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Using capillary electrophoresis mobility shift assay to study the interaction of CdTe quantum dots with bovine serum albumin 被引量:2
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作者 Li Wen Shao Chao Qing Dong Xiang Yi Huang Ji Cun Ren 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2008年第6期707-710,共4页
In this work, the capillary electrophoresis mobility shift assay (CEMSA) was first adopted to study the interaction of protein with quantum dots (QDs). In this study, bovine serum albumin (BSA) and CdTe QDs were... In this work, the capillary electrophoresis mobility shift assay (CEMSA) was first adopted to study the interaction of protein with quantum dots (QDs). In this study, bovine serum albumin (BSA) and CdTe QDs were used as model samples. We observed that BSA was facilely adsorbed to CdTe QDs surface, and the QD-BSA complex was formed by a 1:1 stoichiometric ratio. A value of 2.17 4-0.27 × 10^6 mol^-1 L^-1 (at 25 ℃) for the association constant was obtained by CEMSA. 展开更多
关键词 CdTe quantum dots Bovine serum albumin Capillary electrophoresis mobility shift assay Interaction
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创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织核转录因子-κB活性表达及抗菌药物的影响 被引量:12
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作者 卢中秋 梁欢 +5 位作者 李萌芳 邱俏檬 杨光田 周铁丽 洪广亮 吴斌 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1090-1093,共4页
目的探讨创伤弧菌(VV)脓毒症大鼠肝组织NF-κB活性以及抗菌药物头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星对其的干预效应。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),使用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定各组大鼠肝组织NF... 目的探讨创伤弧菌(VV)脓毒症大鼠肝组织NF-κB活性以及抗菌药物头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星对其的干预效应。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),使用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定各组大鼠肝组织NF-κB活性。结果正常大鼠肝组织NF-κB活性较低,VV组染菌2h的肝组织NF-κB活性即达到高峰,较NC组明显增高(P<0.05),后肝组织NF-κB活性逐渐减少,但VV组染菌6、9、12、16h肝组织NF-κB活性仍明显高于NC组(P<0.05)。AA组染菌后9、12h肝组织NF-κB活性仍显著高于NC组(P<0.05),后逐渐减低,染菌16h、36h、2周的肝组织NF-κB活性与NC组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与相应时间点的VV组相比,AA组染菌9、12、16h的肝组织NF-κB活性明显降低(P<0.05)。结论创伤弧菌脓毒症早期肝组织NF-κB活性即达高峰,及早使用头孢哌酮钠和乳酸左氧氟沙星可明显减低创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织NF-κB活性。 展开更多
关键词 创伤弧菌 脓毒症 核转录因子-ΚB 抗菌药物 凝胶电泳迁分析法
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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量:5
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作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页
研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多
关键词 EZRIN基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析
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汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究 被引量:3
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作者 刘合宾 刘克洲 +1 位作者 翁景清 朱智勇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期110-117,共8页
汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向... 汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有。为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达。经NI NAT亲和柱和HiPrep16/10DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Westernblotting进行区分和鉴定。以T4DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针。然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针。该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义。 展开更多
关键词 汉坦病毒 疫苗 重组核蛋白 表达 纯化 汉坦病毒型肺炎综合征
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橡胶树HbCBF1蛋白的原核表达及其CRT结合活性分析(简报) 被引量:5
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作者 程汉 高静 +1 位作者 张燕燕 黄华孙 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2008年第5期423-428,共6页
巴西橡胶树(Hevea brasiliensis),是大戟科橡胶树属植物.原产于巴西亚马逊河流域,是典型的热带高大乔木.所生产的橡胶是天然橡胶的重要来源。在我国.橡胶树栽培区主要分布在北纬18°到24°.冬季常常遭到寒潮和冷空气的... 巴西橡胶树(Hevea brasiliensis),是大戟科橡胶树属植物.原产于巴西亚马逊河流域,是典型的热带高大乔木.所生产的橡胶是天然橡胶的重要来源。在我国.橡胶树栽培区主要分布在北纬18°到24°.冬季常常遭到寒潮和冷空气的侵袭。30多年来的植胶历史证明.寒害是我国植胶区较为严重的自然灾害.是影响我国橡胶栽培的主要自然灾害之一。对橡胶树进行低温、抗寒生理研究,明确橡胶树的低温反应和抗寒机制.在理论和实践上都有重要意义。 展开更多
关键词 HbCBF1 C—repeat 凝胶迁移率变动分析 原核表达
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棉花GhGT-2转录因子的克隆及其功能分析 被引量:4
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作者 李月 刘晓东 +3 位作者 谢宗铭 董永梅 武冬梅 陈受宜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期4872-4884,共13页
【目的】棉花是重要的纤维作物,其生长常遭受非生物逆境危害,严重影响棉花的生长和产量。Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用。克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花... 【目的】棉花是重要的纤维作物,其生长常遭受非生物逆境危害,严重影响棉花的生长和产量。Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用。克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花抗逆性奠定基础。【方法】通过BLAST分析比对,从棉花EST数据库中获得1个高度同源基因,通过基因序列分析,发现其属于Trihelix转录因子GT-2亚家族,命名为GhGT-2。以棉花叶片总RNA为模板,根据EST序列设计引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得GhGT-2的编码序列。使用MEGA5对蛋白序列及其同源序列进行多序列比对分析,并构建同源物种间系统进化树,通过SMART网站(http://smart.emblheidelberg.de/)进行蛋白结构预测。以陆地棉品种新陆早26号为研究材料,在棉花15 d苗龄时(一对真叶期),分别对其植株进行非生物胁迫和ABA处理0、1、3、6和12 h,然后采集相应时段棉苗叶片。另外采集同一品种棉花的不同发育时期的根、茎、叶、花、开花后当天胚珠以及开花后12 d(12 days post anthesis,DPA)纤维等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法分析GhGT-2在棉花不同组织间的表达差异及其在低温、干旱、高盐和ABA处理下的表达模式。将GhGT-2克隆至GFP表达载体pBI221,和GAL4 DNA结合结构域载体,在拟南芥原生质体中验证GhGT-2在细胞内的定位情况和转录激活活性。利用凝胶迁移试验(EMSA)检测DNA结合元件。【结果】克隆了棉花GhGT-2的cDNA全长序列。该基因cDNA全长1 579 bp,开放阅读框为1 428 bp,编码475个氨基酸的蛋白,推导编码蛋白质的分子量为54.07 kD,等电点为8.96。SMART蛋白结构预测发现,该蛋白含有2个Trihelix家族典型的SANT蛋白结合域。系统进化树分析表明,GhGT-2属于Trihelix转录因子GT-2亚家族,与拟南芥AtGTL1、白杨PtaGTL1亲缘关系最近。实时荧光定量PCR表明,GhGT-2在棉花的根、茎、叶、花、开花后当天胚珠以及开花后12 d(12 DPA)纤维中均有表达,其中,在叶中表达量最高,在根中表达量最低。在冷胁迫下,GhGT-2除在3 h时表达量接近0 h外,在1、6和12 h的表达量均低于0 h,呈现抑制表达特征。在高盐、干旱和ABA处理3种胁迫下,GhGT-2在1 h的表达量均低于0 h,但3、6和12 h的表达量均高于0 h,表现为先抑制后上调表达特征。推测该基因可能参与棉花ABA信号通路中对逆境胁迫的抗性反应。利用拟南芥原生质体分析,GhGT-2主要定位于细胞核中,转录激活活性不明显。凝胶阻滞(EMSA)分析发现,GhGT-2可以结合GT元件GT2-Box、GT3-Box、GT-1b(BoxⅡ)和MYB元件MBS1、MRE1、MRE3、MRE4。【结论】获得棉花GhGT-2的全长cDNA序列,其编码蛋白含有2个SANT蛋白结合域,属于棉花Trihelix转录因子GT-2亚家族。在干旱、高盐和ABA逆境胁迫下,GhGT-2属于依赖于ABA胁迫响应基因调控网络,推测GhGT-2在陆地棉的非生物胁迫适应过程中可能具有重要的作用。 展开更多
关键词 棉花 Trihelix转录因子 非生物胁迫 亚细胞定位 转录激活 凝胶迁移试验
