘤体积和重量显著小于对照组(P<0.05),且Skp2、EMT(Vimentin、Snail)和干细胞标志物(Sox2、Nestin)的表达显著减少(P<0.05);两组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。结论ECH通过降低Skp2表达抑制GBM的EMT和干细胞特性。

高效液相色谱法同时测定苁蓉通便口服液中松果菊苷和二苯乙烯苷的含量

建立同时测定苁蓉通便口服液样品中松果菊苷和二苯乙烯苷含量的HPLC方法。采用Tech Mate C18-ST(4.6 mm×250.0 mm,5µm)色谱柱;利用乙腈-0.2%甲酸溶液进行梯度洗脱;检测波长330 nm;流速1.0 mL/min。结果显示,苁蓉通便口服液中的松果菊苷和二苯乙烯苷与相邻色谱峰分离度良好,松果菊苷和二苯乙烯苷分别在0.1593~0.9558µg和0.3853~4.6235µg范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.28%、98.43%(RSD<2.0%),10批苁蓉通便口服液中2种成分的含量分别为7.70~8.35 mg/mL和8.80~14.70 mg/mL。该方法操作简单、准确,可用于苁蓉通便口服液中松果菊苷和二苯乙烯苷的含量测定。

松果菊苷通过IL-33/STAT轴对脓毒症大鼠急性肾损伤的保护作用及机制研究

目的 探究松果菊苷对脓毒症大鼠急性肾损伤(AKI)的保护作用,并探讨可能机制。方法 55只SPF级SD大鼠中随机选择10只设为对照组;剩余45只大鼠建立脓毒症模型,成功40只,并将其随机分为模型组、松果菊苷低剂量组、松果菊苷中剂量组、松果菊苷高剂量组,每组各10只。松果菊苷低、中、高剂量组尾静脉注射松果菊苷(分别为25、50、100 mg/kg),对照组、模型组注射等量DMSO,术后6、12、18 h分别给药一次。流式细胞术检测外周血Th1、Th2构成比;检测血清炎症因子;检测血清肾功能指标;HE染色观察肾组织病理学变化;免疫印迹法检测肾组织白介素-13(IL-13)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导及转录激活子3(STAT3)、p-STAT3蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示,对照组肾组织结构完整,形态正常;模型组肾组织结构严重破坏,肾小球基质增多、系膜区增厚,可见大量炎性细胞浸润;松果菊苷低、中、高剂量组系膜区增厚减轻,炎性细胞浸润减少,中、高剂量组改善更加明显。与模型组比较,松果菊苷低、中、高剂量组外周血Th2构成比、血清IL-6、IL-8、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平、肾组织IL-33蛋白表达、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,Th1构成比、Th1/Th2升高(P<0.05)。与松果菊苷低剂量组比较,松果菊苷中剂量组外周血Th2构成比、血清IL-6、IL-8、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平、肾组织IL-33蛋白表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,Th1构成比、Th1/Th2升高(P<0.05)。与松果菊苷中剂量组比较,松果菊苷高剂量组外周血Th2构成比、血清IL-6、IL-8、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平、肾组织IL-33蛋白表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,Th1构成比、Th1/Th2升高(P<0.05)。结论 松果菊苷可修复免疫系统动态平衡、抑制炎症反应、保护肾功能,推测其作用机制可能与抑制IL-33/STAT轴活性有关。

