Preliminary Study on the Separation of Lysozyme,Ovotransferrin and Ovalbumin from Egg White

[Objective] A study on separation process of lysozyme, ovotransferrin and ovalbumin from egg white. [Method] The proteins were separated by ammonium sul-fates and ion-exchange chromatography. Purity of the proteins was assayed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE）. [Result] The results showed that the proteins were electrophoresis-pure. The specific activity of lysozyme was increased from 144.13 to 2 235 U/mg, and purification factor was 15-fold. Lysozyme recovery rate was estimated to be 15.76%. Bacteriostasis rate of ovotransferrin was 48.84%. [Conclusion] The procedure for separating lysozyme, ovotransferrin and ovalbumin from egg white was simple, fast, low-cost and suitable for industrilization.

蛋清卵黏蛋白提取工艺优化

卵黏蛋白是鸡蛋清中具有抗菌、降胆固醇及免疫活性的蛋白质。该文以新鲜鸡蛋清为原料,通过盐析沉淀法和等电点法结合提取卵黏蛋白,采用响应面法优化提取工艺。结果表明:蛋清中提取卵黏蛋白的最佳工艺条件为NaCl溶液浓度1.5 mol/L,以4倍蛋清体积的NaCl溶液,调节蛋清pH值至5.5,离心40 min,取沉淀重悬,在上述相同离心条件下再次离心并冻干沉淀得到卵黏蛋白,提取率为54.48%,纯度为94.26%。

鸡蛋清卵白蛋白酶解工艺优化及其结构性质

研究鸡蛋清卵白蛋白的酶解工艺及其结构性质,以水解度为指标,确定最佳酶源为碱性蛋白酶,其水解度为26.55%,显著优于其他蛋白酶(P<0.05)。以碱性蛋白酶酶解鸡蛋清卵白蛋白,采用单因素和五元二次正交旋转试验研究酶解工艺;针对酶解前后卵白蛋白的功能特性进行分析,并采用紫外扫描、傅里叶红外变换光谱、差示扫描量热针对卵白蛋白及其酶解产物进行结构表征。结果发现,碱性蛋白酶酶解鸡蛋清卵白蛋白最佳工艺条件为反应温度52.5℃、反应时间5 h、pH 8.25、酶用量5 500 U/g、底物添加量5%,此条件下水解度为27.88%。酶解后产物表面巯基含量降低了3.6 mol/(L·g),溶解度大幅度提高,起泡性降低了18.18%,泡沫稳定性降低了2 0.2 4%,乳化活性指数升高了13.56m^2/g,乳化稳定性提高了1 0.4 6%。同时,酶解后的卵白蛋白肽链发生了裂解,有序的二级结构被破坏,暴露出更多氨基酸残基,α-螺旋略有减少,β-转角相应增加,亲水基团也相应的增加。

鸡蛋清卵白蛋白与溶菌酶的两步超滤法分离"

研究了两步超滤法分离鸡蛋清中卵白蛋白与溶菌酶的可行性。基于超滤机理分析了超滤过程中初始料液体积分数、pH值和跨膜压力等参数对膜通量、透过液蛋白质质量浓度的影响。在考察膜通量变化确定超滤时间的基础上,通过超滤试验获得最佳工艺条件:初始料液体积分数6.0%,pH值2.5,跨膜压力0.12 MPa。超滤产物纯度、回收率较高,卵白蛋白、溶菌酶的纯度分别为85.72%、87.21%,回收率分别为51.36%、62.58%。试验结果表明,两步超滤法可用于鸡蛋清卵白蛋白与溶菌酶的规模化、高效分离。

不同贮藏条件下鸡蛋清中主要蛋白质特性的变化

目的探讨贮藏条件对鸡蛋品质的影响及品质变化机制。方法研究25℃室温贮藏、4℃冷藏及50%CO2+9%O2+41%N2三元气体包装室温贮藏条件下,鸡蛋清卵白蛋白、卵黏蛋白、溶菌酶的品质变化。结果实验结果表明:在35 d贮藏期间,室温组蛋清S-卵白蛋白含量从初始值14.867%迅速增至94.345%;卵黏蛋白含量从2.931 mg/g降至0.341 mg/g;溶菌酶含量从1.488 mg/m L增加到4.851 mg/m L,溶菌酶活力从30166.7 U/m L降低到15933.3 U/m L。冷藏组和气调组均能有效降低卵白蛋白N-构型向S-构型转化的速度,降低S-卵白蛋白含量(P<0.01);抑制卵黏蛋白分解,保持卵黏蛋白含量(P<0.01),阻止溶菌酶变性和卵黏蛋白-溶菌酶复合体解离,保持溶菌酶含量(P<0.01),并维持溶菌酶活力(P<0.01),三者综合作用可以减缓蛋清稀化的进程。结论 4℃冷藏和气调包装室温贮藏均能保持蛋清蛋白质的特性。

