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Expression of Endogenous Retrovirus ev/J gp85 Gene and Analysis of Its Immunoreactivity in Comparison with Exogenous Viral Protein
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作者 Yu-ying YANG Ai-jian QIN +1 位作者 Xiong-yan LIANG Shu-mei TONG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期369-377,共9页
The envelope gene gp85 of ev/J, a new family of endogenous avian retroviral sequences identified recently, has the most extensive nucleotide sequence identity ever described with ALV-J avian leukosis virus. This repor... The envelope gene gp85 of ev/J, a new family of endogenous avian retroviral sequences identified recently, has the most extensive nucleotide sequence identity ever described with ALV-J avian leukosis virus. This report described expression of ev/J envelope gene gp85 derived from commercial meat-type chicken using the Invitrogen Bac-to-Bac baculovirus expression system. The antigenicity and immunoreactivity of the recombinant endogenous gp85 gene product (SU) were analyzed by indirect immunofluorescence, Western blot, indirect and blocking Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) using JE9 monoclonal antibody (MAb) against the envelope protein of ALV-J (ADOL-4817), positive mouse antiserum against the ev/J gp85 SU and sera from chicken naturally infected with ALV-J. The results showed that the ev/J gp85 SU can bind specifically to JE9 MAb and antiserum from chicken naturally infected with ALV-J, and the binding reactivity between exogenous ALV-J gp85 SU and natural positive chicken serum against exogenous ALV-J can be blocked by positive mouse serum against the ev/J gp85 SU. It is concluded that recombinant endogenous gp85 gene product (SU) has close immunological relatedness to the envelope protein of exogenous ALV-J (ADOL-4817 and IMC10200 strain). 展开更多
关键词 avian endogenous retrovirus ev/j Envelope gene gp85 EXPRESSION IMMUNOREACTIVITY
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内源性禽白血病病毒ev/J gp85基因的表达 被引量:1
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作者 梁雄燕 杨玉莹 +1 位作者 张莹 钟蓓 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2009年第1期54-58,共5页
从已构建的质粒pGEM-MTCgp85中酶切回收ev/J gp85基因,通过构建杆状病毒转移载体pFast-Bac1-ev/Jgp85和重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-ev/Jgp85,将ev/Jgp85基因转入Bac-to-Bac高效真核表达系统的Sf9昆虫细胞进行真核表达。间接免疫荧光试... 从已构建的质粒pGEM-MTCgp85中酶切回收ev/J gp85基因,通过构建杆状病毒转移载体pFast-Bac1-ev/Jgp85和重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-ev/Jgp85,将ev/Jgp85基因转入Bac-to-Bac高效真核表达系统的Sf9昆虫细胞进行真核表达。间接免疫荧光试验显示,构建的重组杆状病毒感染的Sf9细胞出现与野生型杆状病毒感染的Sf9细胞阴性对照明显不同的亮绿荧光;Western blot分析DAB显色,重组病毒感染的Sf9细胞蛋白显示出约35ku的阳性条带。结果表明,内源性ev/Jgp85基因在Sf9细胞中得到良好的表达,并且其编码产物完全可以被外源性ALV-J的特异性单抗JE9识别。 展开更多
关键词 内源性禽反转录病毒 ev/j GP85基因 表达
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内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析
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作者 杨玉莹 梁雄燕 +3 位作者 秦爱建 顾玉芳 张莹 钟蓓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期3-7,共5页
用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型e... 用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。 展开更多
关键词 内源性禽白血病病毒ev/j 基因克隆 序列分析
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鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响
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作者 朱丽霖 王后坤 +4 位作者 陈雪阳 刘晶 梁雄燕 方春 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期310-316,共7页