松果菊苷对骨质疏松症模型小鼠破骨细胞活性的影响

目的研究松果菊苷(ECH)对骨质疏松症(OP)模型小鼠破骨细胞活性的影响。方法选取10周龄雌性C57/BL6小鼠28只,随机分为假手术(Sham)组、OP组和ECH低、高剂量组,每组7只。OP组和ECH两组小鼠通过去除双侧卵巢建立OP模型,之后ECH两组分别采用10、20 mg/kg ECH进行腹腔注射干预,2 d/次,连续干预8周后,处死各组小鼠获取完整的股骨。股骨远端切片后进行阿利新蓝(ABH)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色以及免疫组化检测组织蛋白酶K(CTSK)、核因子κB磷酸化P65(NF-κB p-P65)蛋白表达情况。结果股骨远端ABH染色:与Sham组比较,OP组股骨远端骨小梁变薄、稀疏,髓腔内脂肪细胞堆积;与OP组比较,ECH组股骨远端骨小梁数量增加,骨小梁变粗,髓腔内脂肪细胞减少,尤其是高剂量组ECH作用更加明显。股骨远端TRAP染色:与Sham组比较,OP组股骨远端破骨细胞分化显著增加[(6.79±0.66)N.Oc/T.A比(2.15±0.28)N.Oc/T.A,P<0.01];与OP组比较,ECH低、高剂量组股骨远端破骨细胞分化减少,尤其是高剂量组ECH抑制作用更加明显[(4.35±1.03)N.Oc/T.A、(3.75±0.60)N.Oc/T.A比(6.79±0.66)N.Oc/T.A,P<0.01]。股骨远端免疫组化(CTSK、NF-κB p-P65)染色:与Sham组比较,OP组股骨远端CTSK、NF-κB p-P65表达显著上调[CTSK:(0.031±0.005)%比(0.010±0.003)%;NF-κB p-P65:(0.013±0.002)%比(0.003±0.003)%;P<0.01];与OP组比较,ECH低、高剂量组股骨远端CTSK、NF-κB p-P65表达显著下调,高剂量组ECH抑制作用更加明显[CTSK:(0.018±0.002)%、(0.015±0.003)%比(0.031±0.005)%;NF-κB p-P65:(0.009±0.001)%、(0.007±0.002)%比(0.013±0.002)%;P<0.01]。结论ECH可能通过抑制NF-κB信号通路,减弱破骨细胞活性,改善OP模型小鼠骨量丢失。

松果菊苷对db/db糖尿病心肌病小鼠心肌细胞凋亡的改善作用

目的探讨肉苁蓉提取物松果菊苷(echinacoside,ECH)对db/db糖尿病心肌病小鼠心肌细胞的保护作用及其作用机制。方法选取29只SPF级6周龄雄性db/db小鼠和db/m小鼠适应性饲养1周后,按照随机数字表法取9只db/m小鼠作为正常对照组(db/m组,n=9),将db/db小鼠分为糖尿病心肌病组(db/db组,n=10)与ECH干预组(db/db+ECH组,n=10)。其中db/db组和db/m组小鼠每日按照0.05ml/10g标准行0.9%氯化钠溶液灌胃10周。db/db+ECH组小鼠按ECH 300mg/(kg·d)灌胃10周。每周监测3组的小鼠体质量,观察小鼠摄食、饮水及活动情况。于鼠龄第18周用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠并处死,取尾静脉血测定空腹血糖和血脂。采用苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察心肌组织病理改变,采用TUNEL染色法测定心肌细胞凋亡率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、p38MAPK、caspase-3和caspase-8的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定心肌细胞p53m RNA、p38MAPK mRNA和caspase mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA的表达水平。结果与db/m组比较,db/db组小鼠的体质量、血糖和血脂水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。HE染色结果显示,与db/m组比较,db/db组小鼠的心肌细胞可见明显肥大、坏死,心肌细胞排列结构紊乱;而db/db+ECH组小鼠的心肌细胞形态有所缓解,细胞间隙减少,排列较规则。TUNEL染色结果显示,与db/m组比较,db/db组小鼠的心肌细胞凋亡程度显著增高(P<0.01),同时伴有p53蛋白、p38MAPK蛋白、caspase-3和caspase-8蛋白表达量显著升高(P<0.01),且p53mRNA、p38MAPK mRNA和caspase mRNA、Bax mRNA表达量明显上升,Bcl-2mRNA水平下调(P<0.01)。与db/db组比较,db/db+ECH组小鼠上述指标均有明显降低,且TUNEL染色观察小鼠心肌细胞凋亡指数显著下降(P<0.01)。结论ECH能够明显改善db/db小鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与通过p53/p38MAPK/caspase信号通路有关。

管花肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定

目的:采用高效液相色谱法,测定管花肉苁蓉野生种和栽培种以及人工种植不同寄主、不同大小药材的有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷含量。方法:AgilentEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇-乙腈-1%醋酸(15:10:75),流速0.6mL·min-1,柱温30℃,检测波长334nm。结果:松果菊苷在0.904-9.04μg呈良好线性关系,回归方程为Y=2.000×106X-114800(r=0.9999),毛蕊花糖苷在1.27-12.7μg呈良好线性关系,回归方程为Y=3.000×106X-243200(r=0.9999),加样回收率松果菊苷平均为98.9%(n=5,RSD1.9%);毛蕊花糖苷平均为97.0%(n=5,RSD0.97%)。结论:本法用于管花肉苁蓉的测定简便、快速、灵敏、重复性好,所测样品中有效成分松果菊苷比毛蕊花糖苷的含量均高,野生种的2种有效成分含量均比栽培种的高,将样品以个体长度分成大、中、小3种不同样品,所测结果表示其含量按大、中、小依次增加,不同寄主间的含量差异很大,为评价管花肉苁蓉的药材质量提供一定的依据。

