热缺血损伤对大鼠心脏死亡供肝线粒体形态和功能的影响

背景:如何才能很好的把握控制心脏死亡后捐献器官的功能活性,使移植物达到最佳功能状态是器官移植领域研究的重点方向之一。目的:初步探讨热缺血损伤对大鼠心脏死亡供肝功能的影响。方法:建立SD大鼠心脏死亡动物模型,将大鼠随机分为6组,分别为对照组(热缺血0 min组),热缺血10 min组,热缺血20 min组,热缺血30 min组,热缺血40 min组和热缺血50 min组。取各组大鼠肝脏标本制备超薄切片,透射电镜观察肝细胞结构改变并行Flameng评分。提取肝脏线粒体,用分光光度法测定细胞色素C氧化酶的活性。结果与结论:透射电镜下见热缺血30 min内肝细胞无明显改变,核膜尚完整,线粒体轻度肿胀,线粒体嵴未发生断裂,Flameng评分在2分以下。随着热缺血时间的延长,细胞核固缩,部分肝细胞自溶,可见凋亡小体,线粒体基质凝固,线粒体逐渐呈空泡状,Flameng评分3至4分。线粒体细胞色素C氧化酶活性在热缺血30 min内无明显改变,热缺血40 min组和热缺血50 min组发生明显降低。从线粒体形态和细胞色素C氧化酶活性两方面来看,热缺血时间在30 min内对肝脏功能影响较小,热缺血时间在40 min以上时肝脏呈不可逆性损伤。

脑室内移植嗅成鞘细胞改善大鼠阿尔茨海默病的症状

目的探讨嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病的影响。方法sD大鼠双侧海马注射ABl．40，建立AD大鼠模型。实验动物分为四组：正常对照组、AD模型组、OECs移植组、MCSF注射组，每组10只。体外原代培养嗅成鞘细胞并将其移植至AD大鼠侧脑室。运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术，观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，COX）活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）阳性神经元数，以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化。结果与正常对照组比较，AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及CO II mRNA表达、NOS阳性神经元数明显降低或减少俨〈0．05），线粒体数肇减少，结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂；嗅成鞘细胞移植明显上调上述指标俨〈0．05），并对神经元线粒体超微结构有明显的保护作用。结论嗅成鞘细胞移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和CO1ImRNA、NOS阳性神经元表达以及保护神经元线粒体等作用，对大鼠阿尔茨海默病具有明显的治疗作用。

An Enzymologic Study on Bone Marrow Cells in Patients with Aplastic Anemia Treated by Supplementing the Kidney and Removing Blood Stasis

The content of cytochrome oxidase (CCO), succinate dehydrogenase (SDH) and neutrophil alkaline phosphatase (NAP) in bone marrow cells in 68 cases of aplastic anemia before and after treatment was determined by computerized graphical analysis and compared with that of normal volunteers (control group). The significantly lowered CCO and SDH levels and the markedly increased NAP content before treatment (P<0.01) became approximately normal after that of supplementing the kidney and removing blood stasis (P >0.05).

miR-181c对缺氧预处理大鼠卒中的脑保护作用机制

目的探讨miR-181c对缺氧预处理大鼠的神经保护作用及其作用机制。方法将39只雄性SD大鼠按随机数字表法分成5组，分别为正常对照组、假手术组、单纯缺血组、缺氧预处理组、缺氧预处理缺血组。术后测定神经功能缺失体征评分、脑梗死面积；实时荧光定量PCR检测皮质中miR-181c的表达；蛋白质印迹检测皮质中线粒体细胞色素C氧化合酶1亚基（mt—cox1）蛋白的表达。结果缺氧预处理缺血组大鼠的神经功能缺失体征较单纯缺血组大鼠有明显改善，同时梗死面积由22．50％±2．96％减小到16．40％±3．13％（t=5．26，P〈0．01）。缺氧预处理缺血组miR-181c的表达较单纯缺血组表达明显降低（1．89±0．14与3．05±0．26，t=6．10，P〈0．01），其mt—cox1蛋白的表达也明显降低（0．54±0．07与0．93±0．04，t=8．01，P〈0．01）。结论缺氧预处理可能通过下调miR-181c基因表达使其靶蛋白mt—cox1表达增加，有效缓解SD大鼠的缺血损伤。

Cox7a2荧光载体构建及其对小鼠支持细胞细胞色素C氧化酶活性的影响

目的构建pEYFP-Cl-Cox7a2表达载体，研究其在小鼠睾丸支持细胞（TM4）中的表达及对细胞色素C氧化酶（COX）活性的影响。方法应用RT—PCR方法从TM4细胞克隆Cox7a2，利用BamHI和EcoRI酶切位点将Cox7a2克隆到pEYFP—C1载体，经酶切、测序及蛋白印迹等技术进行鉴定，并将重组质粒pEYFP—C1-Cox7a2转染TM4细胞后6、12、24、48h，采用分光光度计测定COX活性。结果从TM4细胞克隆到Cox7a2基因完整的编码序列，大小为252bp。构建pEYFP—CI．Cox7a2表达载体，经酶切、测序鉴定证实克隆正确，转染TM4细胞的效率达70％，融合蛋白表达产物相对分子质量为37000。重组质粒转染后6、12、24、48h时COX活性分别为（0．642±0．051）、（0．542±0．049）、（0．311±0．021）和（0．216±0．010）U／mg，不转染组和转染空载体组分别为（0．714±0．064）、（0．653±0．031）U／mg。与不转染组相比，重组质粒转染后12、24、48h组COX活性显著降低（P〈0．05）。结论重组质粒pEYFP—Cl-Cox7a2载体成功构建。CoxTa2基因对TM4细胞COX活性具有抑制作用，可能对调控COX活性发挥重要作用。