【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(IFIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进... 【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(IFIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进行PCR扩增,利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接,构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序。将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,通过Western blotting鉴定抗体的特异性,利用间接ELISA测定抗体的效价。将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5转染DF-1细胞,24 h后接种ALV-J,通过Western blotting检测DF-1细胞中过表达IFIT5对ALV-J复制的影响。【结果】试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因,并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5。pET-28a-IFIT5可以表达约56 ku的可溶性蛋白His-IFIT5,Western blotting结果显示,制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的IFIT5蛋白,效价为1∶32 000。pcDNA5-flag-IFIT5能在DF-1细胞中高效表达,且在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。【结论】本研究制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体具有较高的反应性和特异性;在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。本试验结果为深入研究IFIT5蛋白的生物学功能提供参考。 展开更多
关键词 IFIT5基因 j型禽白血病病毒(ALV-j) 原核表达 多克隆抗体
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1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 陈玫婷 郑从森 +6 位作者 梁泽贤 林巧儿 常传哲 周俊 冯军 李林林 覃丽梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1785-1795,共11页
【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行... 【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%~94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个的B细胞线性表位。该env蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大,为38.29%。【结论】env基因是导致ALV遗传变异的关键基因,其编码的囊膜蛋白env具有不稳定性,存在多个蛋白修饰位点和抗原表位。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) j亚群 ENV基因 生物信息学
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ALVE的筛查整合及其对坝上长尾鸡生产性能的影响
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作者 高启萌 董娇娇 +4 位作者 王涛 郭艳丽 冯凯迪 王茂森 李兰会 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第12期71-76,共6页
试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝... 试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝上长尾鸡中ALVE的整合,对ALVE-6和ALVE-B5整合与坝上长尾鸡产蛋、体重的关系进行双因素方差分析。配对卡方检验分析ALVE-6整合与ALV-p27抗原阳性的关联。结果发现:24条白血病病毒基因组分化为ALVE、禽外源性白血病病毒K亚群(ALVK)和ALVE与ALVK重组(ALVK+E/K)、禽外源性白血病病毒A亚群(ALVA)和ALVE与ALVA重组(ALVA+E/A)三大分支。病毒基因组的env区分化系数最高为0.641,3′UTR区分化系数最低为0.050,相对保守。4种ALVE在坝上长尾鸡基因组中有整合,ALVE-6的整合率最高,为87.63%。与ALVE-6阴性相比,ALVE-6阳性坝上长尾鸡的体重显著提高(P<0.05)。ALVE-6整合的PCR检测结果与ALV-p27抗原ELISA检测结果相互独立。研究表明,坝上长尾鸡具有较高的ALVE-6整合率,ALVE-6整合对坝上长尾鸡的生产性能有提升作用,且ALVE-6的整合不影响ALV-p27抗原检测结果,该研究结果为ALVE在选育生产性能优良的坝上长尾鸡中的应用提供了支持。 展开更多
关键词 禽内源性白血病病毒 坝上长尾鸡 ALVE-6 生产性能
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我国鸡群J亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控——对我国动物疫病防控的启示 被引量:12
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作者 崔治中 《现代畜牧兽医》 2015年第1期30-32,共3页
禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)是一种能引起禽类多种类型肿瘤的反转录病毒,包括A-J等10个亚群。其中J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of avian leukosis virus,ALV-J)是20世纪80年代末Payne等首先从肉鸡中分离鉴定出来的亚群。... 禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)是一种能引起禽类多种类型肿瘤的反转录病毒,包括A-J等10个亚群。其中J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of avian leukosis virus,ALV-J)是20世纪80年代末Payne等首先从肉鸡中分离鉴定出来的亚群。自1999年我国首次分离ALV-J以来,ALV-J已从肉用鸡群向蛋用型鸡群和地方品系鸡群传播。本文对我国鸡群J亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控作以简要介绍,以期对我国动物疫病防控产生新的启示。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 j亚群 疫病防控
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绿壳蛋鸡MDV与J亚群外源性ALV混合感染病原的鉴定及主要基因序列分析 被引量:4
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作者 张喜懿 温贵兰 +3 位作者 文明 欧德渊 陈广 张小波 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第13期68-74,147,共8页
为了确定贵州省某养殖场病死绿壳蛋鸡的发病原因,试验对送检的病死鸡进行剖检观察,无菌采集病变组织提取核酸并进行基因克隆及测序,分析同源性并构建遗传进化树。结果表明:3只病死鸡剖检可见脾脏肿大、质脆;肝脏肿大,有肿瘤结节;腺胃肿... 为了确定贵州省某养殖场病死绿壳蛋鸡的发病原因,试验对送检的病死鸡进行剖检观察,无菌采集病变组织提取核酸并进行基因克隆及测序,分析同源性并构建遗传进化树。结果表明:3只病死鸡剖检可见脾脏肿大、质脆;肝脏肿大,有肿瘤结节;腺胃肿大。马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)核酸检测仅MDV meq基因出现与预期片段大小相符的特异性扩增条带;禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)分离鉴定仅ALV J gp85基因出现与预期片段大小相符的特异性扩增条带;将目的片段克隆至pMD19-T载体上,经测序获得3个MDV meq基因片段和3个ALV J gp85基因片段,核苷酸序列大小分别约为1020,930 bp;获得的3株MDV毒株和3株ALV毒株与GenBank中相应参考毒株的核苷酸序列同源性分别为98.6%~100%、46.1%~99.6%,分别与参考毒株G2株和HPRS103株在同一分支上,亲缘关系较近。说明贵州省某养殖场鸡只的死亡原因是MDV与J亚群外源性ALV混合感染所致。 展开更多
