Chicken egg yolk antibodies (IgY) as non-antibiotic production enhancers for use in swine production： a review

In recent years, the use of in-feed antibiotics for growth and disease prevention in livestock production has been under severe scrutiny. The use and misuse of in-feed antibiotics has led to problems with drug residues in animal products and increased bacterial resistance. Chicken egg yolk antibodies （IgY） have attracted considerable attention as an alternative to antibiotics to maintain swine health and performance. Oral administration of IgY possesses many advantages over mammalian IgG such as cost-effectiveness, convenience and high yield. This review presents an overview of the potential to use IgY immunotherapy for the prevention and treatment of swine diarrhea diseases and speculates on the future of IgY technology. Included are a review of the potential applications of IgY in the control of enteric infections of either bacterial or viral origin such as enterotoxigenic Escherichia coil, Salmonella spp., rotavirus, porcine transmissible gastroenteritis virus, and porcine epidemic diarrhea virus. Some potential obstacles to the adoption of IgY technology are also discussed.

A rapid and convenient dot-immunobinding assay for chicken egg-yolk antibodies

The dot-immunobinding assay was applied to investigate the characteristics of chicken egg yolk antibodies. This method of assay was proved to be a rapid and simple method to demonstrate and characterize the egg-yolk antibody IgY in comparison with the traditional ELISA assay. By using the BandScan software, the gray scale value of dots and the background could be determined. According to the intensity of dots (gray scale value) compared to the standard sample of 10μg, how much IgY remained can be determined in a shorter time.

抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的 观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法 应用白色念珠菌作为抗原免疫 2 5周龄Leghorn鸡 ,通过改良水溶法 (WD)提取蛋黄中抗体IgY ,双紫外光测定抗体含量 ,SDS PAGE电泳检测抗体纯度 ,Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源 ,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果 抗体含量 13mg/ml蛋黄液 ,抗体纯度达到 95 % ,Westernblot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性 ,其具有良好的热稳定性。结论 鸡蛋黄内含有丰富的抗体 ,通过WD水溶提取法可得到高产量 ,高纯度的特异性抗体IgY ,证明其来源于鸡血清中的IgG 。

抗白色念珠菌IgY的稳定性与应用研究

目的 观察抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY的稳定性与体外生物学效应。方法 用水溶法从免疫鸡蛋黄中提取抗白色念珠菌抗体IgY ,ELISA法检测抗体耐热、耐酸、耐碱的稳定性 ,观察IgY抑制白色念珠菌生长和抑制白色念珠菌粘附肠上皮细胞(IEC 6)。结果 IgY在巴氏消毒后活性为对照的 61 % ,在pH 7 0至 3 0酸性环境中活性改变不显著 ,在pH 7 9,37℃作用 1 50min活性仍为对照的 60 %。IgY在 1 0mg/ml时能明显抑制白色念珠菌生长和对肠上皮细胞的粘附 ,明显降低细胞上清二胺氧化酶(DAO)释放。结论 鸡蛋黄抗体IgY具有高度稳定性和良好的体外生物学效应。

IgY与双歧杆菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究

目的 观察特异性抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY和双歧杆菌的体内生物学效应 ,探讨将二者复合应用的可能性。方法 建立无特殊病原菌 (Specificpathogenfree ,SPF)小鼠烧伤后口服白色念珠菌感染模型 ,应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白色念珠菌量、盲肠内容物白色念珠菌量以及白色念珠菌脏器移位率。结果 烧伤SPF小鼠喂服IgY和双歧杆菌后 ,均能明显抑制肠道内白色念珠菌生长和白色念珠菌粘附肠上皮细胞 ;二者复合应用后还能明显降低脏器白色念珠菌移位率。结论 特异性鸡蛋黄抗体IgY具有良好的体内生物学效应且优于单独使用双歧杆菌 。

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。

抗哇巴因鸡蛋黄抗体IgY的制备

目的制备出高特异性的抗哇巴因多克隆抗体,为进一步提高内源性哇巴因的检测的敏感性和特异性提供实验基础。方法采用不同剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物(0.5 mg/kg;1.0 mg/kg)免疫母鸡,收集鸡蛋;采用聚乙二醇法分离、纯化鸡蛋黄中抗哇巴因抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY(yolk immunoglobulin)的抗体效价。SDS-PAGE电泳分析IgY纯度。结果免疫后1周,鸡蛋黄中可检测出IgY;免疫后6周,鸡蛋黄中IgY的效价迅速升高,最高效价达到1∶10 240,持续至少4周。结果还显示,大剂量免疫母鸡获得高效价抗体持续时间较长。结论采用大剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物免疫母鸡,可以获得较高效价的抗哇巴因IgY。该方法简单,高效价抗体持续时间长,是制备抗体较为有效的方法。

