HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

黄芪多糖对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用

目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、不同浓度H2O2组、(200、400、800)mg/L APS处理组。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型,使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率,待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后,用最佳H2O2浓度与不同浓度的APS共同作用于MRC-5细胞,确定APS对氧化损伤MRC-5细胞的最佳作用浓度;采用免疫荧光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)含量反映MRC-5细胞DNA氧化损伤情况;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的水平;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化。结果实验表明,H2O2孵育MRC-5细胞24 h,可诱导细胞损伤,使细胞存活力下降,且具有浓度依赖性。800μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型。与H2O2引起氧化损伤的模型组相比,200 mg/L的APS明显抑制H2O2引起的APE/Ref-1、TRX蛋白表达下调,降低8-OHd G含量,抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤,APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和TRX的表达,APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡。

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 。

c-Fos和巢蛋白在鼠胚肺内的表达及缺氧对其影响

目的探讨胚胎大鼠肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达及宫内缺氧对其表达的影响。方法将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚肺组织经c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果对照组肺组织c-Fos有弱表达,肺内支气管上皮有较强的巢蛋白表达;缺氧组肺组织c-Fos表达增强(P<0.05),肺内支气管上皮巢蛋白表达明显增强(P<0.05),且肺内支气管上皮以外肺组织也有巢蛋白表达。结论正常鼠胚肺组织内有c-Fos和巢蛋白表达,且巢蛋白的表达只在肺内支气管。缺氧可刺激鼠胚肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达。

红景天素抗老化作用的实验研究

本实验以体内、外相结合的研究方法,探讨了药用植物红景天提取物—红景天素对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)和大鼠肝脏的影响,观察了红景天素对2BS细胞生长和增殖的影响,以及对大鼠肝脏细胞形态和组化改变和肝组织中过氧化脂质(LPO)与肝血清超氧化物歧化酶(SOD)的变化。实验结果是红景天素能促进2BS细胞生长和增殖,降低大鼠肝组织LPO及肝细胞内脂褐素含量及酸性磷酸酶活性(ACPase)。结果证明红景天素有延缓细胞老化抗退变作用。

人二倍体细胞株HLF-02的建立及其生物学特性

目的 :建立HLF 0 2细胞株 ,为老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等研究提供新的实验材料。方法 :人二倍体细胞株HLF 0 2取于肺组织 ,用胰蛋白酶消化肺组织 ,可获 90 %以上具有正常代谢活性的肺细胞 ,对存活的肺成纤维细胞进行形态学观察、生长特性检查、核型分析、电镜观察和异种移植等。结果 :建成的HLF 0 2细胞株其形态表现、电镜观察、核型分析和异种移植等均符合二倍体细胞特征。经过 10个月的体外培养 ,共传 5 0代 ,细胞倍增时间 75 .5h ,染色体始终保持二倍体特性 ,异种移植成瘤试验阴性 ,无支原体污染。结论 :HLF 0 2是一株人二倍体细胞株 ,可用于对细胞老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等方面的研究。

人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义.方法对孕妇自愿捐献的胎龄为10～34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达.结果胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内.随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移.到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞.结论在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用.

西安市采暖季与非采暖季PM2.5染毒的人胚肺细胞基因差异表达研究

目的寻找与大气污染致病相关的相关基因,为阐明大气污染致病的生物学机制提供科学依据。方法采用mRNA斑点杂交鉴定技术,克隆经采暖季≥75μg/m3 PM2.5与非采暖季<75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞,分析其间的基因表达差异。放免法测定炎性因子TNF-α、IL-2、IL-6和IL-8。结果与对照组比较,PM2.5>100μg/mL染毒24h后,WI-38人胚肺细胞细胞因子TNF-α、IL-6和IL-8明显升高,IL-2明显减低(P<0.05)。不同浓度PM2.5处理的WI-38人胚肺细胞间差异表达的基因片段,可见48份基因样本在350bp处出现清晰条带;该48份基因样本经斑点杂交后,Tester cDNA杂交的48个斑点中,41份可见黑褐色斑点,而同样样本与Driver cDNA杂交的该48份样本均未见明显显色。结论 PM2.5能诱导WI-38人胚肺细胞产生炎性损伤,≥75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞存在明显的基因损伤。

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.

