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青海湖盐单胞菌QHL1 ectABC基因簇克隆鉴定及二氨基丁酸转氨酶基因ectB的异源表达
1
作者
刘建
朱德锐
+3 位作者
李逸
李丹丹
李耀东
刘德立
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第2期5-9,共5页
从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属。设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp)。利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列。DNAS...
从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属。设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp)。利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列。DNAStar软件分析表明ectA、ectB和ectC位于同一个操纵子上,大小分别为579 bp、1269 bp和390 bp,预测分别编码192、422和129个氨基酸的肽链。同源性分析表明:Halomonas sp.QHL1ectABC基因簇所编码的二氨基丁酸转乙酰基酶(EctA)、二氨基丁酸转氨酶(EctB)和四氢嘧啶合成酶(EctC)与Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所编码的酶蛋白相似性分别达57%、96%和85%。利用分子克隆技术构建二氨基丁酸转氨酶基因ectB的重组表达载体pET-28-ectB,通过限制性内切酶酶切和测序分析,结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确。诱导表达重组菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约46 kDa。
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关键词
青海湖
四氢嘧啶
染色体步移
ectabc基因簇
克隆表达
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职称材料
新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定
2
作者
谭琳
NWE Ni Win Htet
+1 位作者
陈偿
PAN Zhiqiang
《生物技术进展》
2022年第6期915-921,共7页
研究旨在克隆新的四氢嘧啶合成基因簇,并对其功能进行鉴定,为应用于四氢嘧啶的生产奠定基础。从新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC,ectABC与表达载体pBAD连接后转化至大肠杆菌BW25113中,通过L-阿拉伯糖诱导表...
研究旨在克隆新的四氢嘧啶合成基因簇,并对其功能进行鉴定,为应用于四氢嘧啶的生产奠定基础。从新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC,ectABC与表达载体pBAD连接后转化至大肠杆菌BW25113中,通过L-阿拉伯糖诱导表达。采用SDS-PAGE和液质联用鉴定重组表达蛋白,利用全细胞催化合成四氢嘧啶,通过高分辨质谱鉴定四氢嘧啶,并从天冬氨酸浓度、KCl浓度、温度和pH 4个方面优化催化条件。结果表明,来自新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2基因组的ectABC大小为2235 bp。SDS-PAGE显示表达产物中有3个重组蛋白产生,液质联用鉴定表明其分子量分别与ectA、ectB、ectC的理论分子量一致。高分辨质谱分析发现全细胞催化上清中有四氢嘧啶产生。优化后的最适全细胞催化条件为:天冬氨酸浓度100 mmol·L^(-1),KCl浓度100 mmol·L^(-1),温度30℃,pH 7.0,最优条件下产量为1.11 mg·mL^(-1)。研究从弧菌中克隆了四氢嘧啶合成基因簇ectABC,并在大肠杆菌BW25113中实现了异源表达和低盐环境下的四氢嘧啶合成,为大规模发酵生产四氢嘧啶奠定了基础。
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关键词
新喀里多尼亚弧菌
ectabc基因簇
重组表达
全细胞催化
四氢嘧啶
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职称材料
Halomonas sp.QHL1四氢嘧啶合成基因簇ectABC与上游调控序列的克隆及其功能分析
被引量:
1
3
作者
石晴
朱德锐
《中国高原医学与生物学杂志》
CAS
2019年第1期30-35,共6页
目的克隆中度嗜盐菌Halomonas sp.QHL1中的四氢嘧啶合成基因簇及上游调控序列并进行功能分析。方法通过PCR技术从Halomonas sp.QHL1中克隆获得ectABC基因簇及上游启动子序列(promoter+ectABC),将其与表达载体pColdⅠDNA连接,转化至E.coi...
目的克隆中度嗜盐菌Halomonas sp.QHL1中的四氢嘧啶合成基因簇及上游调控序列并进行功能分析。方法通过PCR技术从Halomonas sp.QHL1中克隆获得ectABC基因簇及上游启动子序列(promoter+ectABC),将其与表达载体pColdⅠDNA连接,转化至E.coil BL21(DE3),用SDS-PAGE分析目的基因的异源表达、盐耐受实验检测重组菌株的耐盐能力。结果克隆得到大小为3335 bp的promoter+ectABC基因序列,并在E.coil BL21(DE3)中成功异源表达,重组菌株盐耐受能力明显提高。结论四氢嘧啶生物合成基因操纵子序列能够在E.coil BL21(DE3)中异源表达,且含有该序列的工程菌株耐盐能力显著提高。
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关键词
Halomonas
sp.QHL1
四氢嘧啶
ectabc基因簇
上游调控序列
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职称材料
密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析
被引量:
2
4
作者
高波
马怡茗
+5 位作者
洪煜
舒伟学
薛泉宏
颜霞
颜华
贾良辉
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2017年第6期213-220,共8页
【目的】对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析。【方法】对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶...
