将RGD模体改变为RGDNM可减弱Echistatin对血小板聚集的抑制但增强血管新生的抑制作用

为了研究去整合素echistatin RGD(Arg-Gly-Asp)模体周边氨基酸突变后对其生物学功能的影响,根据echistatin序列设计合成6个片段,利用重叠延伸PCR法合成cDNA,使echistatin RGD模体周边序列变为ARGDNM(D27→N),与载体pTXB1连接后转化E.coliBL21(DE3),建立echistatin(ARGDNM)的表达体系.工程菌经IPTG诱导后融合蛋白表达量占菌体总蛋白约30%,几丁质亲和纯化后,DTT裂解释放目的蛋白分子量约5.4kD.体外血小板聚集和体内鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生实验结果表明,echistatin(ARGDNM)抑制血小板聚集的作用减弱,而其抑制血管新生的作用增强.RGD模体周围氨基酸的改变影响了去整合素的生物学功能,echistatin(ARGDNM)增强了与αⅤβ3结合的特异性,本工作为研究特异性更强的去整合素药物奠定了基础.

Echistatin对人增生性瘢痕成纤维细胞的作用研究

目的研究Echistatin对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,设Echistatin处理组和对照组,MTT法、流式技术及RT-PCR法检测人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果Echistatin可明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进凋亡,降低Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结论Echistatin可作为防治增生性瘢痕的筛选药物。

去整合素echistatin对人晶状体上皮细胞增生、黏附、移行的影响

背景随着白内障手术的广泛开展，后发性白内障（PCO）的发病率逐渐升高，近年来的研究证实，去整合素类药物对PCO有抑制作用。目的探讨去整合素echistatin（Ecs）对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01／04增生、黏附和移行的影响。方法取对数生长期的SRAOI／04细胞，培养液中加入不同质量浓度的去整合素Ecs（0、2．5、5．0、7．5、10．0、15．0、20．0mg／L）共培养细胞24、48、72h，用MTT法检测药物对细胞增生的影响及药物作用90rain后对细胞黏附的影响；对融合的细胞进行划痕试验，在倒置显微镜下观察并测量划痕宽度，干预培养24h、48h后测量记录划痕愈合情况。结果不同质量浓度去整合素Ecs（2．5、5．0、7．5、10．0、15．0、20．0mg／L）作用24、48、72h后对SRA01／04细胞增生的抑制率分别为2．6％、15．4％、21．2％、34．7％和46．1％、58．2％，6．6％、21．9％、38．2％、50．0％、60．7％、76．9％以及9．8％、29．0％、46．6％、63．4％、69．1％、92．4％。除2．5mg／L组外，各质量浓度组吸光度（A490）值与0mg／L组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），且随Ecs作用时间的延长，细胞的A490值逐渐下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；Ecs对各质量浓度组SRA01／04细胞的黏附抑制率分别为2．6％、15．0％、26．1％、35．3％、45．2％、54．5％，除2．5mg／L组外，各质量浓度组A490值与0mg／L组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）；Ecs作用24h、48h后各质量浓度组SRA01／04细胞的移行距离与0mg／L组相比有不同程度的缩短，差异有统计学意义（P〈0．05），且随Ecs作用时间的延长，细胞移行距离缩短，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论去整合素Ecs可抑制人LECs的增生、黏附和移行，其作用呈剂量和时间依赖性，Ecs对PCO的防治可起到积极作用。