大黄肝毒性的精确亚细胞器靶向分析

[目的]药物性肝损伤(DILI)是急性肝功能衰竭的主要原因,对人类健康构成重大挑战。大黄(Rheumofficinale Baill,Da Huang)因其具有清热利尿的作用已应用于临床。然而,它对肝脏不同细胞器的毒性作用需要进一步验证。[方法]分析大黄肝毒性的潜在靶点及其与微粒体、线粒体、内质网(ER)、高尔基体(GA)和溶酶体等五种主要细胞器的潜在损伤关系。通过整合传统中药(ITCM)数据库、HERB数据库和网络药理学,我们分离和纯化了不同的细胞器,将它们与大黄的不同组分和单体在三磷酸腺苷(ATP)培养系统中孵育,并使用粒度分析和分子生物学实验检查了细胞器的结构和功能变化,以评估大黄是否会对肝脏主要细胞器造成损伤。[结果]通过虚拟预测和实验验证相结合,我们的研究证实,从大黄蒽醌中分离的大黄素、大黄鞣质中的儿茶素和大黄有机酸中的棕榈酸对代表性细胞器造成了最显著的功能和结构损伤。在所有单体化合物中,大黄素对微粒体、线粒体、内质网和溶酶体的损伤最大;儿茶素诱导微粒体和GA损伤;棕榈酸对肝脏微粒体和GA的损伤最大。表明大黄成分可能通过多细胞器损伤发挥肝毒性。[结论]我们的研究结果表明,大黄对不同的细胞器具有不同程度的损伤作用,进而通过损害细胞器的形态和功能来影响细胞的生命活动。本研究为大黄毒性成分和靶点的精细分析提供了理论依据和技术支持。

“九蒸九晒”制何首乌过程中主要指标成分的变化规律研究

目的:探究何首乌炮制过程中相关指标成分含量的变化规律。方法:采用“京帮”黑豆黄酒“九蒸九晒”炮制何首乌,HPLC法测定并比较不同炮制品中大黄素、大黄素甲醚、二苯乙烯苷、没食子酸的含量。结果:随炮制次数增加,大黄素、大黄素甲醚含量先降低再升高后降低趋势,二苯乙烯苷含量降低明显,下降6.9倍,没食子酸含量呈现上升趋势。结论:经“京帮”黑豆黄酒法炮制,何首乌各成分含量变化有一定规律,对传统炮制何首乌工艺有指导意义。

高效液相色谱法同时测定补肾健骨口服液中4种成分的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定补肾健骨口服液中没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等4种成分含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Shim-pack GIST C_(18)(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,进行梯度洗脱;柱温为30℃;进样量为10μL;检测波长为285 nm。结果:4种成分线性关系良好,没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素的线性质量范围分别是0.036 970~0.735 800μg、0.205 400~4.108 000μg、0.014 130~0.282 600μg、0.004 853~0.097 060μg;线性方程分别是Y=2 513.700X-18.223(r=0.998 7),Y=2 165.500X+40.317(r=0.999 8),Y=2 480.400X+0.768(r=0.999 8),Y=3 845.800X+0.778(r=0.999 9)。结论:本试验建立的方法稳定可靠、简便、重复性好、准确度高,可为补肾健骨口服液的含量测定提供参考依据。

HPLC-DAD法同时测定乙肝灵胶囊中5种成分的含量

目的建立同时测定乙肝灵胶囊中五种主要成分含量的高效液相色谱-二极管阵列检测法。方法流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,色谱柱为C_(18)色谱柱,检测波长为232 nm(芍药苷检测),258 nm(大黄素、大黄素、大黄酚检测),323 nm(绿原酸检测)。结果本法线性关系良好(R≥0.995),精密度RSD均小于2%。结论该方法高效便捷,可用于乙肝灵胶囊的质量控制。

