不同虫龄米缟螟所产三叶虫茶HPLC指纹图谱的研究

目的建立不同虫龄米缟螟幼虫所产三叶虫茶的HPLC指纹图谱。方法采用HPLC法,色谱条件:Sino-chrom ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-1%醋酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL.min-1;检测波长为285 nm;柱温为40℃。结果通过检测6批次三叶虫茶,建立其HPLC指纹图谱,共标定了26个共有指纹峰,并且比较了其中的白杨素苷和白杨素的含量。结论所用方法稳定、重复性好,可用于三叶虫茶的质量控制。

以白杨素为原料简便合成A环多氧黄酮的方法

建立了一种以价廉易得的白杨素为原料,经溴代反应、甲氧基化反应、选择性的甲基化和去甲基化反应合成了5个在天然产物中不易得到的A环多氧取代黄酮的方法,产物结构经1HNMR、13CNMR和EI-MS分析确认。该方法操作简便、条件温和、产率高、成本低,适合工业化生产。

白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的研究

目的:探讨白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳条件并筛选敏感细胞。方法:设立阴性对照组、空白调零组及40μmol/L白杨素、5.0μg/mL顺铂、40μmol/L白杨素+5.0μg/mL顺铂3个处理组,选取人结直肠癌细胞(HCT-116)、人鼻咽癌细胞(CNE1)、人肝癌细胞(HepG2)、人胃癌细胞(BGC-823)分别作用24 h。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞的增殖抑制率,采用Hoechst33342荧光染色法测定诱导肿瘤细胞的凋亡率,通过抑制率和凋亡率筛选出敏感细胞。采用L_9(3~3)正交设计方法,设立3个白杨素水平(10、20、40μmol/L),3个顺铂水平(13、2.5、5.0μg/mL),以及3种作用时间(12、74、36 h)处理敏感细胞,确定白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳作用条件。结果:与白杨素或顺铂单独处理组相比,MTT试验结果表明,白杨素联合顺铂作用组对上述4种肿瘤细胞增殖的抑制率均明显增加,差异均具有统计学意义(P均<0.01);Hoechst 33342染色实验发现,白杨素联合顺铂作用组诱导各肿瘤细胞的凋亡率亦均明显增加(P均<0.01)。白杨素联合顺铂作用组对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制率为(78.0±2.0)%、诱导细胞的凋亡率为(72.3±6.5)%。在4种细胞中,人胃癌细胞株BGC-823对白杨素联合顺铂抗肿瘤作用最敏感。正交实验的体外模型结果表明,最佳作用条件为白杨素40μmol/L联合顺铂5.0μg,mL,作用时间24 h。结论:白杨素能增强顺铂抑制人肿瘤细胞增殖和诱导人肿瘤细胞凋亡的作用。人胃癌细胞BGC-823是白杨素和顺铂联合作用的敏感细胞株。

白杨素在人小肠S9中磺酸化结合反应的代谢特性

目的研究白杨素分别与人重组酶SULT1A3和人小肠S9(human small intestine S9,HSI S9)孵育体系磺酸化结合反应的代谢特性。方法采用高效液相色谱法,测定白杨素及其代谢产物,并应用LC-MS/MS液质联用技术鉴定其结构。分别建立白杨素与重组酶SULT1A3及与人小肠S9的反应体系,测定不同浓度的白杨素在不同酶反应中的代谢速率。结果白杨素与SULT1A3及人小肠S9孵育体系反应的代谢产物均为单磺酸化结合产物。白杨素与重组酶SULT1A3及人小肠S9的酶反应均呈双相动力学特征。白杨素与SULT1A3酶反应的动力学参数Km为(3.06±1.04)、(0.41±0.06)μM,Vmax为(12.13±1.30)、(6.72±1.61)nmol/(min·mg),Vmax/Km为3.96、16.39 mL/(min·mg)。白杨素与人小肠S9的酶反应的动力学参数Km为(1.92±0.35)、(0.01±0.00)μM,Vmax为(0.52±0.02)、(0.08±0.02)nmol/(min·mg),Vmax/Km为0.27、8.00 mL/(min·mg)。重组酶SULT1A3和人小肠S9分别介导的白杨素磺酸化结合反应的代谢呈现显著的相关性(R2=0.985)。结论 SULT1A3在白杨素的肠道代谢中发挥主导作用,小肠可能是白杨素的主要代谢器官。