不同酶处理对鸡蛋清中卵白蛋白致敏性的影响

选取了木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和动物蛋白水解酶,并利用单因素实验,以水解度为指标,确定各种蛋白酶对蛋清蛋白最佳的酶解工艺参数。在此基础上,对蛋清蛋白进行水解,通过SDS-PAGE和间接竞争ELISA检测各蛋白酶蛋清水解液,比较各蛋白酶对蛋清中卵白蛋白抗原性降低效果。SDS-PAGE结果显示木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和动物水解蛋白酶对卵白蛋白的降解效果较明显,胰蛋白酶和风味蛋白酶的降解效果不明显;间接竞争ELISA检测结果表明,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对卵白蛋白抗原性的降低作用更有效,分别达到了57.8%和49.6%,其他几种酶都在30%左右。因此可以选用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对研究开发脱敏鸡蛋食品做进一步研究。

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺。采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度。结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76%;卵转铁蛋白抑菌率为48.84%。该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产。

蛋清蛋白质的糖基化产物结构与凝胶强度关系的探究

鸡蛋清因其良好凝胶性通常以蛋白粉的形式作为食品配料用于肉制品、鱼糜制品等食品中。蛋清蛋白粉凝胶(性)强度主要取决于蛋清蛋白质本身的结构,而专用蛋清蛋白粉的高凝胶(性)强度可通过蛋清蛋白质结构修饰得以实现。前期研究证明,蛋清蛋白质与多糖糖基化接枝改性能够显著提高蛋清蛋白质凝胶性且优于其它改性方法,因此,研究糖基化产物结构与凝胶强度之间的关系,是进一步广泛应用糖基化蛋白的关键因素,也是蛋白质糖基化研究中的新课题。探讨糖基化蛋白质结构与其凝胶性之间的关系,为蛋清卵白蛋白糖基化改性技术工业化应用提供一定的理论基础。

Q-Sepharose FF色谱分离制备鸡蛋卵白蛋白的研究

目的研究鸡蛋卵白蛋白的分离工艺条件。方法采用Q-Sepharose FF色谱法分离鸡蛋清中的卵白蛋白,并用电泳和RP-HPLC色谱法测定其纯度。结果在40 mL色谱柱(Φ2.0 cm×20cm)中,蛋清(蛋白质含量为27.5 mg/mL)进样量为140 mL时,色谱柱对卵白蛋白的吸附量达到饱和;用含0.15 mol/L NaCl的Tris-HCl(pH8.0)洗脱液洗脱,获得的鸡蛋卵白蛋白的纯度达92%。结论采用Q-Sepharose FF色谱法分离鸡蛋卵白蛋白,整个工艺路线简便、快捷、成本低、效率高,适宜于工业生产应用。

鸡蛋清磷酸化蛋白质组鉴定与分析

为了系统地阐明鸡蛋清磷酸化蛋白质的结构和功能特性,本研究采用蛋白质组学策略对鸡蛋清的磷酸化修饰蛋白质组进行鉴定与分析。鸡蛋清酶解产物首先经固定化金属螯合亲和层析分离富集磷酸肽,再经纳升液相色谱-串联质谱分析和鉴定。通过数据库检索匹配,共鉴定出33个特异性磷酸化修饰多肽,包含41个磷酸化修饰位点,归属于25种鸡蛋清磷酸化蛋白。基序分析显示,大多数磷酸化修饰位点的序列特征为"S-X-E";基因本体功能注释分析表明,鸡蛋清磷酸化蛋白质主要参与"生物调节"、"刺激反应"、"发育过程"等生物学过程,主要涉及"结合"、"催化"等分子功能。本研究结果将为鸡蛋清蛋白质相关研究提供关键的磷酸化修饰结构信息。

竞争性ELISA检测鱼糜制品中蛋清含量

通过纯化蛋清中主要成分卵清蛋白(ovalbumin,OVA),制备抗OVA多克隆抗体,利用制备的抗体建立鱼糜制品中蛋清定量检测的竞争性酶联免疫吸附测定方法(competitive enzyme linked-immunosorbent assay,c-ELISA)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和Western blot结果显示,制备的抗OVA多克隆抗体特异性良好。以热处理的OVA为竞争抗原建立的c-ELISA法检测限为1.82 mg/kg,组内变异系数为3.1%,组间变异系数为7.8%,回收率为87.4%~97.2%,表明建立的方法重复性好,准确性较高。利用建立的方法对6种商品化的鱼糜制品进行检测,发现其蛋清的添加量在2.7~83.5 g/kg之间。本研究为今后鱼糜制品中蛋清含量规范标识的监管提供了重要的技术支持。