中医药调控巨噬细胞改善急性肺损伤

中医药可通过调控肺泡巨噬细胞的吞噬、极化等,提高肺部代谢水平及免疫功能,加速体内毒素排出,减轻肺组织炎性损伤,缓解急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的症状。中医药治疗ALI的单味药多以大黄、黄芩、白头翁、青蒿、白芍、甘草等为主,其中药活性成分主要有大黄素、黄芩苷、白头翁皂苷B4、双氢青蒿素、白芍苷、甘草酸等。中药复方常以清金化痰汤、黄连解毒汤、大承气汤、芪冬活血饮等加减为主。目前,研究存在的问题是,中医药治疗ALI的机制尚不明确,缺乏大样本量及循证研究,研究与临床应用结合不够充分,缺乏系统全面的总结;中药的配伍、使用剂量等依赖医生的个人经验总结,难以精准用药。今后,需基于网络药理学、细胞学、病理学及免疫学等,进一步加强中医药治疗ALI的机制研究及以调控巨噬细胞改善AIL为中心的大样本随机对照研究,寻找高效、安全治疗ALI及预防其并发症的中医药治疗方法。

高效液相色谱法测定何首乌中大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量

何首乌用70%甲醇超声提取浓缩后，用氯仿萃取分离出游离和结合型蒽醌，得到定量用试液。在439nm检测波长下，以甲醇:异丙醇:水=80:10:10（磷酸调pH值为3.0）为流动相，C18填料为固定相，采用HPLC法测定何首乌中蒽醌类成分含量。平均加样回收率大黄素为100.7%，RSD=1.04.%大黄素甲醚为98.7%，RSD=1.77%% 重复性实验的RSD分别为：大黄酸1.18%，大黄素0.79%，大黄素甲醚0.75%（n=10）。

伤速康涂膜剂的质量标准研究

目的建立伤速康涂膜剂的质量标准。方法采用TLC法对处方中大黄、栀子进行定性鉴别,并采用反相高效液相色谱法对涂膜剂中的大黄素、绿原酸进行含量测定。结果大黄素的平均回收率为101.8%,RSD为1.96%,绿原酸的平均回收率为102.1%,RSD为2.0%。结论该方法简便易行,重现性好,可作为本品的质量控制标准。

UPLC-MS/MS法同时测定苦黄注射液中7种成分的含量

目的:建立同时测定苦黄注射液中苦参碱、槐果碱、大黄素、大黄酸、绿原酸、柴胡皂苷a、芦荟大黄素含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18),流动相为甲醇-0.1%甲酸(梯度洗脱),流速为0.5 mL/min,柱温为20℃,进样器温度为10℃,平衡时间为4 min,进样量为5μL。离子化模式为电喷雾电离,源喷射电压分别为5 500、-4 500 V,雾化气压力为4.14×10~5Pa,加热气压力为4.48×10~5Pa,帘气压力为1.72×10~5Pa,离子源温度为600℃,工作模式为多反应监测模式。结果:苦参碱、槐果碱、大黄素、大黄酸、绿原酸、柴胡皂苷a、芦荟大黄素检测质量浓度线性范围分别为1.25~80.0 ng/mL(r=0.999 3)、1.10~70.0 ng/mL(r=0.999 5)、0.16~10.5 ng/mL(r=0.999 3)、2.61~168 ng/mL(r=0.999 3)、1.50~96.0 ng/mL(r=0.999 3)、1.48~94.5 ng/mL(r=0.999 6)、6.11~391 ng/mL(r=0.999 1);定量限分别为0.061、0.109、0.041、1.313、0.500、0.492、3.055 ng/mL,检测限分别为0.025、0.054、0.016、0.656、0.150、0.148、1.528 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤3%;加样回收率分别为95.45%~99.45%(RSD=1.43%,n=6)、97.50%~101.00%(RSD=1.50%,n=6)、95.67%~101.73%(RSD=2.85%,n=6)、97.17%~100.57%(RSD=1.16%,n=6)、95.19%~98.90%(RSD=1.71%,n=6)、95.38%~103.85%(RSD=3.39%,n=6)、95.50%~101.17%(RSD=1.20%,n=6)。结论:该方法简便、高效、准确、可靠,适用于同时测定苦黄注射液中7种有效成分的含量。

大黄素对大鼠肝纤维化形成的影响

研究大黄素对肝纤维化的影响。方法：采用 ４０％的四氯化碳（ ＣＣｌ４）给予大鼠皮下注射诱导肝纤维化，并以小、中和大剂量大黄素（２０、４０和 ８０ｍｇ／ｋｇ体重）干预，测定血清透明质酸、层粘连蛋白及肝组织羟脯氨酸，并通过光镜和电镜观察肝组织病理变化。结果：大黄素组较模型组：（１）血清透明质酸及层粘连蛋白显著降低；（２）肝组织胶原蛋白含量明显减少；（３）肝组织纤维化程度明显改善；（４）肝细胞损伤减轻。结论：大黄素对大鼠肝纤维化具有治疗作用。

