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鸡产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA探针制备 被引量:4
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作者 曹洪敬 王文志 +2 位作者 徐学孟 宫云浩 孙淑芳 《中国动物检疫》 CAS 1994年第5期11-13,共3页
鸡产蛋下降综合征(EDS-76)病毒由鸭胚培养增殖,60%饱和度的(NH4)2SO4沉淀,经差速离心和蔗糖垫超速离心提纯病毒。蛋白酶K和SDS消化后,苯酚抽提、乙醇沉淀分离EDS-76病毒DNA。用HindⅢ、BamHI、PstI、EcoRI进行病毒DNA酶切图... 鸡产蛋下降综合征(EDS-76)病毒由鸭胚培养增殖,60%饱和度的(NH4)2SO4沉淀,经差速离心和蔗糖垫超速离心提纯病毒。蛋白酶K和SDS消化后,苯酚抽提、乙醇沉淀分离EDS-76病毒DNA。用HindⅢ、BamHI、PstI、EcoRI进行病毒DNA酶切图谱分析。EDS-76病毒DNA经PstI限制酸酶切与pUC19质粒载体连接,转化了JPA101大肠杆菌细胞,筛选带有插入片段的白色菌落,并将筛选的克隆进杆快速酶切鉴定;用光敏生物素标记制成探针。结果表明:所选克隆只与EDS-76病毒DNA杂交,克隆片段的为3kb,标记探针能检出10pg的EDS-76病毒DNA。 展开更多
关键词 克隆 核酸探针 鸡病 减蛋综合症
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用 Digoxigenin 标记核酸探针检测 EDS-76 病毒核酸的研究 被引量:4
2
作者 孙刚 潘兴广 刘尚高 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第1期40-42,共3页
用EDS76病毒标准AV127株和分离株(B96株)感染鸭胚,提取病毒核酸,分别经EcoRl和Pstl双酶切,获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行EcoRl和Pstl单酶切,也得到相似结果。病毒DNA经EcoRl... 用EDS76病毒标准AV127株和分离株(B96株)感染鸭胚,提取病毒核酸,分别经EcoRl和Pstl双酶切,获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行EcoRl和Pstl单酶切,也得到相似结果。病毒DNA经EcoRl和Pstl双酶切后,与PUC19质粒载体重组,并转化到EcoliJM101中,筛选出一个插入片段(G片段)约为27kb的重组质粒。用Digoxigemin标记EDS76DNAG片段(EcoRl和Pstl双酶切片段)及含该片段的重组质粒分别制备探针,对EDS76病毒DNA进行斑点杂交,两种探针均为阳性,而对照组NDV、IBV、ILTV、IBDV正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者,它的DNA检出限量为4pg水平。结果表明,两种探针具有高度的特异性、敏感性。 展开更多
关键词 减蛋综合症 病毒 核酸探针 鸡病
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ND-EDS-76异源二联油苗的研制 被引量:1
3
作者 贾英科 高梅秀 +2 位作者 崔学艺 张巨洲 熊峰 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期29-32,共4页
将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可... 将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。 展开更多
关键词 新城疫 减蛋综合症 异源二联油乳剂灭活疫苗
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The complete genomic sequence of egg drop syndrome virus strain AAV-2
4
作者 金奇 曾力宇 +2 位作者 杨帆 李茂祥 侯云德 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1999年第6期607-613,共7页
In the search for the genome of egg drop syndrome virus (EDSV-76) Chinese strain AAV-2, part of restriction endonuclease physical map is analyzed, the complete genomic library is organized. On basis of this, the compl... In the search for the genome of egg drop syndrome virus (EDSV-76) Chinese strain AAV-2, part of restriction endonuclease physical map is analyzed, the complete genomic library is organized. On basis of this, the complete genome nucleotide sequences (32 838 bp in length, including terminal structures) are determined. The data analysis shows: compared with the other Adenovirases, strain AAV-2 has more disparity on genomic structure and the distribution of open reading frame (ORF). There are no clear El, E3 and E4 regions in AAV-2 genome. Two segments located at both ends of genome (l .1 kb and 8.3 kb in length respectively) have no homology with the other adenovirus genomes. In addition, strain AAV-2 genome lacks ORFs encoding El A, pV and pIX, which are common ORFs encoding early, lately proteins in Adenovirus. This reveals differences between EDSA-76, the sole standard strain of group Ⅲ Avian Adenovirases, and the other Avian Adenovirases for the first time. It will help the search for Avian Adenovirus and will also help the search of all Adenovirases. 展开更多
关键词 ADENOvirus egg drop syndrome virus physical map ANALYSIS NUCLEOTIDE sequence analysis.
