中度嗜盐菌DTY1的鉴定及其耐盐机制的初步分析

菌株DTY1分离自山西省五寨县柠条种植区盐碱土壤，可在0-1．2mol／L NaCl的浓度培养基上生长，最适生长温度32℃，最适pH7-10。通过形态观察，生理生化测定与16S rDNA序列分析，将该菌株鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。高压液相色谱分析，DTY1菌株在常规LB培养液中能够产生1．40mg／g四氢嘧啶，且在最适盐浓度条件下，盐浓度越高单位干重菌体所产生的四氢嘧啶含量越高。通过PCR介导的方法从DTY1的基因组文库中克隆到四氢嘧啶合成基因ectB。该基因长度为1284bp，编码427个氨基酸的肽链。此肽链与B．halodurans C-125 （BABO4638）中二氨基丁酸氨基转移酶同源性达81％。ectB基因可能存在典型的σ^70启动子，而且在启动子间有一段明显的23bp的回文序列。

中度嗜盐菌四氢嘧啶合成基因的克隆与功能分析

中度嗜盐菌Bacillusalc alophilus DTY1分离自晋西北黄土高原盐碱土壤,能够产生耐盐相关的相容性溶质四氢嘧啶。为了研究四氢嘧啶的功能,克隆了DTY1菌株四氢嘧啶合成基因簇ectABC。ectA、ectB和ectC分别编码169、428和132个氨基酸的肽链,分别与B.halodurans C-125中的二氨基丁酸乙酰基转移酶(EctA)、二氨基丁酸氨基转移酶(EctB)、四氢嘧啶合成酶(EctC)同源性达59%、81%和81%。将携带该基因簇的4.0kb片段转入蜡质芽孢杆菌B.cereus Z后,芽孢杆菌的耐盐度显著提高。HPLC检测发现,在1.0%NaCl浓度下,转化菌B.cereusZ-E菌株生成70.1mg/g四氢嘧啶,而在5.0%的NaCl浓度下四氢嘧啶的产量高达118.6mg/g,显著高于B.alcalophilus DTY1的四氢嘧啶产量。而且随着盐浓度的提高,四氢嘧啶的合成量也随之提高。由此证明四氢嘧啶参与中度嗜盐菌重要的渗透调节,ectABC的表达受盐诱导。

烟台海域一株中度嗜盐芽孢杆菌YTM-5的鉴定及其耐盐机制研究

从山东烟台近海盐场泥样中分离得到菌株YTM-5,该菌株能在1%～15%NaCl的培养基中生长,最适宜生长条件为:3%NaCl,温度为37℃,pH值为8。经过形态学观察、生理生化特性分析及16S rDNA序列测定,鉴定该菌株为芽孢杆菌Bacillus。高压液相色谱分析表明YTM-5菌体内含有相容性溶质四氢嘧啶,其含量随培养基内NaCl含量的增加而增加,当NaCl含量达到7%以上时,一直维持较高的水平,以稳定此逆境下的渗透平衡。该菌株的发现为开发烟台海域海洋微生物资源及相关抗盐基因的利用奠定了基础。