对虾鳗弧菌卵黄抗体(IgY)的制备及其对人工感染的保护研究

以纯培养的鳗弧菌作为抗原，探讨对虾鳗弧菌（Vibrio anguillarum）卵黄抗体（IgY）的制备技术，以及IgY在对虾体内的代谢及对人工感染和自然感染弧菌病的保护作用。结果表明：鳗弧菌对蛋鸡有较好的免疫原性，产蛋鸡经免疫后，血清与卵黄中很快出现抗体，而且卵黄中的抗体水平要高于血清中的抗体水平。IgY对鳗弧菌的感染有可靠的保护作用，IgY经口服后很快到达直肠，继而血淋巴、肝胰脏中也出现抗体，并可持续 12-24h；投喂IgY的试验组对虾在7d内的死亡率为15％，极显著地低于对照组对虾的同期死亡率（为60％）。

IgY防治SPF小鼠白色念珠菌感染的研究

目的 :观察自制的抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY体内生物学效应。方法 :建立SPF小鼠烧伤后口服白色念珠菌(白念菌 )感染模型 ,应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白念菌量、盲肠内容物白念菌量 ,应用ELISA检测血浆肿瘤坏死因子 (TNFα)和二胺氧化酶 (DAO)含量。结果 :烧伤SPF小鼠喂服IgY后 ,能明显抑制肠道内白念菌生长和白念菌粘附肠上皮细胞 ;明显降低小鼠血浆中DAO和TNFα含量。结论

抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备

目的制备抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY),并观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度及稳定性。方法用载脂蛋白apoB免疫本地良种产蛋鸡,通过水溶法提取蛋黄中抗体IgY,Bradford法测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定抗体的特异性,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果经提纯的抗体含量为7.5 mg/ml,抗体纯度达到90%,Western blot免疫印迹法证明该抗体具有高度的特异性,70℃以下稳定性良好。结论抗载脂蛋白apoBIgY抗体的制备为下一步免疫学检测奠定了基础。

药效营养品IgY在动物饲料与疾病防治中的应用

鸡卵黄免疫球蛋白(Ig Y)作为一种能够预防或控制细菌性和病毒性传染疾病的药效营养品而受到人们的极大关注。与哺乳动物的免疫球蛋白(Ig G)相比,Ig Y具有安全、高效、特异性强和制备简易等优势,可添加到动物饲料中,起到防治动物疾病的作用。文章概述了Ig Y作为药效营养品在陆生及水生动物饲料及疾病防治中的应用,并阐述了Ig Y存在的问题及未来前景。

IgY抗体用于弓形虫感染小鼠病原学检测的研究

[目的 ]将抗弓形虫鸡卵黄抗体 (Ig Y)应用于免疫酶染色 ,探索弓形虫感染的病原学诊断途径。 [方法 ]取急性感染弓形虫小鼠的肝、脾和肾组织切片 ,用 Ig Y作为第 1抗体 ,间接酶免疫染色 ,检查细胞内弓形虫速殖子。 [结果 ]在细胞内可见呈弧形、半月形紫红色半透明的弓形虫速殖子 ,虫体完整 ,一般 1～ 4个虫体 /细胞 ,以 2～ 3个多见。 [结论 ]Ig Y抗体的间接酶免疫染色试验用于诊断急性感染弓形虫的小鼠 。

抗副溶血弧菌卵黄抗体制备及其与不同血清型菌株交叉反应研究

为探索卵黄抗体对防控凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)病的潜在作用,将2种血清型(O1:KUT和OUT:KUT)的3株副溶血弧菌制备成灭活疫苗,分别免疫产蛋鸡制备卵黄抗体。通过ELISA实验和试管凝集实验,评估了卵黄抗体的效价消长规律、抑菌效果和交叉反应情况。结果显示:3株副溶血弧菌均能诱导高特异性水平的卵黄抗体,抗体凝集效价和ELISA效价的消长趋势相近,均在4免后10~60 d达到卵黄抗体的效价平台期,凝集效价在1∶8以上,ELISA效价在1∶6400以上;卵黄抗体与血清型相同的其他副溶血弧菌发生强烈的交叉ELISA和交叉凝集反应,但与血清型不同的副溶血弧菌有较低的交叉ELISA反应,无交叉凝集反应。研究表明副溶血弧菌能刺激蛋鸡产生高特异性水平的卵黄抗体,对不同血清型菌株不具有交叉保护效果,可为抗副溶血弧菌卵黄抗体产品的开发与应用提供参考。