原文传递
鸡减蛋综合症病毒(EDS-76)的分离与鉴定
5
作者 张福萍 吐尔逊.克力木 +1 位作者 刘雁征 苏艳艳 《新疆农业大学学报》 CAS 1997年第1期47-49,共3页
采取新疆五家渠某鸡场发病鸡病料,接种鸭胚,分离病毒,病料在鸭胚中盲传至第5代,鸭胚尿囊液HA效价达217,HA可被EDS-76标准阳性血清抑制。免疫电镜观察到了病毒颗粒。
关键词 鸡病 减蛋综合症 病毒 分离 鉴定
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减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用
6
作者 宋亚鹏 孙亚宁 +4 位作者 刘琳 杨继飞 李新生 魏蔷 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第1期125-132,共8页
为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的... 为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 Fiber蛋白 免疫层析试纸 血凝抑制试验
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鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)末端前体蛋白的基因结构分析 被引量:5
7
作者 曾力宇 金奇 +4 位作者 章金钢 李茂祥 姚二梅 殷震 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期351-356,共6页
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株AA-2,经常规方法提取其病毒核酸后,组建了完整的限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库,并对其中HindⅢ(21.0m.u.)-SacⅠ(33.2u.)进行了... 从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株AA-2,经常规方法提取其病毒核酸后,组建了完整的限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库,并对其中HindⅢ(21.0m.u.)-SacⅠ(33.2u.)进行了序列测定。同源比较分析证明:其L链含编码病毒末端前体蛋白,容量为580个氨基酸残基(aa)的开放读码框架(Openreadingframe,ORF)。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点,如保守序列、核定位信号(Nuclearlocalizationsignal)。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与DNA复制起始的机制提供了新的依据。 展开更多
关键词 鸡减蛋综合征 病毒 末端前体蛋白 基因结构
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产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA探针的制备及应用研究 被引量:9
8
作者 段玉友 崔治中 +1 位作者 高菘 葛天同 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1995年第3期219-223,共5页
用纯化的产蛋下降综合征(EDS-76)病毒(H91毒株)悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量较大、背景清晰的核酸带。用BamHI酶消化产生4个片段,大小分别为17kb、10kb、4.0kb和2.0kb。将... 用纯化的产蛋下降综合征(EDS-76)病毒(H91毒株)悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量较大、背景清晰的核酸带。用BamHI酶消化产生4个片段,大小分别为17kb、10kb、4.0kb和2.0kb。将其中的2.0kb片段克隆进pUC18DNA载体中,重组质粒DNA用digoxigenin标记作为DNA探针,在dotblot中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒(MDV)DNA、鸡传染性贫血病毒(CAV)DNA、SPF鸡基因组DNA等核酸反应,只与3株EDS病毒(EDS标准毒株AV-127、EDSH91毒株和从健康鹅体中分离的EDSY81毒株)DNA呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后24h即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出EDS病毒DNA,在感染后35h仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用SPF鸡胚分离病毒,并用HA和HI试验检测分离病毒的特异性;在感染过程中,同时检测了血清中HI抗体的消长情况。结果表明,人工感染鸡排毒至少可以维持2个月左右,而且血清中HI抗体即使很高,也不能阻止感染鸡的排毒。 展开更多
关键词 家禽 DNA探针 泄殖腔分泌物 减蛋综合症 病毒
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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用