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康氏木霉中调控纤维素酶形成的两个调控因子的克隆及功能性分析 被引量:3
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作者 凌敏 覃拥灵 +1 位作者 李楠 梁智群 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1808-1812,共5页
锌指蛋白ACEI和Xyr1是里氏木霉中调控纤维素酶和木聚糖酶形成的两个调控因子,它们能竞争性结合木聚糖酶基因xyn1的启动子。为进一步研究ACEI和Xyr1调控纤维素酶基因表达的机制,本研究利用PCR技术扩增康氏木霉ACEI和Xyr1 DNA结合区的基... 锌指蛋白ACEI和Xyr1是里氏木霉中调控纤维素酶和木聚糖酶形成的两个调控因子,它们能竞争性结合木聚糖酶基因xyn1的启动子。为进一步研究ACEI和Xyr1调控纤维素酶基因表达的机制,本研究利用PCR技术扩增康氏木霉ACEI和Xyr1 DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中得到表达。凝胶迁移率移动试验表明ACEI和Xyr1的DNA结合区均可与纤维素酶基因cbh1启动子的287 bp序列特异性结合。提示ACEI与Xyr1不仅能竞争性结合xyn1启动子,也能竞争性结合cbh1启动子。 展开更多
关键词 调控因子 纤维素酶 凝胶迁移率移动试验
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原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制 被引量:3
8
作者 陈美珺 梁统 周克元 《海南医学院学报》 CAS 2009年第12期1488-1492,1497,共6页
目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫(RIA)法检测原... 目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫(RIA)法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹(western blot)法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析(EMSA)法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果:0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF-κB/p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。 展开更多
关键词 原花青素 环氧化酶-2 前列腺素E2 核转录因子-ΚB 电泳迁移率变动分析
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抑制NF-κB活性对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1 mRNA表达影响 被引量:2
9
作者 丁鹤林 王佑民 +4 位作者 徐明彤 陈黎红 张少玲 黎锋 傅祖植 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1020-1025,共6页
目的 研究抑制核因子 κB(NF κB)活性对糖尿病大鼠肾脏TGF β1mRNA表达影响。 方法 纯种♂Wistar大鼠分为 3组 :A组为正常对照组 (11只 ) ,B组为糖尿病大鼠未干预组 (11只 ) ,C组为糖尿病大鼠PDTC(NF κB活性抑制剂 )干预组 (9只 )... 目的 研究抑制核因子 κB(NF κB)活性对糖尿病大鼠肾脏TGF β1mRNA表达影响。 方法 纯种♂Wistar大鼠分为 3组 :A组为正常对照组 (11只 ) ,B组为糖尿病大鼠未干预组 (11只 ) ,C组为糖尿病大鼠PDTC(NF κB活性抑制剂 )干预组 (9只 )。饲养 18wk后取出肾脏 :以电泳迁移率变动分析技术检测肾组织NF κB活性 ,透射电镜检测肾小球基底膜厚度及系膜基质密度 (系膜基质面积 /系膜面积 ) ,RT PCR检测TGF β1mRNA表达。酶免疫分析法检测 2 4h尿白蛋白排泄 (UAE)。结果 肾组织NF κB活性在B组大鼠肾组织 (1 85± 0 5 4× 10 6)显著高于A组 (0 0 7± 0 11×10 6,P <0 0 1) ,C组 (0 2 5± 0 2 5× 10 6)显著低于B组 (P <0 0 1)。B组与A组比较 ,UAE (2 18± 1 98mgvs 0 4 1± 0 4 7mg,P <0 0 1)、肾小球基底膜厚度 (5 31 6± 10 7 6nmvs 312 4±2 5 4nm ,P <0 0 1)及系膜基质密度 (5 6 4 1± 6 78vs 33 95±5 2 2 ,P <0 0 1)均显著增高 ;C组大鼠UAE(0 5 6± 0 72 )mg、肾小球基底膜厚度 (315 8± 2 1 4 )nm及系膜基质密度 (37 97±7 37)均显著低于B组 (均P <0 0 1)。肾组织TGF β1mR NA表达在B组大鼠 (0 5 3± 0 2 0 )显著高于A组 (0 2 6±0 13,P <0 0 1) ,C组 (0 2 9± 0 10 )显? 展开更多
关键词 糖尿病肾病 核因子-ΚB TGF-Β1 吡咯烷二硫基甲酸酯 电泳迁移率变动分析
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人肺癌中NF-κBDNA结合活性的意义探讨 被引量:2
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作者 郭春宝 梁军 高宗炜 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第16期938-940,共3页
目的:观察在肺癌组织中核因子-κB(Nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的DNA结合活性,探讨其在肺癌发展中的意义。方法:采用电泳迁移率(Electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)同位素放射自显影的方法分别检测有随访资料的87例肺癌组织中NF... 目的:观察在肺癌组织中核因子-κB(Nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的DNA结合活性,探讨其在肺癌发展中的意义。方法:采用电泳迁移率(Electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)同位素放射自显影的方法分别检测有随访资料的87例肺癌组织中NF-κB的DNA结合活性。结果:NF-κBDNA结合活性在小细胞肺癌组织中高于其它病理类型,在低分化肺癌组织中结合活性较高,在淋巴结转移肺癌组织中结合活性高于无淋巴结转移肺癌组织(P<0.05)。结论:NF-κB的DNA结合活性与肺癌的病理类型、分化程度及是否有淋巴结转移等因素有关。 展开更多