高氧和脂多糖诱导人胚肺成纤维细胞NF-κB的动态表达

目的近年研究表明,支气管肺发育不良的发生与宫内炎性因子暴露和出生后机械通气、高氧暴露有着密切的联系。该研究选取人胚肺成纤维细胞,模拟炎性暴露和高氧暴露环境,探讨高氧和脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)对人胚肺成纤维细胞核转录因子NF-κB表达的影响。方法60%高氧,LPS(100ng/mL)及两者同时刺激人胚肺成纤维细胞0.5,1,2及4h,用免疫细胞化学观察其亚基p50及p65的核转位,RT-PCR方法检测NF-κBp50和p65mRNA。结果LPS的直接刺激迅速诱导p50及p65的核转位,0.5h即可致NF-κB迅速活化,1h达到高峰,后逐渐下降;高氧刺激诱导p50及p65核转位,1h达高峰,之后迅速下降;高氧和LPS联合刺激p50及p65亚基核转位,在2h达高峰,然后缓慢下降。但4h时活化效应明显高于LPS组和高氧组。结论同时暴露于高氧和LPS组人胚肺成纤维细胞中NF-κB的活化比单独暴露因素下活化更为显著,活化持续时间更长,提示暴露于宫内炎性环境中的患儿生后又高氧/辅助通气更容易导致肺部疾病。

几种化合物对石棉诱导人胚肺细胞产生超氧阴离子的抑制作用

用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或硒酸钠溶液浸泡温石棉１ 小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ） 细胞共同孵育，测定培养液中超氧阴离子（Ｏ－２ ） 含量。结果显示，温石棉可诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。但与未处理温石棉组相比，经３ 种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞产生的Ｏ－２ 量明显降低，其抑制率随化合物浓度的增加而增高，呈一定的剂量依赖性。表明用上述３ 种化合物预处理温石棉，均可抑制其诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。

香烟烟雾对2种肺细胞的DNA损伤与修复

目的探讨经香烟烟雾溶液染毒的人正常肺间质细胞和人肺腺癌细胞的DNA损伤及其修复效应。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF)和人肺腺癌A549细胞,以二甲基亚砜(DMSO)和磷酸缓冲液(PBS)作为吸收液,采集香烟主流烟雾。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定香烟烟雾-DMSO吸收液和香烟烟雾-PBS吸收液(分别简称DMSO烟液和PBS烟液)的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的毒性(分别以DMSO和PBS为阴性对照),以无明显细胞毒性的浓度进行彗星实验(分别以DMSO和PBS为阴性对照,以重铬酸钾为阳性对照),测定细胞的DNA损伤及修复情况。结果DMSO烟液原液及其1/2稀释液染毒的细胞存活率低于80%,而PBS烟液染毒的细胞存活率均高于80%。DMSO烟液的1/4、1/8、1/16倍稀释液以及PBS烟液的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系。DNA损伤在两种细胞间差异无统计学意义(P>0.05),但DMSO烟液所致的DNA损伤高于PBS烟液(P<0.01)。细胞在去除受试物后培养30min时开始修复,随着修复时间的延长,拖尾细胞数减少,DNA迁移长度缩短(P<0.05),且A549细胞修复得更快(P<0.05)。结论DMSO烟液的细胞毒性和遗传毒性均高于PBS烟液。香烟烟雾对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤差异不明显,A549细胞的DNA损伤修复能力较HLF细胞强。

烹调油烟冷凝物诱导人胚肺细胞恶性转化研究

为探讨和评价烹调油烟对人体潜在的致癌危险性 ,运用人胚肺二倍体细胞转化系统 ,检测烹调油烟冷凝物对细胞的转化作用以及转化细胞的生物学特性。结果 :各剂量的烹调油烟冷凝物均可诱导细胞产生典型转化灶 ,剂量反应关系明显 (r= 0 973 9) ,表现出恶性细胞特征。提示烹调油烟对人体具有潜在致癌危险性。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度改变的抑制作用

为了探讨研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。用Flou3/AM标记体外培养的HEL细胞内Ca2+后,将不同浓度的温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡过的温石棉与HEL细胞作用1h,荧光分光光度计测定细胞内[Ca2+]i。结果显示,20、40、80μg/ml温石棉单独作用于HEL细胞1h,可使HEL细胞内[Ca2+]i浓度分别升高3.0%、53.1%和116.7%,且具有明显的剂量-效应关系(r=0·976,P=0·024)。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞内[Ca2+]i浓度均明显低于未处理温石棉组。得出结论,温石棉可致人胚肺细胞内游离钙离子浓度升高,但用三种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度的升高。