9
作者 魏蔷 李青梅 +3 位作者 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期128-135,共8页
为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心ELISA
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减蛋综合征-76病毒在鸡体内的动态分布及其与蛋传递的关系 被引量:6
10
作者 孔德迎 刘福安 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期148-152,共5页
用减蛋综合征-76(Egg drop syndrome’76)病毒WPDV205株感染31周龄莱航鸡,复制出了典型的减蛋综合征产蛋曲线,但蛋壳质量未见变化。从接种后第2周初,产蛋率由68.4%开始下降,至第4周降至43.5%。放射示踪实验表明,接种后7天,病毒分布于... 用减蛋综合征-76(Egg drop syndrome’76)病毒WPDV205株感染31周龄莱航鸡,复制出了典型的减蛋综合征产蛋曲线,但蛋壳质量未见变化。从接种后第2周初,产蛋率由68.4%开始下降,至第4周降至43.5%。放射示踪实验表明,接种后7天,病毒分布于卵巢和输卵管的膨大部、峡部及阴道部,14天在肺和输卵管的膨大部,21天在阴道部,28天在肾和输卵管的漏斗部、峡部及阴道部。第4周后,除第8周在阴道部检出病毒外,在生殖道其它部位均未检出病毒。鸡群接种病毒后第1至4周从其蛋内容物中检测到病毒。 展开更多
关键词 减蛋综合征 病毒分布 蛋推传递
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产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA酶切图谱分析 被引量:24
11
作者 王泽霖 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第4期360-365,共6页
选用EcoRI、PstⅠ、PvuⅡ、HindⅢ、BglⅠ和BglⅡ6种限制性内切酶,对国内4株EDS-76病毒鸡源分离株和国外标准株AV-127及1株鹅源腺病毒的DNA进行酶切图谱的比较,结果发现4种鸡源分离株与AV... 选用EcoRI、PstⅠ、PvuⅡ、HindⅢ、BglⅠ和BglⅡ6种限制性内切酶,对国内4株EDS-76病毒鸡源分离株和国外标准株AV-127及1株鹅源腺病毒的DNA进行酶切图谱的比较,结果发现4种鸡源分离株与AV-127株用上述6种酶切的片段数分别为4、8、10、10、6和7条。各酶切图形、片段大小亦十分相似,表明均为EDS-76病毒。EcoRI-HindⅢ和PstI-EcoRI的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为6、7、9、7、4和10条,酶切图形和片段大小均与AV-127有很大不同,表明该分离株可能为1株血清型相同而基因组不同的EDS-76鹅腺病毒。 展开更多
关键词 病毒 酶切图谱 鸡病 鹅病 减蛋综合征
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产蛋下降综合症病毒(EDS’76)核酸序列分析及基因扩增研究
12
作者 胡木枝 张兹钧 金由辛 《中国进出境动植检》 1995年第4期26-28,共3页
从被EDS'76病毒感染的鸭胚尿囊液中提取病毒核酸,经Pstl酶切后重组到PT_7/T_3a—19的PstI位点,再转化到Ecoli DH 5a中。在LB平板上筛选了一个EDS特异的PTEZ·P28重组质粒。用双脱氧末端终止法测定了该重组质粒中插入片段的一段核... 从被EDS'76病毒感染的鸭胚尿囊液中提取病毒核酸,经Pstl酶切后重组到PT_7/T_3a—19的PstI位点,再转化到Ecoli DH 5a中。在LB平板上筛选了一个EDS特异的PTEZ·P28重组质粒。用双脱氧末端终止法测定了该重组质粒中插入片段的一段核酸序列,在此基础上设计了一对引物,用这对引物成功地从EDS'76—DNA上扩增出了一个209 bP的核酸片段。 展开更多
关键词 产蛋下降综合症 基因扩增 鸡病 病毒
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减蛋综合征病毒(EDS76)的分离和鉴定
13
作者 王丹丹 《饲料博览》 2020年第2期38-40,47,共4页
鸡减蛋综合征是由腺病毒引起的鸡的主要传染病之一,自1976年国外首次发现该病以来,已在包括我国在内的许多国家流行,给养禽业造成巨大的经济损失。2005年黑龙江省绥化市一个体养鸡场的190日龄商品蛋鸡突然出现产蛋下降,从发病鸡的输卵... 鸡减蛋综合征是由腺病毒引起的鸡的主要传染病之一,自1976年国外首次发现该病以来,已在包括我国在内的许多国家流行,给养禽业造成巨大的经济损失。2005年黑龙江省绥化市一个体养鸡场的190日龄商品蛋鸡突然出现产蛋下降,从发病鸡的输卵管中分离到一株具有血凝性的病毒。经过HI试验、AGP试验、理化特性和PCR序列扩增及测序,证明分离到的病毒是一株EDS76V。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 毒种 减蛋综合征76
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减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析 被引量:17
14