正交试验法优选咽炎口含片的提取工艺

目的优选咽炎口含片的提取工艺条件。方法以浸膏得率和有效成分大黄素、绿原酸的含量为指标,采用正交试验法对提取工艺的溶媒用量、提取时间、提取次数3个因素进行考察,优选出咽炎口含片的最佳提取工艺条件。结果最佳提取条件为加10倍量水,提取两次,每次1 h。结论所选提取工艺稳定可行。

HPLC法测定乙肝康复灵胶囊中齐墩果酸及大黄素的含量

目的:建立HPLC法测定乙肝康复灵胶囊中齐墩果酸和大黄素的含量。方法:色谱柱为Phenomenex Luna C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸(70:30);流速1.0 mL·min^(-1);检测波长:齐墩果酸205 nm、大黄素254 nm。结果:齐墩果酸和大黄素的线性范围分别为4.74 ～47.36μg(r=0.9999),0.59～5.86μg(r=1.000);平均回收率(n=9)分别为99.9%,100.6%。结论:本法灵敏、简便、准确,可用于乙肝康复灵胶囊的测定和质量控制。

UPLC-MS/MS法同时测定降脂活血片中5种成分

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定降脂活血片(何首乌、黄芪、川芎等)中5种成分的含有量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Restek UItra Bi Ph色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm);以乙腈(含0.1%甲酸)-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温40℃。结果二苯乙烯苷、丹参酮Ⅱ_A、大黄素、阿魏酸、葛根素分别在4.01~1 027、0.73~187、1.48~380、3.98~1 020、4.285~1 097 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.994 0),平均加样回收率98.57%~101.0%,RSD(n=6)均小于4.79%。结论该方法专属性强,灵敏度高,可用于降脂活血片的质量控制。

UPLC-MS/MS测定金茵清热口服液中绿原酸和大黄素血药浓度及大鼠体内药代动力学研究

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中绿原酸与大黄素的含量,并对金茵清热口服液主要成分绿原酸、大黄素进行药代动力学研究。方法血浆样品经乙酸乙酯液液萃取后,经Waters BEH C_(18)色谱柱分离,采用梯度洗脱模式,流动相为甲醇(A)-2 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液(B)。UPLC-MS/MS法测定不同时间点血浆中绿原酸和大黄素血药浓度,多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析,用于监测的离子反应对分别为m/z353.1→191.0(绿原酸)、m/z 150.1→107.0(内标对乙酰氨基酚)和m/z 269.1→241.0(大黄素),DAS3.2.7数据处理软件对数据进行统计学处理。结果绿原酸在2.5□2500 ng·mL^(-1),大黄素在1.9□1900 ng·mL^(-1),具有良好的线性关系,平均回收率均大于74%,日内和日间精密度(相对标准偏差,RSD)均<9.4%。绿原酸药动学参数:t_(1/2)=(426.5±43.2)min,AUC_(0-t)=(255.2±73.2)ng·mL^(-1)·h.AUC_(0-∞)=(271.1±93.3)ng·mL^(-1)·h,T_(max)=(50.0±6.1)min;大黄素药动学参数为:t_(1/2)=(129.0±44.6)min,AUC_(0-t)=(147.4±93.0)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)=(22.5±4.4)ng·mL^(-1)·h,T_(max)=(118.0±12.3)min。结论本研究建立了金茵清热口服液中绿原酸、大黄素在大鼠血药浓度的测定方法,该方法准确、灵敏、稳定性好、回收率高,适用于其药动学的研究。

花藤子颗粒的质量标准

目的 :用HPLC法测定花藤子颗粒中大黄素和齐墩果酸的含量 ,作为制定花藤子颗粒质量标准的依据 .方法 :采用的色谱柱为ODSC1 8柱 ;流动相 :大黄素为甲醇 0 .0 1g/L磷酸水溶液 (90∶1 0 ) ;齐墩果酸为甲醇 水 (90∶1 0 ) ;检测波长 :大黄素为 2 90nm ,齐墩果酸为 2 1 5nm .结果 :大黄素在 0 .1 31 4～ 0 .876 0 μg范围内线性关系良好 ,r=0 .9997.平均回收率为 99.5 6 % ,RSD =2 .2 0 % .齐墩果竣在 1 .1 7～ 7.80 μg范围内线形关系良好 ,r=0 .9998.平均回收率为 1 0 0 .38% ,RSD =1 .4 5 % .结论