松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨肉苁蓉提取物松果菊苷对TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法 用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase 3的活性。结果 100μg·L-1 TNFα处理细胞 36h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达37%;细胞内活性氧水平及caspase 3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低,红 /绿荧光强度的比值由正常的 5 97降低为 0 35左右。而预先给予 1, 10或者 100mg·L-1浓度的松果菊苷处理细胞 2h,可提高细胞存活率;并可有效抑制DNAladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25 9%, 18 3% 和 8 2%;激光共聚焦显微镜结果显示松果菊苷可明显抑制细胞内活性氧产生;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase 3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性。结论 松果菊苷能抑制TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase 3的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关。

HPLC同时测定肉苁蓉药材中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量

目的建立RP-HPLC同时测定肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量.方法采用HP-1100色谱系统和YMC-PackODS-A柱(5μm,25mm×4.6 mm);以CH3CN-MeOH-1%HAc(10:15:75)为流动相,流速0.7mL·min-1,检测波长为334nm,柱温:30℃.结果松果菊苷进样量在0.12～1.47μg内、毛蕊花糖苷在0.18～2.16μg内与峰面积呈良好线性关系,相关系数均为0.9999;平均回收率分别为98.87%和97.01%.结论本方法简便,精密度、重现性良好,结果准确可靠.可用于肉苁蓉药材、饮片及其制剂的含量测定.

肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的植物雌激素活性研究

研究肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的雌激素活性。采用荧光素酶报告质粒法检测受试药物松果菊苷和毛蕊花糖苷的雌激素活性;利用雌激素受体竞争性结合实验和荧光素酶报告质粒法,检测松果菊苷和毛蕊花糖苷与雌激素的竞争性作用。松果菊苷和毛蕊花糖苷有上调雌激素应答元件(ERE)活性,和雌激素共同作用可以拮抗雌激素对ERE的上调作用。松果菊苷和毛蕊花糖苷通过上调ERE荧光素酶活性而表现出植物雌激素活性,可作为候选SERMs。

RP－HPLC法测定不同寄主和不同产地肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷的含量

目的：测定不同寄主和不同产地肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷含量。方法：采用反相高效液相色谱法，SUPELCOSIL LC-18色谱柱(250mm×4．6mm，5μm)。测定松果菊苷用流动相A：乙腈-水-冰醋酸(13：86：1)；测定麦角甾苷用流动相B：甲醇-水-冰醋酸(32：67：1)。流速：1．0mL·min^-1，检测波长分别为335nm、334nm。柱温：40℃。结果：松果菊苷和麦角甾苷分别在0．04-0．28μg(r=0．9998)和0．04-0．40μg(r=0．9992)内呈良好线性关系，平均加样回收率分别为97．6％和99．1％，RSD均为1．2％。结论：方法准确可靠，重现性好，可用于肉苁蓉的质量评价。

松果菊苷对血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的保护作用

目的研究松果菊苷(ECH)对血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的保护作用。方法采用间隔3 d分2次结扎大鼠双侧颈总动脉法制备血管性痴呆(VD)模型;给药后,采用生化方法测定皮层及海马组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)的活力;HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠海马组织CA1区组织结构的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠的皮层及海马组织中的GSH含量以及GSH-Px的活力明显下降(P<0.01),NO含量及NOS的活力明显升高(P<0.05,P<0.01),海马CA1区细胞数目减少,细胞排列紊乱稀疏,细胞形态不完整,结构不正常,胞质稀少,胞核与胞质界限模糊,细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显,并出现增生胶质细胞;与模型组比较,各给药组大鼠皮层及海马组织中的GSH含量以及GSH-Px的活力有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01),NOS的活力有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),同时大鼠海马CA1区神经元排列较为整齐,结构相对正常,核固缩现象减少,深染程度降低;与阳性药组以及假手术组比较,ECH高剂量组的皮层及海马组织中GSH、NO含量,GSH-Px、NOS的活力差异均无显著性(P>0.05),且ECH高剂量组海马CA1区神经元损伤程度低,更接近于假手术组。结论松果菊苷对血管性痴呆大鼠氧化应激损伤有较好的保护作用。