作者 李茂祥 金奇 +3 位作者 章金钢 曾力宇 殷震 侯云德 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期27-31,共5页
克隆了减蛋综合征病毒(EDSV)中国分离株基因组HindⅢ-E片段,并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央58.7~68.9物理图谱单位(mu),片段全长共3194bp。其中含有1个完整的和2个不完整的开放性读码... 克隆了减蛋综合征病毒(EDSV)中国分离株基因组HindⅢ-E片段,并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央58.7~68.9物理图谱单位(mu),片段全长共3194bp。其中含有1个完整的和2个不完整的开放性读码框架(ORF),分别编码pVⅢ蛋白、100K蛋白基因C端和纤维蛋白N末端部分。pVⅢ蛋白基因由753个碱基(nt)组成,编码250个氨基酸(aa),编码产物的分子量为28500。氨基酸水平的同源性比较表明,EDSV的pVⅢ蛋白与禽腺病毒1型(FAV1)及人和其他动物腺病毒pVⅢ蛋白的同源性为28%~36%,而与羊腺病毒(OAV)的同源性高达52%,提示EDSV与OAV间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征,在pVⅢ和纤维蛋白基因之间,应为E3区,但该序列只有245个nt组成,序列中保留了TATABox和polyA信号。但除了2个仅编码49aa和32aa多肽的ORFs外,不编码任何产物,且核苷酸序列与其他腺病毒的E3区无同源性,证实此区无明显E3区样结构。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 PVⅢ 蛋白基因 序列分析
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鸭产蛋下降-死亡综合征的临床诊断与病原的初步鉴定 被引量:13
15
作者 赵圆圆 李传峰 +6 位作者 朱良强 詹松鹤 王汉清 魏建忠 秦爱建 刘光清 王桂军 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期11-14,共4页
2010年3~11月间,安徽省部分规模养鸭场流行以产蛋下降和死亡为特征的急性、热性鸭传染病,主要感染成年种鸭或蛋鸭,病理变化则以心肌出血、卵巢肿大、出血和坏死为特征。通过鸡胚接种、传代培养和RT-PCR鉴定,从发病鸭体内分离1株黄病毒... 2010年3~11月间,安徽省部分规模养鸭场流行以产蛋下降和死亡为特征的急性、热性鸭传染病,主要感染成年种鸭或蛋鸭,病理变化则以心肌出血、卵巢肿大、出血和坏死为特征。通过鸡胚接种、传代培养和RT-PCR鉴定,从发病鸭体内分离1株黄病毒。对其NS1基因扩增并测序,发现其与坦布苏病毒亲缘关系非常近,核苷酸同源性达94.2%。动物回归试验结果表明:该病毒能引起蛋鸭产蛋下降和卵巢病变。证明鸭黄病毒在我国对鸭的高度致病性,并开始在规模鸭场蔓延和流行,应当引起有关部门和兽医工作者的高度重视。 展开更多
关键词 产蛋下降-死亡综合征 坦布苏病毒 黄病毒 病原鉴定
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鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究 被引量:11
16
作者 姜北宇 刘月焕 +3 位作者 郑世兰 景小冬 姚颖 白丽萍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期106-113,共8页
用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,1... 用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无任何副作用;免疫10-14 d后产生免疫力;ND部分效检,攻毒100%保护,每羽份含ND效价达50-123 PD50;IB部分效检,免疫21-28 d后攻毒保护率达80%-100%,IB HI效价≥1:64;EDS76效检,免疫后21 d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80%-100%。 展开更多
关键词 新城疫 传染性支气管炎 减蛋综合征 传染性脑脊髓炎 四联油佐剂灭活疫苗
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减蛋综合征病毒基因组Hind Ⅲ酶切片段的克隆及酶谱分析 被引量:9
17
作者 胡敬东 章金钢 +3 位作者 李红卫 金扩世 涂长春 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期7-10,共4页
以pUC19质粒为载体,采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒(EDSV)基因组的HindⅢ酶切片段,用Digoxigenin-dUTP标记的EDSVHindⅢ片段探针打点杂交,证实13个克隆插入了EDSVDNA的HindⅢ片... 以pUC19质粒为载体,采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒(EDSV)基因组的HindⅢ酶切片段,用Digoxigenin-dUTP标记的EDSVHindⅢ片段探针打点杂交,证实13个克隆插入了EDSVDNA的HindⅢ片段。酶切分析结果表明,克隆到了A、B、F、G、H、I、J7个不同大小的片段,选取含有上述插入片段的、具有代表性的7个相应质粒pUHA、pUHB、pUHF、pUHG、pUHH、pUHI、pUHJ,在分别以BamHI、BglⅡ、ClaⅠ、EcoRI、EcoRV、PstⅠ、SmaⅠ、XbaⅠ、XhoⅠ单酶切的基础上,经适当组合的双酶切,得出各片段存在的单一酶切位点为A:BglⅡ、EcoRV、SmaⅠ、XhoⅠ位点;B:BglⅡ、SmaⅠ位点;F:BglⅡ、EcoRV位点;G:PstⅠ位点;H:0;I:PstⅠ位点;J:EcoRV、XhoⅠ位点。为进一步筛选病毒复制非必需区,构建腺病毒表达载体,以及研究禽类腺病毒的分子生物学特性打下了基础。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 克隆 限制酶图谱分析