白杨素减轻机械性创伤导致的大鼠继发性心肌损伤

目的观察白杨素对机械性创伤(MT)引起的大鼠继发性心肌损伤的保护作用,并探究其机制。方法将大鼠分为对照组、创伤组、创伤给药组(注射白杨素)和创伤溶剂组(注射DMSO),每组5只。检测左心室舒缩压力;TUNEL检测心肌细胞凋亡;MTT比色法检测细胞增殖;ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达量;DCFH-DA法测定活性氧(ROS)数量;激光共聚焦显微镜观察心肌细胞内Ca2+浓度。结果与对照组相比,创伤组血流动力学参数LVDP、MAP、+d P/d Tmax和-d P/d Tmax均显著下降(P<0.01);心肌细胞凋亡指数显著上升(P<0.01);TNF-α诱导细胞炎性反应下细胞存活率明显下降(P<0.01);TNF-α含量和ROS水平均上升(P<0.01)。而白杨素组相比于创伤组,心功能各指标均显著上升(P<0.01);心肌细胞凋亡指数显著下降(P<0.01);TNF-α诱导细胞炎性反应下细胞存活率明显上升(P<0.01);TNF-α含量和ROS水平均下降(P<0.01)。结论 MT导致心肌损伤时白杨素通过抑制TNF-α和ROS的过量释放及细胞内钙超载,改善心肌细胞的凋亡而发挥心脏保护作用。

白杨素对顺铂及喜树碱诱导肝肿瘤细胞HepG2凋亡的增敏作用

目的研究天然产物白杨素(chrysin)对损伤DNA的抗肿瘤药物顺铂和喜树碱诱导肝肿瘤细胞(Hep G2)死亡的作用及机制。方法白杨素以不同浓度单独/联合顺铂或喜树碱处理Hep G2,于倒置显微镜下观察肿瘤细胞形态变化,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析细胞活性,获得细胞死亡的定量资料;并以Western blot方法分析凋亡标志蛋白caspase-3和多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)以及凋亡抑制蛋白Bcl-x L、x IAP、FLIP相应的变化情况。结果形态学观察可发现白杨素联合顺铂或喜树碱处理可明显增加Hep G2细胞的死亡,MTT法分析显示,白杨素联合抗肿瘤药物处理细胞,无论与未处理对照比较还是与单独白杨素、单独顺铂或单独喜树碱处理比较,均使细胞活性显著降低(P<0.05);Hochest 33342荧光染色表明,联合白杨素和抗肿瘤药物处理细胞可观察到明显的核固缩,而未处理对照及单独白杨素、单独顺铂或喜树碱处理则无此作用;Thermo高内涵筛选系统分析结果显示,联合白杨素和抗肿瘤药物处理可使凋亡细胞显著增加(P<0.05)。Western blot检测到凋亡标志蛋白caspase-3和PARP活化降解;全caspase酶抑制剂z-VAD-fmk可有效阻止凋亡标志蛋白caspase-3和PARP的活化降解。白杨素联合顺铂可抑制顺铂上调的凋亡抑制蛋白FLIP和x IAP表达,而白杨素联合喜树碱可降低喜树碱引起的凋亡抑制蛋白Bcl-x L的高表达。结论天然产物白杨素能有效促进DNA损伤类抗肿瘤药物诱导的Hep G2细胞凋亡,核因子(NF)-κB调节的凋亡抑制蛋白表达降低是其重要的机制。