关键词 核因子-KB 肺癌 电泳迁移率 放射自显影
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喉癌组织中核转录因子NF-kB的定量检测 被引量:3
11
作者 孙余才 胡国华 朱江 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2007年第2期141-143,共3页
目的:探讨核转录因子(nuclear transcription factor kappa B,NF-kB)的定量检测在喉癌组织中的意义。方法:采用蛋白质印迹杂交法(Western blot法)和凝胶电泳迁移率(EMSA)法对20例喉癌组织和10例癌旁正常组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB ... 目的:探讨核转录因子(nuclear transcription factor kappa B,NF-kB)的定量检测在喉癌组织中的意义。方法:采用蛋白质印迹杂交法(Western blot法)和凝胶电泳迁移率(EMSA)法对20例喉癌组织和10例癌旁正常组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB DNA结合活性进行定量检测,并进行分析比较。结果:喉癌组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB DNA结合活性均明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-kB在喉癌的发生发展过程中可能起一定的作用,并为喉癌的治疗能提供一个新靶点。 展开更多
关键词 喉肿瘤 核转录因子 蛋白质印迹杂交 凝胶电泳迁移率
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棉花脱水应答元件(DRE)结合蛋白GhDBP1的原核表达、纯化及其DNA结合活性(英文) 被引量:3
12
作者 黄波 刘进元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期247-253,共7页
棉花是一种重要的经济作物,其生产和产量要受到干旱、低温和高盐等环境胁迫的影响,因此提高棉花对这些胁迫的抗性非常重要.脱水应答元件(DRE-dehydrationresponsiveelement)结合蛋白(DBP)在调节植物对环境胁迫的抗性中起到非常重要的作... 棉花是一种重要的经济作物,其生产和产量要受到干旱、低温和高盐等环境胁迫的影响,因此提高棉花对这些胁迫的抗性非常重要.脱水应答元件(DRE-dehydrationresponsiveelement)结合蛋白(DBP)在调节植物对环境胁迫的抗性中起到非常重要的作用.而且过量表达DBP类基因的转基因植株能够很好抵抗这些环境胁迫,所以研究棉花中此类DRE元件结合蛋白对棉花生产有非常重要的意义.在以前的工作中,从棉花中分离一个DBP基因,命名为GhDBP1并在转录水平上分析它在棉花植株中的表达特征.在研究中,报道了GhDBP1的原核表达、纯化和它的DNA结合特性.GhDBP1基因的编码区用PCR技术扩增出来插入到原核表达载体pET28a中,并转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中.经过IPTG诱导,GhDBP1融合蛋白在BL21(DE3)菌株中成功进行表达.利用Ni-NTA亲和层析技术得到了纯化的融合蛋白.在非同位素的凝胶滞留实验中,纯化的GhDBP1融合蛋白能够结合到含有DRE元件的DNA片段上.另外,用SWISS-MODEL软件对GhDBP1蛋白的DNA结合区的三维结构进行了计算机模拟.模拟的结果显示,GhDBP1蛋白的DNA结合区的主链结构和折叠模式与已知的拟南芥GCC盒结合蛋白AtERF1的DNA结合区结构很相似.这些结果显示了GhDBP1是一个脱水应答元件(DRE)结合的转录因子,并可能运用与AtERF1的DNA结合区相似的结构和它的目标序列脱水应答元件(DRE)相结合. 展开更多
关键词 棉花 DRE结合蛋白 原核表达 纯化 凝胶滞留(emsa) 同源建模
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紫外交联实验筛选HCV RNA结合蛋白的应用 被引量:1
13
作者 张景霞 苏海霞 +4 位作者 李端 闫永平 门可 卢娟 王安辉 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期289-290,共2页
目的选择一种用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子较佳方法。方法用体外转录的方法制备地高辛标记(DIG)-HCV RNA;从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子。分别用紫外交联实验(UV)和凝胶迁移实验(EMSA)筛选HepG2细胞中... 目的选择一种用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子较佳方法。方法用体外转录的方法制备地高辛标记(DIG)-HCV RNA;从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子。分别用紫外交联实验(UV)和凝胶迁移实验(EMSA)筛选HepG2细胞中可与HCV RNA结合的蛋白质分子。结果2种实验方法均可检测到细胞蛋白质分子与HCV RNA结合,但凝胶迁移实验结果所见DIG-RNA信号比较弥散,而紫外交联实验的结果可见比较清晰的RNA-结合蛋白条带。结论紫外交联实验是用于筛选HCV-RNA结合蛋白的首选方案。 展开更多
关键词 紫外交联 凝胶迁移 RNA结合蛋白
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结直肠癌HPV16型感染与核因子-κB活化的关系研究 被引量:1
14
作者 周宇 叶文桃 麦海妍 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第5期264-266,共3页