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减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定 被引量:10
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作者 肖妙 于志丹 +1 位作者 马波 王君伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期83-87,共5页
根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株... 根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 五邻体 原核表达 抗原性
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银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征病毒的研究 被引量:32
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作者 程安春 汪铭书 +2 位作者 廖德惠 陈孝跃 钟妮娜 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1997年第7期9-11,共3页
本研究首次报道应用银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征(EDS76)病毒获得成功。经初步提纯后的EDS76病毒免疫兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗EDS76病毒的IgG,成功地建立了检测EDS76病毒抗原的银加强胶体金... 本研究首次报道应用银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征(EDS76)病毒获得成功。经初步提纯后的EDS76病毒免疫兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗EDS76病毒的IgG,成功地建立了检测EDS76病毒抗原的银加强胶体金探针法(SECGPA),并确定了操作程序的最佳试验条件为:兔抗EDSVIgG工作浓度为1400,金标记羊抗兔IgG的工作浓度为120,银染色的时间为15min。用该法对提纯的EDS76病毒(EDSV)抗原的最低检出量为0.11719μg/ml。以此法检测了人工感染的50只鸡采集的样本,对卵巢、输卵管峡部、咽喉部、软壳蛋的阳性率均为100%,粪便阳性率为92%,而检测鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌等鸡源病毒和细菌样品时全部呈阴性反应。研究结果表明,该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判读、特异性强、重复性好等优点。 展开更多
关键词 检测 减蛋综合征 病毒 鸡病 SECGPA
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减蛋综合征病毒33K蛋白基因克隆及结构分析 被引量:5
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作者 李茂祥 李红卫 +5 位作者 金奇 章金刚 余兴龙 吕宗吉 侯云德 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期221-225,共5页
纯化的减蛋综合征病毒(EDSV)DNA经HindⅢ水解、0.8%琼脂糖电泳后,回收各DNA条带并克隆至pBluescriptKS载体,建立了EDSV基因文库,对33K蛋白基因进行了分析。本研究证实,EDSV33K蛋白... 纯化的减蛋综合征病毒(EDSV)DNA经HindⅢ水解、0.8%琼脂糖电泳后,回收各DNA条带并克隆至pBluescriptKS载体,建立了EDSV基因文库,对33K蛋白基因进行了分析。本研究证实,EDSV33K蛋白基因含有2个外显子,与羊腺病毒(OAV)33K蛋白比较,N端编码产物的同源性为30.8%,C端的为60%。用RT-PCR扩增33KmRNA和cDNA克隆及序列分析证实,EDSV33K蛋白含有82碱基(nt)的内含子,去掉内含子33K蛋白基因能形成完整的ORF,其编码产物由177氨基酸(aa)组成,推测分子质量为2.06×104,与人5型腺病毒和OAV的同源性分别为28.1%和44.7%。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 33K蛋白 禽腺病毒 克隆 内含子
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