麻杏石甘汤对腺病毒感染的HELF细胞因子蛋白表达影响的实验研究

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3型腺病毒攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测不同组细胞TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达,并进行比较。结果病毒对照组较正常细胞组之TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α蛋白表达均明显增强(P<0.01),含药血清组可显著降低3型腺病毒攻击后HELF的TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达(P<0.01)。结论麻杏石甘汤可下调3型腺病毒感染后TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一。

肺表面活性物质相关蛋白A在人胎肺发育中的表达及意义

[目的]检测肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)在人胎肺发育过程中的表达特征,探讨其在胎肺上皮细胞发育、分化及其肺功能建立中的作用.[方法]由孕妇自愿捐献的胎龄为10～34周胎肺组织37例及生后28 d内正常肺组织2例,用免疫组织化学技术检测SP-A的表达.[结果]SP-A在胎肺发育第10周已开始表达,定位于上皮细胞胞浆,发育早期主要表达于高柱状的未分化的上皮细胞,随着支气管的发育分化,由呼吸道的近端逐渐向远端迁移;到原始肺泡期稳定表达于AECⅡ及其前体细胞,其反应强度增加不明显,出生后SP-A阳性反应较出生前明显增强;纤毛细胞和Ⅰ型肺泡细胞无表达.[结论]在胎肺发育的过程中,SP-A的分泌反应着肺泡上皮细胞发育成熟,出生前大多以储存状态为主,或称为待分泌状态,出生后快速分泌,与适应出生后执行功能的需要密切相关.

温石棉的遗传毒性及三种化合物的阻断作用

为了寻求一种理想的石棉表面改性剂，本研究观察了柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠对温石棉诱导人胚肺（ＨＥＬ）细胞染色体改变的影响。结果显示，温石棉可致ＨＥＬ细胞染色体畸变率和姊妹染色单体交换率升高。经三种化合物预处理的温石棉，其所诱导的ＨＥＬ细胞的染色体畸变率和姊妹染色单体交换率均低于未处理温石棉组。提示，用三种化合物预处理温石棉，均可降低温石棉对细胞染色体的损伤作用。

低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞适应性反应研究

目的通过研究低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)适应性反应的量效关系,建立氧化适应模式,探讨真核细胞过氧化适应性反应及其可能机理。方法应用HLF,以HQ为诱导剂,用不同剂量HQ对HLF细胞预处理12h后,再用80μmol LHQ攻击HLF1h,结合微核试验、彗星实验及细胞周期变化,观察低剂量HQ诱导的适应性反应。结果在细胞整体活力水平,0.001μmol L、0.01μmol LHQ预处理可以提高HLF对攻击剂量80.0μmol L的耐受性。与对照组比较,从0.5μmol LHQ剂量开始预处理的HLF的微核率和核异常率明显增加(P<0.05),细胞出现不同程度拖尾现象,拖尾率及彗星尾长显著增加(P<0.01),从0.1μmol L预处理剂量开始,随着预处理剂量的增加,属3级、4级DNA损伤细胞比例逐渐增加。细胞周期出现G2期阻滞,G1期比例减少。与细胞仅大剂量攻击比较,0～0.1μmol L预处理的HLF微核率和核异常率、尾长及拖尾率均明显减少、DNA重度损伤比例明显下降(P<0.05)。相关分析表明,预处理剂量从0.1μmol L开始,HLF的微核率、核异常率、拖尾率及彗星尾长与HQ预处理剂量间均存在剂量反应关系。结论低剂量HQ预处理HLF后再用高剂量去攻击,出现不同程度的适应性反应。

巢蛋白在人胚胎肺中的表达

目的:研究不同时期人胚胎肺中巢蛋白的表达变化,探讨巢蛋白在肺发育过程中的作用。方法:取3～8月人胚胎肺组织,常规石蜡切片,采用免疫组织化学法检测巢蛋白在胚胎肺中的表达及分布。结果:各胎龄段(3～8月)肺均有巢蛋白的表达,巢蛋白阳性细胞主要分布于肺内支气管旁和血管中,而在支气管上皮中未发现阳性细胞。结论:正常人胚胎肺中有巢蛋白的表达,随着胎龄的增加,巢蛋白表达量下降。

苯并(a)芘通过活化蛋白-1非依赖性通路诱导细胞中p53蛋白过表达及高磷酸化

目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。