目的 探讨结直肠癌HPV16型感染与核因子 κB(NF κB)活化的关系。方法 应用凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测 5 0例结直肠癌、30例结直肠腺瘤和 2 0例正常大肠组织核因子NF κBDNA结合活性 ,并用多聚酶链反应 (PCR)和southernblot检测H... 目的 探讨结直肠癌HPV16型感染与核因子 κB(NF κB)活化的关系。方法 应用凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测 5 0例结直肠癌、30例结直肠腺瘤和 2 0例正常大肠组织核因子NF κBDNA结合活性 ,并用多聚酶链反应 (PCR)和southernblot检测HPV16型DNA。结果 结直肠癌、腺瘤分别与正常结直肠组织比较 ,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA阳性率均明显增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;结直肠癌和结直肠腺瘤比较 ,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA阳性率差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。HPV16型DNA阳性和阴性结直肠癌患者比较 ,NF κBDNA结合活性差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 NF KB活化参与HPV16型在结直肠癌的致癌过程。 展开更多
关键词 结直肠癌 HPVl6型感染 核因子-ΚB活化 NF-ΚB 人乳头瘤病毒 emsa 肿瘤
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穿膜肽TAT-PTD的固相合成及其与DNA相互作用的研究 被引量:1
15
作者 管玉霞 罗泓 王锡平 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期94-98,共5页
通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-... 通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-PTD多肽与质粒DNA相互作用,实验表明TAT-PTD多肽与质粒DNA可以通过静电作用相互吸引、靠近并结合,于是为下一步小单孢菌基因工程的细胞转导提供了依据。 展开更多
关键词 小单孢菌 TAT-PTD多肽 质粒DNA 琼脂糖凝胶阻滞电泳 紫外吸收光谱
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N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析 被引量:2
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作者 刘天婵 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1953-1960,共8页
目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的... 目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位 ,在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果 :预测出 11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位 ,其中除已知转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP1)在MNNG处理后被激活外 ,用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有 2个转录因子—核因子Y(nuclearfactor,NFY)和GATA结合因子 (GATAbindingfactor,GATA)的活性升高。结论 :进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。 展开更多
关键词 进化足迹法 转录因子结合部位 凝胶阻滞试验 甲基硝基亚硝基胍
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N-乙酰半胱氨酸对脑缺血诱导信号转导与转录激活子-3的磷酸化及DNA结合活性的影响 被引量:1
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作者 李洪春 张光毅 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期391-393,共3页
目的 研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸对全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子 - 3(STAT3)的激活及 DNA结合活性的影响。方法 采用 SD雄性大鼠四动脉结扎 (4- VO)全脑缺血模型 ,以及腹腔注射给药的方法。运用抗磷酸化 STAT3抗体做... 目的 研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸对全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子 - 3(STAT3)的激活及 DNA结合活性的影响。方法 采用 SD雄性大鼠四动脉结扎 (4- VO)全脑缺血模型 ,以及腹腔注射给药的方法。运用抗磷酸化 STAT3抗体做免疫印迹 (IB)检测海马核抽提物磷酸化 STAT3的变化 ;以及电泳迁移率改变实验 (EMSA)分析核内 STAT3DNA结合活性的变化。结果 全脑缺血不同时间导致核内 STAT3磷酸化水平及 DNA结合活性的持续增高 ;缺血前 2 0 m in腹腔注射抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸能明显抑制其增高。结论 全脑缺血所致 STAT3的磷酸化水平及 DNA结合活性的增高与氧化应激有一定的关系。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 脑缺血 酪氨酸磷酸化 信号转导与转录激活子-3 DNA结合活性