【目的】对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析。【方法】对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶。通过Act12全基因组分析,克隆得到Act12中四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC,将其与表达载体pET-28a连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,检测工程菌株的盐耐受能力。【结果】密旋链霉菌Act12可在NaCl质量分数为0%~10.0%的条件下生长,且能够生产相关耐盐相容性溶质四氢嘧啶。当NaCl质量分数为2.5%时,密旋链霉菌Act12胞内的四氢嘧啶积累量达到最大值,为72.39mg/L。生物信息学分析结果表明,组成ectABC基因簇的3个基因ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,分别编码二氨基丁酸乙酰基转移酶、二氨基丁酸氨基转移酶和四氢嘧啶合成酶。通过克隆得到长2 408bp的ectABC基因簇,并使其成功在大肠杆菌中实现异源表达,通过Ni柱纯化得到了EctA蛋白。但含pET28a-ectABC的大肠杆菌BL21(DE3)在本试验条件下,其盐耐受能力并无明显改善。【结论】生防链霉菌Act12中存在四氢嘧啶合成基因簇ectABC,且能够在大肠杆菌中成功异源表达。
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关键词
链霉菌
相容性溶质
四氢嘧啶
ectabc基因簇
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职称材料
题名
青海湖盐单胞菌QHL1 ectABC基因簇克隆鉴定及二氨基丁酸转氨酶基因ectB的异源表达
1
作者
刘建
朱德锐
李逸
李丹丹
李耀东
刘德立
机构
华中师范大学生命科学学院湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室
青海大学医学院
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第2期5-9,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.31060013)
文摘
从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属。设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp)。利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列。DNAStar软件分析表明ectA、ectB和ectC位于同一个操纵子上,大小分别为579 bp、1269 bp和390 bp,预测分别编码192、422和129个氨基酸的肽链。同源性分析表明:Halomonas sp.QHL1ectABC基因簇所编码的二氨基丁酸转乙酰基酶(EctA)、二氨基丁酸转氨酶(EctB)和四氢嘧啶合成酶(EctC)与Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所编码的酶蛋白相似性分别达57%、96%和85%。利用分子克隆技术构建二氨基丁酸转氨酶基因ectB的重组表达载体pET-28-ectB,通过限制性内切酶酶切和测序分析,结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确。诱导表达重组菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约46 kDa。
关键词
青海湖
四氢嘧啶
染色体步移
ectabc基因簇
克隆表达
Keywords
Qinghai lake
ectoine
genome walking
ectabc
gene cluster
cloning and expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定
2
作者
谭琳
NWE Ni Win Htet
陈偿
PAN Zhiqiang
机构
中国热带农业科学院海口实验站
缅甸生物技术研究所微生物实验室
中国科学院南海海洋研究所
美国农业部农业研究局天然产物利用研究中心
出处
《生物技术进展》
2022年第6期915-921,共7页
基金
海南省重点研发计划项目(ZDYF2019167)。
文摘
研究旨在克隆新的四氢嘧啶合成基因簇,并对其功能进行鉴定,为应用于四氢嘧啶的生产奠定基础。从新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC,ectABC与表达载体pBAD连接后转化至大肠杆菌BW25113中,通过L-阿拉伯糖诱导表达。采用SDS-PAGE和液质联用鉴定重组表达蛋白,利用全细胞催化合成四氢嘧啶,通过高分辨质谱鉴定四氢嘧啶,并从天冬氨酸浓度、KCl浓度、温度和pH 4个方面优化催化条件。结果表明,来自新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2基因组的ectABC大小为2235 bp。SDS-PAGE显示表达产物中有3个重组蛋白产生,液质联用鉴定表明其分子量分别与ectA、ectB、ectC的理论分子量一致。高分辨质谱分析发现全细胞催化上清中有四氢嘧啶产生。优化后的最适全细胞催化条件为:天冬氨酸浓度100 mmol·L^(-1),KCl浓度100 mmol·L^(-1),温度30℃,pH 7.0,最优条件下产量为1.11 mg·mL^(-1)。研究从弧菌中克隆了四氢嘧啶合成基因簇ectABC,并在大肠杆菌BW25113中实现了异源表达和低盐环境下的四氢嘧啶合成,为大规模发酵生产四氢嘧啶奠定了基础。
关键词
