产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析

选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。

产蛋下降综合症病毒(EDS’76)核酸序列分析及基因扩增研究

从被EDS＇76病毒感染的鸭胚尿囊液中提取病毒核酸,经Pstl酶切后重组到PT_7/T_3a—19的PstI位点,再转化到Ecoli DH 5a中。在LB平板上筛选了一个EDS特异的PTEZ·P28重组质粒。用双脱氧末端终止法测定了该重组质粒中插入片段的一段核酸序列,在此基础上设计了一对引物,用这对引物成功地从EDS＇76—DNA上扩增出了一个209 bP的核酸片段。

减蛋综合征病毒(EDS76)的分离和鉴定

鸡减蛋综合征是由腺病毒引起的鸡的主要传染病之一,自1976年国外首次发现该病以来,已在包括我国在内的许多国家流行,给养禽业造成巨大的经济损失。2005年黑龙江省绥化市一个体养鸡场的190日龄商品蛋鸡突然出现产蛋下降,从发病鸡的输卵管中分离到一株具有血凝性的病毒。经过HI试验、AGP试验、理化特性和PCR序列扩增及测序,证明分离到的病毒是一株EDS76V。

鸭源新城疫病毒和减蛋综合征病毒在同一鸭胚中增殖的观察

用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４）用血凝试验（ＨＡ）测定两种病毒．其生长规律与单独接种时一致．（５）接种灭活的含毒尿囊液的雏鸡，在血清中出现抗两种病毒的ＨＩ抗体及抗ＥＤＳ－７６病毒的中和抗体，对ＮＤＶ强毒攻击有坚强的免疫力。

鸡新城疫和减蛋综合征异源二联灭活疫苗研究

将鸭源新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ＿（１０）株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ＿２株于同一鸭胚同时增殖，用甲醛灭活后加入１０号白油制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６异源二联灭活疫苗，简化了生产工艺，降低了成本，克服了鸡胚苗潜伏带毒的危险。经２０余万只鸡试用，表明该疫苗可有效预防ＮＤ和ＤＥＳ－７６。

鸡新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联油乳剂苗的研制及应用

用新城疫病毒 (克隆H88株。)、传染性支气管炎病毒 (JP株和H52 株 )和减蛋综合征病毒 (H91株 )分别接种于鸡胚和鸭胚 ,并收取其含毒鸡、鸭胚尿囊液 ,用一定浓度甲醛溶液灭活 ,按一定比例混匀 ,以 7号白油为佐剂制成鸡新城疫 (ND)_传染性支气管炎 (IB)_减蛋综合征 (EDS76)三联油乳剂灭活苗 (三联苗 )。三联苗免疫 30日龄雏鸡 ,免疫后 7天产生免疫应答 ,免疫后2 1天保护率达 10 0 %。疫苗在 4℃～ 8℃保存期为 12个月 ,10℃～ 2 5℃保存期为 6个月 ,该疫苗在全省不同地区鸡群应用 40 0余万羽份 ,取得满意效果。

鸡新城疫-减蛋综合征-传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫苗的研究

用NDLaSota弱毒株、EDS76毒株、IBD地方分离株JD2及D78株 ,分别接种鸡胚、鸭胚 ,收集尿囊液等含毒组织 ,结合JD2囊组织毒 ,制备各种病毒抗原 ,经福尔马林灭活后按一定比例混合 ,再加入含硒免疫增强剂 ,与白油佐剂乳化成油包水型三联乳剂疫苗。对三联苗各项技术指标进行了测定 ,证明本疫苗安全、无副作用 ,接种后 2～ 3周产生免疫保护 ,ND和EDS76攻毒保护率为 10 0 %。通过免疫抗体检测 ,该三联苗均能产生较高效价的抗体 ,其中IBDAGP抗体效价达7 4 2 (log2 ) ;NDHI抗体效价达 9 2 4 (log2 ) ;EDS76HI抗体效价达 9 18(log2 )。种鸡注苗后 8周测定其 1日龄雏鸡IBDAGP抗体阳性率为 96 35 %。本疫苗在河北省一些种鸡场和蛋鸡场进行区域试验 ,获得满意效果 ,有效控制了ND、EDS76及IBD的发生及流行。

ND─EDS二联油乳剂灭活苗的研制

用鸡新城疫（ＮＤ）克隆３０毒株接种鸡胚，鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ）ＢＨ９１毒株接种鸭胚，分别收获ＮＤ鸡胚尿囊液毒和ＥＤＳ鸭胚尿囊液毒，用福尔马林灭活，二者混合后，加入１０号白油油相中，制成ＮＤ─ＥＤＳ二联油乳剂灭活苗。该苗接种在产前母鸡，可使接种鸡获得对ＮＤ和ＥＤＳ强毒攻击坚强的抵抗力。该苗安全、稳定，４℃保存期至少可达１２个月以上，适用于基层推广使用。

鸡减蛋综合征病毒SC—1毒株的血凝特性

将鸡减蛋综合征（ＥＤＳ＿（７６））ＳＣ—１毒株以不同稀释度接种鸭胚，孵育９６ｈｒ，以血凝试验（ＨＡ）为指示系统，测得半数感染量（ＥＩＤ＿（５０））为１０￣（－９．６７）／０．１ｍｌ。将ＳＣ－１毒株接种１１日龄鸭胚，取不同时间的死、活胚，测得１２０和１４４ｈｒ所收胚液（含尿囊液和羊水）比其它时间所收胚液高１．３～８．６个血凝滴度；９６ｈｒ和１２０ｈｒ所收胚液平均１０ｍｌ／胚以上。用不同的反应板、红细胞浓度及甲醛灭活病毒后作ＨＡ试验，结果：Ｕ型板比Ｖ型板高１～２个滴度；０．５％、０．７５％、１％的红细胞比１．５％的红细胞高１～４个滴度，但０．５％红细胞组图像不太清晰；甲醛灭活后ＨＡ效价未见改变。

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其多抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原(NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV)均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。

减蛋综合征研究概况

从病原学、流行病学、临床症状、病理变化、反应机理、诊断、预防和控制方面综述了减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）的研究概况．

鸡产蛋下降综合征病毒的分离及初步鉴定

利用鸭胚从吉林省某鸡场表现产蛋量下降,产畸形蛋,血凝抑制试验诊断为产蛋下降综合征(EDS_(76))的病鸡输卵管、子宫中分离到两株病毒(CH—1和CH—2),经血凝试验、血凝抑制试验及电镜观察,证实为鸡产蛋下降综合征病毒.