虎杖对实验性高尿酸血症小鼠降尿酸有效部位的研究

目的考察虎杖降尿酸作用的有效部位及可能有效物质。方法制造小鼠高尿酸血症模型,观察虎杖不同提取部位的降尿酸作用并研究各部位活性与所含成分的相关性。结果虎杖不同提取部位均能抑制氧嗪酸钾盐所致高尿酸血症小鼠血尿酸,其降尿酸作用与大黄素含量的相关系数为0.7335;与虎杖苷含量的相关系数0.4186。结论虎杖有降尿酸作用,活性部位三氯甲烷部位,降尿酸活性成分为大黄素等。

板蓝根化学成分研究(Ⅴ)

目的 提取分离板蓝根化学成分。方法 菘蓝的根用95％乙醇渗漉,用不同极性溶剂分级萃取,再分别用硅胶和大孔树脂作拄层析分离,根据各化合物的理化常数和波谱数据,鉴定化学结构。结果分离并鉴定了11个化合物。结论 1个为首次从自然界中分离获得,6个为菘蓝属植物中首次报道。

小儿牛黄散有效成分的HPLC定量

用反相HPLC法测定小儿牛黄散中小檗碱、巴马汀、大黄素、绿原酸的含量。用甲醇提取散剂样品,在ODS柱上,用外标法在各自特征吸收处测定。此法具有分离好、灵敏度高、重现性强、操作简单等优点。

高效液相色谱法测定金振口服液中6种成分含量

目的建立测定金振口服液中黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、甘草酸、大黄素和大黄酚6种成分含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.05%磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃,波长切换时间序列采样(黄芩苷0~15.0 min、280 nm,芦荟大黄素、大黄酸15.0~35.0 min、254 nm,甘草酸35.0~39.8 min、237 nm,大黄素、大黄酚39.8~50.0 min、254 nm)。结果黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、甘草酸、大黄素和大黄酚进样量分别在0.043 2~2.162 5μg,0.012 8~0.638 0μg,0.018 5~0.926 0μg,0.035 8~1.792 5μg,0.049 8~2.488 0μg,0.052 9~2.643 5μg范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为98.84%,99.49%,99.89%,100.31%,99.55%,99.54%,RSD分别为1.10%,1.03%,1.49%,1.23%,0.98%,1.19%(n=9)。结论该方法简单快捷,准确可靠,可用于金振口服液的质量控制。

比较六种中草药成分的体外抑菌作用

目的比较种六种中草药成分对金黄色葡萄球菌与大肠埃希杆菌的抑菌作用。方法药物二倍稀释法与菌落计数法联合法测定六种中草药成分对金黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果鱼腥草素钠、松罗酸、大黄素、木犀草素对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用,而在本试验所设浓度范围内不抑制大肠埃希杆菌;硫酸氢黄连素对大肠埃希杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用;穿心莲内酯在本实验范围内对大肠埃希杆菌和金黄色葡萄球菌无抑制作用。结论此六种中草药成分对金黄色葡萄球菌的抑制作用要强于大肠埃希杆菌。

大黄素抑制软脂酸诱导的大鼠VSMCs炎性细胞因子的表达

目的:探讨大黄素对软脂酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症细胞因子CRP、TNF-α及i NOS的影响。方法:培养鉴定原代大鼠VSMCs,使用不同浓度的大黄素(1、10、50μmol·L^(-1))预孵育VSMCs 24 h,再以浓度为100μmol·L^(-1)的软脂酸刺激24 h,使用RT-PCR、western blot分别测定VSMCs CRP、TNF-α、i NOS的mRNA和蛋白的表达变化。结果:浓度为50μmol·L^(-1)的大黄素预孵育大鼠VSMCs 24 h后,与软脂酸组相比,CRP、TNF-α、i NOS的mRNA及蛋白的表达显著性降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大黄素能浓度依赖性地抑制软脂酸诱导的大鼠VSMCs炎性因子的表达,可以通过抗炎而达到抗动脉粥样硬化的作用。