新喀里多尼亚弧菌
ectabc基因簇
重组表达
全细胞催化
四氢嘧啶
Keywords
Vibrio neocaledonicus
ectabc
gene cluster
recombinant expression
whole-cell biocatalysis
ectoine
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Halomonas sp.QHL1四氢嘧啶合成基因簇ectABC与上游调控序列的克隆及其功能分析
被引量:
1
3
作者
石晴
朱德锐
机构
青海大学医学院基础医学研究中心
出处
《中国高原医学与生物学杂志》
CAS
2019年第1期30-35,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.31560039)
青海省科技计划项目(No.2015ZJY23,2015ZJ929Q)
文摘
目的克隆中度嗜盐菌Halomonas sp.QHL1中的四氢嘧啶合成基因簇及上游调控序列并进行功能分析。方法通过PCR技术从Halomonas sp.QHL1中克隆获得ectABC基因簇及上游启动子序列(promoter+ectABC),将其与表达载体pColdⅠDNA连接,转化至E.coil BL21(DE3),用SDS-PAGE分析目的基因的异源表达、盐耐受实验检测重组菌株的耐盐能力。结果克隆得到大小为3335 bp的promoter+ectABC基因序列,并在E.coil BL21(DE3)中成功异源表达,重组菌株盐耐受能力明显提高。结论四氢嘧啶生物合成基因操纵子序列能够在E.coil BL21(DE3)中异源表达,且含有该序列的工程菌株耐盐能力显著提高。
关键词
Halomonas
sp.QHL1
四氢嘧啶
ectabc基因簇
上游调控序列
Keywords
Halomonas sp.QHL1
ectoine
ectabc
gene cluster
upstream regulation sequence
分类号
R3 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析
被引量:
2
4
作者
高波
马怡茗
洪煜
舒伟学
薛泉宏
颜霞
颜华
贾良辉
机构
西北农林科技大学生命科学学院
西北农林科技大学资源环境学院
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2017年第6期213-220,共8页
基金
中央高校基本科研业务费专项(Z109021426
Z109021432)
+2 种基金
高校博士点基金项目(Z20120204120034
Z20120204120042)
陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066)
文摘
【目的】对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析。【方法】对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶。通过Act12全基因组分析,克隆得到Act12中四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC,将其与表达载体pET-28a连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,检测工程菌株的盐耐受能力。【结果】密旋链霉菌Act12可在NaCl质量分数为0%~10.0%的条件下生长,且能够生产相关耐盐相容性溶质四氢嘧啶。当NaCl质量分数为2.5%时,密旋链霉菌Act12胞内的四氢嘧啶积累量达到最大值,为72.39mg/L。生物信息学分析结果表明,组成ectABC基因簇的3个基因ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,分别编码二氨基丁酸乙酰基转移酶、二氨基丁酸氨基转移酶和四氢嘧啶合成酶。通过克隆得到长2 408bp的ectABC基因簇,并使其成功在大肠杆菌中实现异源表达,通过Ni柱纯化得到了EctA蛋白。但含pET28a-ectABC的大肠杆菌BL21(DE3)在本试验条件下,其盐耐受能力并无明显改善。【结论】生防链霉菌Act12中存在四氢嘧啶合成基因簇ectABC,且能够在大肠杆菌中成功异源表达。
关键词
链霉菌
相容性溶质
四氢嘧啶
ectabc基因簇
Keywords
Streptomyces
compatible solutes
ectoine
ectabc
gene cluster
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
青海湖盐单胞菌QHL1 ectABC基因簇克隆鉴定及二氨基丁酸转氨酶基因ectB的异源表达
刘建
朱德锐
李逸
李丹丹
李耀东
刘德立
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013
0
下载PDF
职称材料
2
新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定
谭琳
NWE Ni Win Htet
陈偿
PAN Zhiqiang
《生物技术进展》
2022
0
下载PDF
职称材料
3
Halomonas sp.QHL1四氢嘧啶合成基因簇ectABC与上游调控序列的克隆及其功能分析
石晴
朱德锐
《中国高原医学与生物学杂志》
CAS
2019
1
下载PDF
职称材料
4
密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析
高波
马怡茗
洪煜
舒伟学
薛泉宏
颜霞
颜华
贾良辉
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2017
2
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