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡，水稀释法制备IgY抗体，以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体（IgY·E）和兔抗IgG抗体（IgG—E）分别作为检测抗体，IgY抗体和兔抗IgG抗体分别作为捕捉抗体，组合建立4种双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测循环抗原，分析各种方法检测SEA的灵敏度，并平行检测急性日本血吸虫病人血清6份、慢性日本血吸虫病人血清29份、华支睾阳性者血清9份、卫氏并殖吸虫阳性者血清15份、弓形虫阳性病人血清7份、正常体检者血清118份。结果显示，以IgY为捕捉抗体或检测抗体，可检测到浓度为7．5ng／mL的SEA，灵敏度是基于IgG的夹心ELISA的4倍。4种夹心ELISA法检测急血病人血清阳性率均为100％，检测正常人血清的特异性为99．1％；与弓形虫、华支睾吸虫阳性者血清无交叉反应；-而检测慢血病人血清和并殖吸虫阳性者血清时，以IgY为捕捉抗体的2种ELISA（IgY＋IgY—E、IgY＋IgG—E）阳性率均分别为79．3％、6．7％；而IgG为捕捉抗体时，以IgY为检测抗体（IgG＋IgY—E）时的阳性率分别为75．8％、6．7％，以IgG为检测抗体（IgG＋IgG-E）时的阳性率分别为72．4％、13．3％，以IgY作为捕捉抗体的检测效果优于IgG。基于IgY抗体的双抗体夹心ELISA检测循环抗原具有良好的敏感性和特异性，可用于日本血吸虫病的免疫诊断。

基于IgY的ELISA用于囊尾蚴循环抗原的检测

目的建立基于IgY的双抗体夹心ELISA用于囊尾蚴病的诊断。方法制备并纯化抗囊尾蚴循环抗原(CA)卵黄抗体(IgY),建立以抗CA的IgY为捕获抗体,酶标记抗CA的单克隆抗体1A5为检测抗体的双抗体夹心ELISA法,共检测样品450份,并与捕获抗体和检测抗体均为单克隆抗体的ELISA法比较,验证方法的敏感性、特异性与实用性。结果成功制备并鉴定了特异性IgY抗体,建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系。IgY-ELISA和双单抗-ELISA检测囊尾蚴CA的灵敏度分别为8.3μg/L和13.9μg/L。IgY-ELISA检测囊尾蚴病患者血清与脑脊液的CA阳性率分别为100%(139/139)与89.5%(17/19),囊尾蚴病猪血清的阳性率100%(222/222),健康人与健康猪血清的阴性率为100%。结论建立的基于lgY的双抗体夹心ELISA检测囊尾蚴CA用于囊尾蚴病诊断,具有较高的特异性和敏感性,可用于囊尾蚴病的辅助诊断。

抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究

目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。

基于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体IgY测定人血清中转铁蛋白

采用表面等离子体共振(SPR)方法,用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体IgG作为识别分子偶联于CM5传感芯片上,对人血清中的转铁蛋白进行了检测.考察了IgY在传感芯片上的偶联条件及芯片的再生条件.结果表明,在pH=4.0,IgY浓度为100μg/mL,流速为5μL/min的最佳偶联条件下,SPR响应信号和转铁蛋白浓度在50～500 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为39.56 ng/mL,对人血清样品检测的日间变异系数<8%,日内变异系数<5%,平均回收率为86.22%～94.51%.

IgY技术及其医药应用:理论基础

卵黄抗体技术 (IgY技术 )正在成为生物技术领域和医药研究中的新热点 ,并且越来越得到国内同仁的重视。因为卵黄抗体 (IgY)化学性质稳定 ,产量高、成本低 ,以及动物种系发生学距离的优势 ,更适于生产特异性抗体 ,具有开发功能性食品和新药的潜能。该文述及该技术发展的背景和理论基础 ,详细综述了禽类的免疫学系统、IgY技术的生物学基础。

免疫鸡产生IgY抗体的技术

IgY技术正在成为生物技术领域和医药研究中的新热点 ,并且越来越得到国内同仁的重视。因为卵黄抗体 (IgY)化学性质稳定 ,产量高、成本低 ,以及动物种系距离的优势 ,更适于生产特异性抗体 ,具有开发功能性食品和新药的潜能。作为系列介绍的第二部分 ,本文详细介绍和探讨免疫鸡产生IgY抗体技术的主要技术环节和实践应用方面的具体信息 ,包括动物饲养 ,对鸡的免疫 ,抗体特性 ,IgY提取技术 ,鸡单克隆抗体的制备等方面。

抗咽喉细菌复合抗原的IgY抗体活性研究

目的 :应用咽喉分离的细菌混合抗原免疫母鸡 ,提取鸡蛋黄中IgY ,通过ELISA方法证实IgY抗体的特异活性。方法 :采取咽喉炎相关的多种细菌作抗原免疫产蛋母鸡 ,收集鸡蛋 ,从蛋黄中提取IgY ,经纯化后进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗体活性的ELIAS测定。结果 :电泳呈现 1 2条带 ,证明IgY抗体中至少有 1 2种抗体成分 ,ELISA结果表明IgY抗体效价为1∶5 1 2。热稳定性试验结果显示 ,在 37℃温度下 ,IgY抗体活性无改变。结论 :应用多种混合的细菌抗原免疫母鸡 ,其鸡蛋黄中含有相应的IgY抗体成分 。