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原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NF-κB DNA结合活性的抑制作用 被引量:4
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作者 陈美珺 梁统 周克元 《广东医学院学报》 2005年第2期115-118,共4页
目的:观察原花青素对脂多糖(L PS)诱导的RAW2 6 4 .7细胞核转录因子- κB(nuclear factor Kappa B,NF- κB)结合活性的影响。方法:L PS诱导RAW2 6 4 .7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κ... 目的:观察原花青素对脂多糖(L PS)诱导的RAW2 6 4 .7细胞核转录因子- κB(nuclear factor Kappa B,NF- κB)结合活性的影响。方法:L PS诱导RAW2 6 4 .7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:L PS诱导小鼠巨噬细胞肿瘤细胞株RAW2 6 4 .7后,其NF-κB的核结合活性明显增高。0 .8、4和2 0 mg/L的原花青素可明显降低L PS诱导下RAW2 6 4 .7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素对NF-κB活化的抑制作用可能是其抗炎的作用机理之一。 展开更多
关键词 核转录因子-KB 原花青素 电泳迁移率变动分析
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番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化
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作者 张红星 朱本忠 +5 位作者 谢远宏 张文 杨祥龙 尹胜 李欣 罗云波 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期546-550,共5页
从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因。测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%。将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pET-LeERF2,将其转化到大肠杆菌... 从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因。测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%。将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pET-LeERF2,将其转化到大肠杆菌BL21中。蛋白质诱导表达的温度为37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为3h,LeERF2表达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白的58%。应用Ni-NTA亲和层纯化回收的LeERF2表达蛋白的纯度为99%。银染凝胶阻滞实验表明,LeERF2蛋白能与含有GCC盒的逆境相关的几丁质酶启动子基因TLBP1结合。 展开更多
关键词 番茄 乙烯 LeERF2 原核蛋白表达 凝胶阻滞实验
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抑制核因子-kB对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP mRNA表达的影响
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作者 吴文 丁鹤林 +2 位作者 陈黎红 徐明彤 傅祖植 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期273-277,315,共6页
【目的】研究抑制NF鄄资B活性对糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3鄄MMP)mRNA表达的影响。【方法】纯种雄性Wistar大鼠分为3组:A组为正常对照组(11只),B组为糖尿病大鼠未干预组(11只),C组为吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NF鄄资B活性... 【目的】研究抑制NF鄄资B活性对糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3鄄MMP)mRNA表达的影响。【方法】纯种雄性Wistar大鼠分为3组:A组为正常对照组(11只),B组为糖尿病大鼠未干预组(11只),C组为吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NF鄄资B活性抑制剂)干预组(9只)。以链脲佐菌素制备糖尿病模型。大鼠饲养18周后取出肾脏,以电泳迁移率变动分析技术检测NF鄄资B活性,RT鄄PCR检测MT3鄄MMPmRNA表达,以透射电镜检测肾小球基底膜厚度及系膜基质密度,并收集24h尿检测尿白蛋白排泄(UAE)。【结果】NF鄄资B活性在B组大鼠肾组织(1.85±0.54)×106明显高于A组(0.07±0.11)×106,P<0.01,C组(0.25±0.25)×106明显低于B组,P<0.01。肾组织MT3鄄MMPmRNA表达B组大鼠(1.37±0.96)明显高于A组(0.75±0.34),P<0.01,C组(0.75±0.36)明显低于B组(P<0.01)。与A组大鼠比较,肾小球基底膜厚度(531.6±107.6)nmvs(312.4±25.4)nm,P<0.01)及系膜基质密度(56.41±6.78)vs(33.95±5.22),P<0.01,均显著增高,C组肾小球基底膜厚度(315.8±21.4)nm及系膜基质密度(37.97±7.37)均显著低于B组,均P<0.01。UAE在B组大鼠(2.18±1.98)显著高于A组(0.41±0.47),P<0.05,以及C组(0.56±0.72),P<0.05。【结论】糖尿病大鼠肾组织NF鄄资B活性及MT3鄄MMPmRNA表达增加,抑制NF鄄资B活性可使肾组织MT3鄄MMPmRNA表达降低。 展开更多
关键词 抑制核因子-ΚB 糖尿病 大鼠 肾组织 MT3-MMP MRNA 表达
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