卵清蛋白肽的制备及生物活性研究进展

鸡蛋作为人体补充蛋白质的主要来源之一,在市场中占有较大份额,但蛋类深加工产品的研发及市场拓展尚不十分充分。采用蛋白酶水解食物蛋白制备的小分子肽易吸收,并对人体健康发挥积极作用。近年来,卵清蛋白酶解制备的卵清肽被广泛研究,其生物功能得到逐步揭示,包括抗氧化、降压、抗菌、免疫调节、抗炎、降糖等。卵清肽的深入研究有利于充分利用禽蛋资源,提高其附加值,且卵清肽有望应用于食品、化妆品及医药用品等领域,具有较好的经济效益和社会效益。本文对卵清蛋白肽的制备工艺与生物活性进行概述,旨在为其进一步开发与应用提供有益参考。

糖基化反应过程中蛋清蛋白粉的功能性研究

选用葡聚糖与蛋清粉发生糖基化反应,研究反应过程中蛋清粉凝胶性、起泡性、乳化性及热稳定性的变化。实验结果表明,随反应时间延长蛋清粉的乳化性逐渐增高。糖基化反应2 d时蛋清粉样品的乳化活性提高了1.1倍,反应5 d时蛋清粉样品的乳化活性提高了1.4倍;随反应时间的延长,糖基化蛋清粉的起泡性不断提高,反应2 d后起泡性的增幅变缓,在糖基化反应5 d时,起泡性与泡沫稳定性较0 d的样品分别可提高0.4倍和1.4倍。经糖基化改性的蛋清粉的热稳定性明显优于未改性样品,且在1-4 d反应时间内,反应时间越长的蛋清粉热稳定性越好。实验结果证明,糖基化反应对蛋清粉的凝胶性、乳化性、起泡性和热稳定性都有良好的改善效果。

响应曲面法优化卵白蛋白提取条件研究

以鸡蛋清为原料,采用饱和硫酸铵盐析和pH值调节相结合的方法对卵白蛋白进行提取。在饱和硫酸铵溶液浓度、提取液pH、提取温度、提取时间等单因素试验基础上,采用响应曲面法对卵白蛋白进行提取条件研究。结果表明,卵白蛋白的最佳提取条件为:饱和硫酸铵溶液浓度61%、pH4.6、提取时间124 min、提取温度52℃时,卵白蛋白的提取率为82.14%,纯度达90.12%。

基于印迹聚吡咯膜电化学传感器检测S-卵白蛋白的研究

鉴于蛋清中S-卵白蛋白的含量与鸡蛋新鲜度和品质有较大相关性,将S-卵白蛋白含量作为评价鸡蛋新鲜度和品质的指标具有较大的前景和意义。本文通过循环伏安法和差分脉冲伏安法对传感器制备的扫描圈数、扫描速率、模板洗脱时间和孵化时间进行了优化,确定最佳扫描圈数为18,扫描速率为100 mV/s,模板洗脱时间为1.5 h,孵化时间为40 min,成功制备了能特异性识别S-卵白蛋白的印迹聚吡咯膜电化学传感器。采用场发射扫描电镜对印迹和非印迹传感器的微观结构进行了表征。通过差分脉冲伏安法,探讨了不同S-卵白蛋白浓度与峰电流变化的依赖关系,确定S-卵白蛋白浓度在10^(-6)～10^(-3) mg/mL范围内时,浓度与峰电流变化值具有良好线性关系,并得出检出限为6.75×10^(-7)mg/mL。该印迹传感器对S-卵白蛋白具有良好特异性性响应,可用于定量检测S-卵白蛋白。

卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,以用于流感疫苗中OVA含量的测定。方法 以兔抗OVA多克隆抗体作为包被抗体,HRP标记的兔抗OVA多克隆抗体作为检测抗体建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法。对包被抗体浓度(2、1、0.5、0.25μg/mL)、酶标抗体浓度(0.5、0.25、0.125μg/mL)、封闭液(1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖,以未封闭为对照)进行优化,并确定Cut-off值作为判断标准。对方法的线性范围及检测下限、特异性、重复性和准确度进行验证。结果 该方法的最适检测条件为:包被抗体浓度1μg/mL,酶标抗体浓度0.25μg/mL;封闭液为2%BSA+2%蔗糖;Cut-off值为0.051 66。该方法线性范围为5~0.313 ng/mL,检测下限为0.078 ng/mL;与流感病毒、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、Vero细胞上清液等均不发生反应;板内变异系数(CV)在2.562%~13.887%之间,板间CV在4.000%~16.497%之间;该方法检测结果与德国SERAMUN OVA定量检测试剂盒检测结果的符合率在93.79%~107.05%之间。结论 建立的OVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、重复性、线性范围及准确度,且操作简便、成本低,可用于OVA的定量检测。