关键词 绿壳蛋鸡 马立克病病毒(MDV) j亚群外源性禽白血病病毒(ALV-j) 混合感染 病原鉴定 序列分析
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2株J亚群禽白血病病毒毒株的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量:1
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作者 郭雨欣 游广炬 +3 位作者 李晓齐 高丽 郑世军 王永强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期7-12,18,共7页
为了解我国J亚群禽白血病病毒(ALV)的流行特点和进化趋势,本试验从河北某鸡场疑似禽白血病的临床发病鸡的病料组织中,分离得到2株ALV-J毒株,分别命名为CAU2019和CAU2020。通过聚合酶链式反应(PCR)技术分段扩增分离株的全病毒基因组,连接... 为了解我国J亚群禽白血病病毒(ALV)的流行特点和进化趋势,本试验从河北某鸡场疑似禽白血病的临床发病鸡的病料组织中,分离得到2株ALV-J毒株,分别命名为CAU2019和CAU2020。通过聚合酶链式反应(PCR)技术分段扩增分离株的全病毒基因组,连接pEASY-Blunt Zero载体后进行序列测定,并对获得的基因组序列与ALV各亚群毒株序列进行序列比对及遗传进化分析。结果表明,2个分离株与ALV各亚群毒株的gag和pol段基因相对保守,而LTR、gp85及gp37段基因变异较大。此外,CAU2019在3′UTR处有2段长度为30 bp和11 bp的不连续的碱基缺失,CAU2020在3′UTR处有1段长度为29 bp的碱基缺失。由gp85和LTR基因构建的遗传进化树可知,2个分离株在遗传关系上与J亚群毒株JS16JH9亲缘关系最近。结果表明本试验分离的2株病毒均为J亚群禽白血病病毒毒株,并且为国内ALV-J流行株的突变株。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 j亚群 分离鉴定 全基因组序列分析
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七彩山鸡内源性禽白血病病毒的鉴定及其env基因序列分析 被引量:3
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作者 刘健 李凯航 +7 位作者 鞠厚斌 李鑫 葛菲菲 杨德全 杨显超 葛杰 邓波 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期71-75,共5页
为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p2... 为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p27抗原均未被检测到。对ALV p27抗原阳性细胞培养物进行env基因的扩增,最终得到了1株内源性ALV前病毒序列,其基因序列与已知的禽白血病病毒同源性为39.1%~66.7%。以上结果表明,该七彩山鸡品系中存在内源性禽白血病病毒感染。 展开更多
关键词 七彩山鸡 内源性禽白血病病毒 检测 分析
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湖北省鸡群内源性禽白血病病毒分子特征研究 被引量:3
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作者 温凌子 杨玉莹 +3 位作者 梁雄燕 顾玉芳 多婷 易艳芳 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2013年第2期49-52,8,共4页
为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树... 为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树分析发现,相对于内源性病毒原型株E51,江汉鸡的EAV基因组更加接近于原型株EAV-0;江汉鸡和灵山麻鸡的ART-CH核苷酸序列之间相似度很高,但与已知的ART-CH5和ART-CH14核苷酸序列存在较大差异;尽管江汉鸡和灵山麻鸡的ev和ev/J核苷酸与其他已知的ev和ev/J的相关序列差异较小,但其在系统进化树上仍属于不同的分支。该结果说明江汉鸡和灵山麻鸡的内源性病毒基因的进化路径与其他已知的内源性病毒基因的进化路径不同。 展开更多
关键词 内源性禽白血病病毒 ev基因座 ev/j ART-CH
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洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡禽内源性反转录病毒基因检测与分析
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作者 李拓凡 梁雄燕 +2 位作者 叶丽珣 万亮 杨玉莹 《湖北农业科学》 2016年第7期1762-1765,共4页
为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和e... 为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和ev/J三种禽内源性反转录病毒基因序列;核酸序列同源性分析显示,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的EAV、ev loci和ev/J之间的同源性分别为98.8%,99.6%和99.6%;进化树分析显示,两种鸡内的三种禽内源性反转录病毒均分别位于进化树的同一分支,表明洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡内源性反转录病毒具有共同的祖先并且进化路径相似。洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡的ev/J与ALV-J原型株HPRS-103同源性高于98%,且进化树处于同一分支。而与ALV-J国内分离株SD9901、YZ9901毒株的同源性较低,并且进化树位于不同分支,表明这两种鸡的ev/J可能与ALVJ原型株HPRS-103亲缘关系更近,而与国内的外源性ALV-J分离毒株SD9901、YZ9901亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禽内源性反转录病毒 ev LOCI ev/j
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J亚群禽白血病病毒致病机理研究进展 被引量:8
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作者 张帆帆 涂凌云 +6 位作者 李海琴 曾艳兵 康昭风 谭美芳 谭佳 方绍培 杨群 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2288-2293,共6页
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是一种高致癌性反转录病毒,可引发髓性细胞性白血病及各种肿瘤性疾病,并产生免疫抑制,易继发细菌及其他病毒感染。长久以来,禽白血病给养禽业造成了巨大的经济损失,且没有有效的预防和治疗手段,仅依靠禽白血病... J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是一种高致癌性反转录病毒,可引发髓性细胞性白血病及各种肿瘤性疾病,并产生免疫抑制,易继发细菌及其他病毒感染。长久以来,禽白血病给养禽业造成了巨大的经济损失,且没有有效的预防和治疗手段,仅依靠禽白血病病毒的净化,仍不能有效控制禽白血病的流行和蔓延。本文主要阐述ALV-J病毒的感染、复制、致瘤及免疫抑制机制、宿主天然抗病毒过程及其分子机制,对需要进一步深入研究的目标和内容提出了展望。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒(ALV-j) 致病机理 免疫抑制 抗病毒免疫
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